GFP转基因裸鼠脾脏组织学观察

目的探讨GFP基因导入对BALB/c荧光裸鼠脾脏组织学及免疫功能的影响。方法取不同日龄(14日龄、28日龄、49日龄、70日龄)BALB/c荧光裸鼠及BALB/c普通裸鼠各32只,雌雄各半,处死取脾脏,对脾脏的绝对重量、脾脏指数进行测量分析,对脾脏的组织学改变进行观察,并对脾脏淋巴细胞数进行统计分析。结果与14日龄荧光裸鼠相比,28日龄荧光裸鼠脾脏指数明显较高(P<0.05)。与14日龄荧光裸鼠相比,49日龄、70日龄荧光裸鼠淋巴细胞数明显变少(P<0.05)。与普通裸鼠(14日龄、28日龄、49日龄、70日龄)相比较,相同日龄荧光裸鼠(14日龄、28日龄、49日龄、70日龄)淋巴细胞数明显减少(P<0.05)。结论 GFP基因对不同日龄荧光裸鼠的脾脏发育及其功能有一定影响。

鲜土贝母二氯甲烷提取物对人乳腺癌MDA-MB-231-GFP裸鼠肿瘤生长及肺转移的抑制作用

目的:研究土贝母鲜品二氯甲烷提取物(DEFT)对绿色荧光蛋白标记的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231-GFP裸鼠模型中移植瘤生长和肺转移的作用。方法:应用外科原位移植方法,建立人乳腺癌裸鼠移植模型,随机分成3组,阴性对照组(0.9%Na Cl)、低剂量组(DEFT 50 mg/kg)和高剂量组(DEFT 75 mg/kg),每组5只,灌胃给药,1次/d,连续58 d。每周2次荧光成像系统釆集肿瘤图像,系统自带软件计算肿瘤面积;给药结束时,称取肿瘤质量,荧光成像系统观察肺转移情况。结果:给药前后3组裸鼠体质量变化差异均无统计学意义(P>0.05)。给药第14天,3组肿瘤面积比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验结束时,土贝母低剂量组和高剂量组肺转移的发生均低于阴性对照组(P<0.05)。土贝母低剂量组和高剂量的肿瘤质量低于阴性对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:鲜土贝母二氯甲烷提取物对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231-GFP裸鼠模型中肿瘤生长及肺转移的发生有一定抑制作用。

绿色荧光裸鼠血液生理生化指标检测分析

目的检测绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)转基因裸鼠血液生理生化指标,为将来的研究提供基础参考值。方法实验选用6～8周GFP转基因裸鼠及对照组BABL/C裸鼠雌雄各30只,取血测定血生化和血常规指标。结果①GFP转基因裸鼠与对照组BABL/C裸鼠比较,白细胞总数(WBC)、尿素(URE)、平均血红蛋浓度(MCHC)、葡萄糖(GLU)差异极显著(P<0.01);血红蛋白(HGB)、红细胞分布宽度(RDW)、血小板计数(PLT)、尿酸(UA)差异显著(P<0.05),其它指标差异不显著。②GFP转基因裸鼠雌雄间比较,红细胞分布宽度(RDW)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋浓度(MCHC)、血小板计数(PLT)、球蛋白(G)、胆固醇(TC)、HDL-胆固醇(HDL-TC)差异极显著(P<0.01),白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)差异显著(P<0.05),其它指标差异不显著。结论转基因GFP转基因裸鼠的生理生化指标值在雄雌间有一定的差异,为相关的生物医学研究提供了基础数据。

人结肠癌细胞系绿色荧光蛋白裸鼠移植瘤模型的建立与观察

目的建立绿色荧光蛋白（GFP）裸鼠结肠癌肿瘤模型，并与普通裸鼠结肠癌肿瘤模型进行比较，观察其在肿瘤形态学、生物学特性及病理学之间的差异。方法将处于对数生长期的KM12SM人结肠癌细胞分别接种于10只GFP裸鼠和10只裸鼠的右侧腋窝皮下，观察成瘤时间，肿瘤体积及病理形态等情况。结果GFP裸鼠平均成瘤时间约为4～5d，裸鼠约为6～8d；接种第20天，裸鼠组测得体积约为（3463．434±341．39）mm^3，GFP裸鼠组肿瘤体积约为（4923．46±521．72）mm^3，存在显著差异。镜下见肿瘤细胞生长活跃，大小较为均匀，部分区域可见腺腔形成。结论经比较研究，GFP裸鼠在结肠癌肿瘤模型的成瘤时间，肿瘤质量等方面较裸鼠具有一定的优势，可为结肠癌转移的机制探讨和诊断治疗研究提供更为理想的动物模型。

