siRNA干扰Geminin基因对脑胶质瘤放疗敏感性的影响

目的观察敲低Geminin对人脑胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。方法利用GEPIA和CGGA数据库分析Geminin在脑胶质瘤组织中的表达及与生存期的相关性。实验分为两组:si-GL2组(对照组)和si-Gem组(干扰组),设计siRNA干扰序列(si-Gem)和阴性对照序列(si-GL2),分别转染脑胶质瘤细胞LN229和U87,qRT-PCR和Western blot检测转染效率及蛋白表达水平。流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后DNA含量分布,进而分析敲低Geminin对DNA再复制的影响。通过AnnexinⅤ-FITC/PI法,用流式细胞术检测敲低Geminin对细胞凋亡的影响。CCK-8细胞增殖实验检测敲低Geminin对胶质瘤细胞LN229和U87放疗敏感性的影响。Western blot检测Geminin相关分子Cdt1和DNA相关损伤蛋白γ-H2AX的表达水平。结果脑胶质瘤组织中Geminin的表达水平高于癌旁正常组织,且Geminin表达越高,脑胶质瘤患者预后越差(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin在LN229和U87细胞中的表达降低(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组敲低Geminin可诱导脑胶质瘤细胞出现DNA再复制表型、细胞凋亡比例显著增加(P<0.05),脑胶质瘤细胞对放疗敏感性增强(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin相关分子Cdt1蛋白表达水平降低,γ-H2AX的蛋白表达水平升高。结论敲低Geminin可以诱导脑胶质瘤细胞出现DNA再复制表型,造成DNA复制压力,并引起自发性细胞周期阻滞及细胞凋亡增多,进而增强脑胶质瘤细胞放疗敏感性,Geminin有望成为脑胶质瘤治疗的新靶点。

非小细胞肺癌中Geminin、Ki-67的表达及其预后意义

目的观察Geminin和Ki-67单独和联合使用后在非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,探讨二者表达与患者预后的关系。方法回顾性分析96例NSCLC的免疫表型与预后的关系。结果 96例NSCLC中不同性别患者Ki-67增殖指数有差异(P<0.05),不同性别和年龄患者Geminin表达有差异(P<0.05);Ki-67在癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05);Ki-67与Geminin的表达具有相关性(P<0.05);随访52例患者,中位生存时间为43.6个月,3年生存率为46%,Ki-67和Geminin高表达者累积生存率明显低于低表达者(P<0.05);对随访病例进行细胞周期分期,结果显示患者的生存时间差异有显著性(P<0.05)。结论 NSCLC中Ki-67和Geminin的表达具有一定特异性,联合使用二者对随访病例进行细胞周期分期,同时对预后进行评估具有一定可行性。

细胞周期相关因子geminin在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达

目的研究细胞周期相关因子geminin蛋白及其mRNA在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达。方法以16例首次诊断且未治疗的急性淋巴细胞白血病患儿为实验组,16例正常儿童为对照组,采集其静脉血进行淋巴细胞分离,应用免疫组织化学染色法检测geminin蛋白在两组中的表达;用RT-PCR法检测geminin mRNA在两组中的表达。使用SPSS软件进行数据分析。结果实验组geminin蛋白及geminin mRNA表达均高于对照组(P均<0.05);对照组geminin蛋白有表达,但其相应的mRNA不表达。结论急性淋巴细胞性白血病细胞geminin过度表达,可能参与儿童急性淋巴细胞白血病的发生发展;正常淋巴细胞geminin存在蛋白与其相应的mRNA表达不一致的现象。

