GFP和Luc双标技术在小鼠肿瘤模型建立中的应用

目的建立GFP（绿色荧光蛋白）／Luc（荧光素酶）双标高效表达的人肺癌细胞系和人肝癌细胞系，利用活体成像系统观察裸小鼠肺原位移植瘤和肝原位移植瘤的生长情况。方法应用慢病毒转染的方法建立GFP／Luc双标的SPC-A-1和SMMC-7721细胞系，结合流式细胞分选技术使GFP／Luc双标表达率接近100％，分别接种于裸小鼠肺原位和肝原位，采用活体成像技术监测各稳定转染细胞在小鼠体内深部组织的表达情况。结果成功建立了GFP／Luc双标表达率接近100％的SPC-A-1-GFP／LHC和SMMC-7721-GFP／Ltic细胞系，进行裸小鼠肺原位移植和肝原位移植后，应用活体成像系统观测到裸小鼠肺原位和肝原位早期的微小病灶和晚期移植瘤的生长情况，而且，随着肿瘤移植时间的延长，移植瘤体积的增大，活体成像检测到的发光面积逐渐增大，发光强度也逐渐增加。结论所建立的稳定表达GFP／Luc的细胞系，结合活体成像技术，能够对动物模型深部的肿瘤病灶进行活体、实时、定量检测，且灵敏度极高，为进一步研究肿瘤的发生及发展提供了理想的技术手段。

人肝癌原位移植瘤的活体动态观察

目的 建立GFP（绿色荧光蛋白）/Luciferase（荧光素酶,Luc）双标高效表达的人肝癌细胞系SMMC-7721-GFP/Luc,并建立该细胞的裸小鼠肝原位移植瘤动物模型,利用小动物活体成像系统观察裸小鼠肝原位移植瘤的生长及转移情况.方法 应用慢病毒转染的方法建立GFP/I.alC双标的SMMC-7721细胞系,接种于裸小鼠肝原位,采用活体成像技术监测该细胞在小鼠体内深部组织的表达情况.结果 成功建立了GFP/Luc双标表达率接近100%的SMMC-772l-GFP/Luc细胞系,进行裸小鼠肝原位移植后,应用活体成像系统可观察到裸小鼠肝原位早期的微小病灶和晚期移植瘤的生长情况.而且,随着肿瘤移植时间的延长,移植瘤体积的增大,活体成像检测到的发光面积逐渐增大,发光强度也逐渐增加.结论 活体荧光成像系统可直接观察肝原位移植瘤模型中肿瘤的生长及转移,有助于了解人肝癌的生物学行为及其特性,鉴于其敏感、直观,动态、可靠的优点,它将为肝癌的进一步研究提供极其有益的帮助.

实验性肿瘤细胞转移动物模型的活体成像观察

目的利用小动物活体成像系统观察肿瘤细胞在动物体内的转移情况。方法分别将不同浓度的绿色荧光蛋白（GPF）和荧光素酶（luciferase，Luc）双标的SMMC－7721细胞接种入裸小鼠尾静脉和脾，建立实验性转移动物模型，采用活体成像技术监测不同浓度的细胞在小鼠体内的转移情况，动态观察同一细胞于不同时间点在小鼠体内的转移情况。结果成功建立了尾静脉接种肺转移及脾内接种肝转移的实验性转移动物模型，经小动物活体成像系统检测发现，随着接种细胞浓度的增加，荧光素的表达面积和强度逐渐增加，二者呈正比关系；随着接种时间的延长，荧光素的表达面积和强度逐渐减弱，二者呈成反比关系。结论活体荧光成像系统可较好地观测肿瘤在动物体内深部脏器的转移情况，它将为肿瘤转移机制、抗转移治疗等研究提供有益的帮助。

尾静脉注射及皮下接种B-LCL细胞建立EB病毒相关淋巴瘤动物模型的比较研究

目的:构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和荧光素酶(luciferase,Luc)双标记的EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染的人B淋巴母细胞系(B lymphoblastoid cell lines,B-LCL)应用于肿瘤模型,并比较尾静脉注射和皮下注射人B-LCL细胞建立小鼠模型的优缺点。方法:通过二代慢病毒转染、嘌呤霉素筛选构建GFP/Luc双标的B-LCL细胞系(B lymphoblastoid cell lines double-tagged with GFP and Luc,B-LCL-GL),接种低、中和高3种剂量的细胞至NPG[(NOD)/Prkdcscid/IL-2Rγ^(null)]小鼠皮下或尾静脉内,建立皮下移植瘤模型与血行性转移瘤模型并成像分析。结果:B-LCL-GL细胞中的GFP阳性细胞比例为92.5%,荧光素酶平均发光强度为4.80E+08 Photons/s,远高于B-LCL组。在血行性转移瘤模型中,连续成像结果表明从第7天到第28天随着肿瘤移植时间的延长,肿瘤最先定植在腹腔后又转移到全身。在皮下移植瘤模型中,第7天时3组小鼠均可以检测到肿瘤细胞在小鼠皮下接种处发出了中心强、周围弱的荧光信号,第28天时高剂量组肿瘤转移到全身。相同接种剂量分别通过尾静脉和皮下接种时,肿瘤生物发光均无显著性差异(P>0.05);小鼠存活情况显示低、中、高各剂量尾静脉注射组在第100天时全部死亡,低剂量和中剂量皮下注射组小鼠带瘤生存长达100天且未出现小鼠死亡,可允许更长时间进行实验。结论:成功构建GFP/Luc双标的B-LCL细胞系,尾静脉注射和皮下注射异种移植B-LCL细胞两种方法均可成功建立EBV-LCLs肿瘤模型,并可通过成像示踪定位和精准定量肿瘤大小,为肿瘤特性研究及抗肿瘤药物筛选提供了研究平台。