绿色荧光裸鼠部分免疫学指标的测定及分析

目的检测绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,简称GFP)转基因裸鼠的部分免疫学指标,分析GFP转基因裸鼠与其他小鼠在免疫学方面的优缺点,为将来的研究提供基础参考值。方法 1实验选用6~8周GFP转基因裸鼠、BALB/c裸鼠和BALB/c小鼠,活体称体质量,剖取脾脏称其质量,之后进行脾淋巴细胞增殖能力的测定。2取外周血,测定部分血常规指标及免疫球蛋白指标。结果 1 GFP转基因裸鼠脾脏质量、脾脏系数以及T、B淋巴细胞增殖反应与BALB/c裸鼠相近,但与BALB/c小鼠差异显著。2 GFP转基因裸鼠、BALB/c裸鼠两种裸鼠品系外周血白细胞水平、淋巴细胞以比例及免疫球蛋白IgG、IgM都远低于BALB/c小鼠,差异显著。结论从脏器系数、白细胞水平,免疫球蛋白水平等角度发现,GFP转基因裸鼠和BALB/c裸鼠的免疫系统水平较BALB/c小鼠相弱,其中GFP转基因裸鼠的免疫系统水平最为低下。

肿瘤细胞的标记及其活体荧光成像

以绿色荧光蛋白 (GFP)作为标记基因转入人类肺癌细胞系 (ASTC a 1) ,经 80 0mg/LG4 18筛选 ,获得5株高表达细胞系 .利用流式细胞仪对GFP表达的稳定性进行了初步研究 ,结果表明本实验中有些细胞株间GFP表达稳定性有显著差异 (P <0 0 1) .将稳定表达的细胞系 (3# )植入裸鼠皮下 ,成瘤后用氩离子激光器产生的 4 88nm蓝光经扩束后直接激发 ,瘤体部位发出强烈的绿色荧光 .用 5 30nm长通滤色片滤除激发光 ,数码相机记录荧光的分布情况 .实验尝试利用激光作为激发光源 ,检测GFP标记的肿瘤细胞在裸鼠中的定位 ,期望建立一种新的肿瘤早期检测技术并改进肿瘤转移研究的手段 。

绿色荧光蛋白裸小鼠的培育及应用进展

绿色荧光蛋白（GFP）裸小鼠最初是为肿瘤研究而培育，是同时具有T淋巴细胞缺陷和系统表达G即基因的裸小鼠。近20年来，学者们对其生物学特性进行了广泛而深入的研究，为该小鼠模型的应用奠定了基础。