RNA干扰Geminin基因表达对脑胶质瘤恶性生物学行为的影响

目的:探讨Geminin基因沉默对人脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响及可能的发生机制。方法:选取南通大学附属医院脑外科2018—2019年手术切除的20例神经胶质瘤患者的新鲜标本,qRT-PCR结合基因表达谱数据动态分析(gene expression profilling interactive analysis,GEPIA)数据库分析胶质瘤组织中Geminin基因的表达;设计有效靶向沉默Geminin基因的siRNA序列和阴性对照序列,分别转染胶质瘤细胞U251,作为si-Geminin组和si-NC组,48 h后,qRT-PCR检测各组中Geminin mRNA的表达情况;分别采用CCK-8法、Transwell实验、Western blot法检测各组细胞的增殖情况、迁移和侵袭能力及Geminin、HBO1、Cdt1的蛋白表达水平。结果:qRT-PCR及GEPIA数据库分析结果显示脑胶质瘤组织中Geminin的表达明显高于瘤旁组织;siRNA干扰Geminin基因能显著抑制其在U251细胞中的表达;与control组及si-NC组相比,si-Geminin组细胞的增殖能力、细胞迁移和细胞侵袭的数量均显著降低,Geminin、HBO1及Cdt1蛋白表达水平显著降低。结论:Geminin在脑胶质瘤中高表达,敲除其表达可能通过下调HBO1及Cdt1抑制U251细胞的增殖、迁移和侵袭,Geminin有望成为人脑胶质瘤治疗新的分子靶点。

多功能蛋白Geminin的研究进展

Geminin是一种定位于核内的多功能小分子蛋白,具有相对复杂的结构模式,在细胞增殖、胚胎发育及肿瘤发生等多方面均发挥重要作用.它通过调节细胞周期时相中的重要事件作用于细胞增殖:经多种途径参与DNA复制的调节;抑制中心体重复复制;推进G2/M期和维持正常胞质分裂等.在不同发育阶段,Geminin可作为抑制因子或是诱导因子参与胚胎发育的调节,特别是在神经形成方面.通过与同源异型盒基因或蛋白Six3及Hox等的相互作用,Geminin分别在眼睛发育及胚胎发育过程中起调节作用,并且表现出在细胞增殖与分化中协调因子的功能.近年来Geminin在肿瘤中的作用已成为研究的重点,它可作为评价肿瘤发生进程和预后的标志分子,并可望是一个新的肿瘤治疗的作用靶点.对Geminin活性的调节主要表现在转录水平和转录后水平,转录后水平的调节可能占主要地位.

CDK4和Geminin在胶质瘤中的表达及其与预后的关系

目的:探讨细胞周期依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)和Geminin在胶质瘤中的表达及其临床病理意义。方法:采用免疫组织化学方法,检测70例胶质瘤中CDK4和Geminin的表达,分析CDK4和Geminin的表达和其相关性,以及二者与胶质瘤临床病理因素及生存时间的关系。结果:CDK4、Geminin在胶质瘤中的总阳性率分别为70.0%(49/70)、75.7%(53/70);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中CDK4阳性率分别为52.8%(19/36)、84.6%(22/26)、100.0%(8/8),Geminin阳性率分别为58.3%(21/36)、92.3%(24/26)、100.0%(8/8),CDK4和Geminin在不同级别胶质瘤中的表达有显著差异(P<0.05)。且二者表达呈正相关;CDK4、Geminin阳性表达与肿瘤大小及细胞核分裂像多少有关(P<0.05),与患者年龄、性别以及肿瘤组织有无坏死无关(P>0.05);Kaplan-Meier单因素统计分析结果显示CDK4、Geminin阳性表达组的患者术后生存时间明显短于CDK4、Geminin阴性表达组(P<0.001)。结论:CDK4和Geminin表达与胶质瘤的分级、预后有关,联合检测CDK4和Geminin有助于判断胶质瘤恶性程度及评估预后。

Geminin在血管平滑肌细胞分化表型转化中的介导作用

目的通过比较静止状态的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)与血清刺激后的VSMCs在分化表型改变中Geminin的表达变化情况,探讨Geminin对VSMCs表型转化的影响。方法实验设置静止状态(血清饥饿)对照组、血清刺激组,研究不同时相两个组Geminin的分布、活性及表达水平的差异。血清饥饿法可以诱导出VSMCs表型分化及活性差异;免疫荧光染色后激光共聚焦显微镜观察Geminin核内定位;应用PCR检测Geminin基因表达的变化;Western blot检测Geminin蛋白、VSMC合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及收缩型标志物平滑肌肌动蛋白相关蛋白(actin-related proteins,ARP)表达的变化。结果①静止状态下(血清饥饿)VSMCs以收缩型为主,血清刺激后以合成型为主;②静止状态Geminin几乎全部存在于细胞质内,而血清刺激后Geminin几乎全部定位于胞核内;③GemininmRNA在血清刺激时明显升高,且在刺激48h时差异表达最明显,与无血清比较差异具有统计学意义(P<0.05);④Geminin蛋白和骨桥蛋白在血清刺激时均明显升高,与无血清比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Geminin参与介导了VSMCs由收缩型向合成型的转化。

人T淋巴细胞白血病系Jurkat细胞中Cdt1和Geminin的表达

目的探讨细胞复制允许因子Cdt1和复制抑制因子Geminin在白血病细胞中的表达,为阐明白血病的发病机制提供理伦依据。方法培养白血病细胞系Jurkat细胞,以处于对数生长期的Jurkat细胞作实验组,以正常人外周血淋巴细胞作对照组。利用RT-PCR方法检测细胞中Cdt1和Geminin mRNA的表达,进行半定量分析;利用流式细胞仪对细胞荧光强度进行定量分析,以检测细胞中的Cdt1和Geminin蛋白的表达。结果 (1)处于对数生长期的Jurkat细胞Cdt1 mRNA及蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。(2)处于对数生长期的Jurkat细胞Geminin mRNA及蛋白的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论人T淋巴细胞性白血病细胞系Jurkat细胞,Cdt1、Geminin的表达水平较正常人外周血淋巴细胞显著增高,Cdt1、Geminin可能与白血病细胞恶性增殖有关。

细胞周期相关因子cdt1和geminin的平衡

cdt1和geminin是重要的细胞周期相关因子,参与细胞周期的调控cdt1与某些疾病的发生有着密切的关系,geminin是cdt1的抑制因子,他们间的平衡对DNA复制;;基因稳定以及细胞周期的调控起着重要的作用。

HBO1和Geminin在胶质瘤中的表达及与临床病理特征的关系

目的:研究组蛋白乙酰转移酶结合起始复合物1(histone acetyltransferase binding to ORC1,HBO1)和Geminin在胶质瘤中表达及其与胶质瘤临床病理特征关系。方法:运用免疫组织化学方法检测59例胶质瘤中HBO1和Geminin的表达,分析HBO1和Geminin二者表达的相关性,以及HBO1与临床病理因素间的关系。结果:HBO1、Geminin的总阳性率分别为78.0%、83.1%。HBO1在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为40.0%(6/15)、81.0%(17/21)、100.0%(23/23),并与肿瘤坏死及细胞核分裂像多少有关(P<0.05)。Geminin在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为53.3%(8/15)、85.7%(18/21)、100.0%(23/23),在不同级别胶质瘤中HBO1和Geminin表达差异有统计学意义(P<0.05),表达强度与肿瘤分级呈正相关(r=27.802、32.340,P<0.05)。胶质瘤中HBO1与Geminin表达呈正相关(r=0.692,P<0.05),在胶质瘤中随着Geminin表达增高,HBO1也表达增高。结论:HBO1和Geminin表达与胶质瘤分级相关,联合检测HBO1和Geminin有助于判断胶质瘤恶性程度及预后。

Geminin:一个潜在的肿瘤治疗靶点

Geminin通过与Cdt1的相互作用抑制DNA的重复复制,保证在一个细胞周期内DNA仅被复制一次。Geminin在肿瘤细胞系及肿瘤组织中高水平表达,与肿瘤临床病理学的许多指标相关,可指示的肿瘤的预后。但当降低Geminin的表达水平时,在肿瘤细胞系出现了DNA的重复复制,细胞增殖停止,而正常细胞系的DNA复制则不受影响,细胞正常增殖。因此,以Geminin为治疗靶点能够选择性的抑制肿瘤细胞生长而不影响正常细胞,其有望成为一个理想的肿瘤治疗靶点。