应用MEC-1与HG3细胞株建立慢性淋巴细胞白血病BALB/c裸鼠皮下移植瘤的模型

目的：通过对免疫缺陷鼠（BALB/c）不同部位、不同密度接种人慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞,探索裸鼠皮下移植瘤模型建立的条件。方法：通过慢病毒系统建立稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的人CLL细胞（MEC-1-GFP与HG3-GFP细胞）。首先将MEC-1-GFP细胞（5×10^7/ml）分别接种于裸鼠的前肢腋下、腹部及后肢腋下,观察不同接种部位对CLL细胞成瘤率的影响;其次将同等密度的MEC-1-GFP、HG3-GFP细胞（5×10^7/ml）分别接种于裸鼠的前肢腋下部位,观察两种细胞的成瘤时间及成瘤率。再次以同样接种方法,将不同密度的MEC-1-GFP与HG3-GFP细胞（1×10^7/ml与5×10^7/ml）分别接种于裸鼠的前肢腋下,观察不同接种密度的细胞成瘤时间及成瘤率。观察5周后,通过眼球取血获得外周静脉血,经EDTA抗凝及溶血素处理后,用流式细胞术检测GFP阳性的CLL细胞;同时,将荷瘤鼠处死,剥离肿瘤组织并制备冰冻切片,进行组织病理学检查。结果：成功获得稳定表达标记蛋白GFP的MEC-1与HG3细胞株;接种后裸鼠的前肢腋下、腹部及后肢腋下都形成了皮下移植瘤,且前肢腋下更有利于移植瘤的形成;接种密度为5×10^7/ml的MEC-1-GFP和HG3-GFP细胞均可形成皮下移植瘤,且5周后的成瘤率均为80%;接种密度分别为1×10^7/ml与5×10^7/ml MEC-1-GFP与HG3-GFP细胞均可有效地形成皮下移植瘤。流式细胞术检测显示,2组荷瘤鼠外周血中均未见GFP阳性的MEC和HG3细胞,组织病理检查表明CLL细胞向腹腔转移。结论：利用CLL细胞株MEC-1-GFP和HG3-GFP建立了CLL裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究CLL的发病机制提供了实验工具。

土贝母提取物对人乳腺癌MDA-MB-231-GFP裸鼠模型的抗肿瘤作用评价

目的:建立绿色荧光蛋白标记的人乳腺癌MDA-MB-231-GFP裸鼠模型,研究中药土贝母提取物对转染GFP基因的人乳腺癌MDA-MB-231-GFP裸鼠模型的抗肿瘤活性。方法:应用原位移植方法,建立绿色荧光蛋白标记的人乳腺癌MDA-MB-231-GFP模型。通过比较阴性对照组(口服0.9%氯化钠溶液)、阳性对照组(腹腔注射紫衫醇20mg/kg)、低剂量组(口服土贝母提取物10mg/kg)和高剂量组(口服土贝母提取物50mg/kg)的肿瘤抑制率,评价土贝母提取物对肿瘤生长的影响。结果:阴性对照组与各治疗组小鼠给药前后体质量变化比较,差异均无统计学意义,一般状况良好。低剂量组和阴性对照组间比较,肿瘤大小和体质量的改变差异无统计学意义;高剂量组和阳性对照组肿瘤较阴性对照组明显缩小(P<0.05,P<0.01)。结论:经口服投予较高剂量的土贝母提取物,对人乳癌MDA-MB-231-GFP裸鼠模型有明显的抑制作用。

人脑胶质瘤干祖细胞-绿色荧光裸小鼠皮下移植瘤SU3-NC/GFP-1模型建立

目的探讨人脑胶质瘤干祖细胞-绿色荧光裸小鼠皮下移植瘤模型的建立。方法将人脑胶质瘤干祖细胞株SU3接种于NC-C57BL/6J荧光裸小鼠右前肢腋下,定期测肿瘤大小,取移植瘤组织块持续传代,并做常规病理、免疫组化染色和绿色荧光蛋白(GFP)检测。结果移植瘤连续传至10代,100%致瘤率。肿瘤晚期都有肉眼可见的肿瘤表面皮肤溃疡性结痂,常规病理符合恶性肿瘤特征,分子免疫病理缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、CD34、TNF、Ki67非均一性表达于相关区域或相关细胞,在470nm激发光下可见移植瘤间质存在一定数量的GFP细胞,以及在坏死区域内的GFP细胞CD68+和CD11b+。结论成功建立人脑胶质瘤干祖细胞-绿色荧光裸小鼠皮下移植瘤模型。

荧光裸小鼠源的人脑胶质母细胞瘤原位移植模型的建立

目的在表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)裸小鼠脑内建立人脑多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)原位移植模型。方法将表达GFP的C57/B6鼠与Balb/c nu/nu系裸小鼠杂交筛选出表达GFP的裸小鼠。把人脑GBM组织原位移植于GFP裸小鼠脑内,荧光显微镜下观察移植瘤的生长特性、血管生成及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达。结果成功培育出表达GFP的荧光裸小鼠;移植瘤中EGFR阳性表达率(78.6±5.2)%,肿瘤侵袭性生长并血管丰富。结论人脑GBM荧光裸小鼠原位移植模型能模拟人脑原发恶性胶质瘤高侵袭及EGFR高表达的生物学特性。