Geminin对动脉粥样硬化性疾病影响的研究现状

细胞核内存在的一种具有复杂分子结构及功能的小分子蛋白,被称为Geminin。它参与DNA复制、细胞周期及胚胎发育的调节和干细胞自我更新及分化决定等。近年来Geminin在血管平滑肌增殖、肿瘤、胚胎发育、干细胞功能调节等领域中已成为研究的热点。现重点综述Geminin对血管平滑肌增殖调控和对心脏发育的影响,为动脉粥样硬化性疾病及血管成形术后再狭窄的分子机制的研究提供了新思路,并为心肌梗死致心肌坏死后心肌再生的可能性提供理论基础。

Geminin基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Geminin基因的表达观测VSMCs增殖情况及表型标志物。方法分别利用RT-PCR,Western blot检测VSMCs中Geminin基因、蛋白表达的变化,筛选出干扰效果最为显著的序列用于构建慢病毒包裹的稳定干扰模型。应用[3H]-TdR、EdU掺入试验检测VSMCs增殖的情况;同时使用Western blot分别检测干扰前后相关标志性基因的表达。结果①siRNA转染后,以第1亚组干扰效果最为显著,与另外2个阳性亚组及对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。②[3H]-TdR、EdU掺入实验显示:阳性干扰组的掺入量较两对照组明显升高(P<0.05)。③siRNA转染使Geminin基因表达减弱后,阳性组VSMCs合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平显著升高,收缩型标志物平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,α-Actin)表达水平明显降低,与对照组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰介导的Geminin基因沉寂可显著增强VSMCs的增殖能力,并有助于VSMCs的表型由收缩型向合成型转化。

Geminin基因过表达对VSMCs表型转化的影响

目的探讨Geminin基因过表达对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化的影响。方法构建真核表达载体pEGFP-N1-Geminin,脂质体2000介导转染不同表型(去分化型和分化型)的大鼠VSMCs株,设置阳性组、阴性组和空白组(n=3),检测转染效果、VSMCs主要表型标志物(α-actin、OPN)和肌动蛋白相关蛋白1(actinrelated protein,ARP1)的变化情况。结果 Geminin基因成功过表达VSMCs株。与2个对照组(阴性组和空白组)比较,分化型VSMCs中表型标志物(α-actin和OPN)及ARP1含量变化不大;去分化型VSMCs中,OPN在阳性组中表达下调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P<0.05),α-actin和ARP1在阳性组中表达上调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P<0.05),免疫共沉淀实验结果提示经protein G plus-Agarose沉淀ARP1相互作用蛋白复合物后,用Geminin抗体进行Western blot检测,可以检测到Geminin的表达。结论 Geminin基因过表达有助于VSMCs由去分化型向分化型转化;免疫共沉淀结果提示Geminin和ARP1之间存在相互作用,ARP1可能参与了上述VSMCs表型转化过程。

细胞周期相关因子cdt1和geminin在急性白血病患者中的表达(英文)

本研究旨在检测geminin和cdt1在初诊急性白血病(AL)患者外周血或骨髓细胞中的表达水平,并进一步探讨其在AL发病机制中的作用。采用SYBR Green实时定量逆转录聚合酶链反应(SYBR-RT-PCR)技术,检测初诊AL患者外周血或骨髓细胞geminin和cdt1mRNA的表达。结果表明:13例ALL初诊患者外周血中有10例孪蛋白(geminin)和cdt1mRNA表达阳性,阳性率为76.92%;14例AML初诊患者外周血中有9例表达阳性,阳性率为64.29%;而正常对照组中无阳性表达(0/10)。ALL和AML初诊患者骨髓细胞中geminin和cdt1mRNA表达(ALL:108.06±67.34,52.37±35.16;AML;62.66±58.69,26.68±22.29)均高于对照组(11.81±2.83,7.32±5.77),差异有统计学意义(p<0.01,p<0.05);34例初诊AL患者骨髓细胞中geminin和cdt1mRNA的表达呈明显的正相关(r=0.55,p<0.01)。结论 :geminin与cdt1在初诊AL患者中表达增高,且两者在AL骨髓细胞呈正相关,其过度表达可能在AL的发病机制中起重要作用。

急性髓细胞白血病病人骨髓geminin和cdt1基因表达及意义

目的探讨急性髓细胞白血病（AML）病人骨髓细胞中geminin和cdt1基因表达水平及其与AML发病和预后关系。方法采用SYBR Green实时定量逆转录聚合酶链反应（SYBR-RT-PCR）技术,检测47例不同病程AML病人（包括25例初治者,16例完全缓解者,6例未缓解或复发者）骨髓细胞中geminin和cdt1 mRNA的表达,并对25例初治病人进行6个月随访。结果初治、未缓解或复发AML病人geminin和cdt1表达较对照组及完全缓解组高,差异有显著性（H=4.95、3.22,Z=2.67~4.95,P〈0.01）;完全缓解组geminin和cdt1表达水平与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。AML病人骨髓细胞中geminin和cdt1的表达呈明显正相关（r=0.59,P〈0.01）;且初治组、完全缓解组及未缓解或复发组两者的表达均呈明显正相关（r=0.49~0.87,P〈0.05）。25例AML初治病人随访6个月,死亡6例,存活19例,死亡组geminin表达高于存活组,差异有统计学意义（t=2.16,P〈0.05）,而两组cdt1表达差异无显著性（t=0.61,P〉0.05）。结论 AML病人骨髓细胞中geminin和cdt1表达可能与AML的病程有关;geminin在初治病人中的高表达可能是AML病人的不良预后因子。

Geminin表达水平与脑胶质瘤病人预后的关系

目的探讨Geminin表达水平与脑胶质瘤病人预后的关系。方法收集2014年1月~2017年1月手术切除并经术后病理证实的脑胶质瘤标本90例,以及因颅脑损伤内减压术切除的非肿瘤脑组织50,采用PCR检测Geminin mRNA表达水平。90例脑胶质瘤根据Geminin mRNA表达水平中位数分为高表达组和低表达组。90例胶质瘤病人随访时间截止2020年1月1日或者病人死亡,随访32~55个月,中位随访时间41个月。结果随访期间,死亡80例,存活10例。脑胶质瘤组织Geminin mRNA表达水平明显高于非肿瘤脑组织(P<0.05)。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示,Geminin mRNA过表达是脑胶质瘤病人死亡的独立危险因素(HR=1.874;95%CI 1.323-2.295;P=0.043)。Kaplan-Meier生存曲线显示,低表达组中位生存期较高表达组明显延长(P<0.05)。结论脑胶质瘤Geminin呈高表达,是病人生存预后不良的独立危险因素。

老年宫颈鳞癌术后组织中Geminin、组织蛋白酶D和增殖细胞标志物67表达的关系

目的探讨老年子宫颈鳞状细胞癌中细胞周期相关因子Geminin、组织蛋白酶(Cath)-D和增殖细胞标志物(Ki)67的表达特点及临床意义。方法以132例老年子宫颈鳞状细胞癌术后组织及临床资料作为观察组,以70例老年慢性宫颈炎组织作为对照组,应用流式细胞术检测两组Geminin、Cath-D和Ki67的表达。结果观察组Geminin、Cath-D和Ki67的表达量明显高于对照组,观察组Geminin、Cath-D和Ki67的表达与肿瘤的最大径、是否累及宫颈管及临床分期密切相关。Geminin、Cath-D均与Ki67表达呈正相关性。结论老年子宫颈鳞癌组织中Geminin、Cath-D和Ki67高表达,三者协同作用对肿瘤的进展有促进作用,术后联合检测Geminin、Cath-D和Ki67的表达可能对判断肿瘤的生物学行为有重要意义。

斑马鱼Geminin的功能及研究现状

Geminin是一种25kD的核蛋白,在细胞增殖、细胞分化、胚胎发育以及肿瘤发生等多方面均发挥着重要作用。在不同发育阶段,Geminin在不同的区域表达,可作为抑制因子或是诱导因子参与胚胎发育的调节。而通过建立相关geminin的转基因斑马鱼来调控其在体内的表达上调或下调,是研究geminin功能的一种常用方法。主要对geminin相关的结构、功能及其在胚胎发育方面作用的研究进展以及相关的实验技术进行了综述。