GFP标记成年大鼠表皮神经嵴干细胞的分离培养与形态学特征

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记大鼠表皮神经嵴干细胞(EPI-NCSC)的分离培养方法,为EPI-NCSC在体移植研究脊髓损伤修复奠定基础。方法分离成年GFP大鼠胡须毛囊,取毛囊隆突部贴附于胶原包被的培养板上。在培养第4天有大量细胞游出,取出贴附的毛囊隆突部,细胞传代培养。细胞采用SOX10和Nestin免疫细胞化学染色鉴定,并计算细胞纯度。结果 EPI-NCSC在胶原基质上从隆突部游出,细胞为圆形或梭形,呈强绿色荧光。免疫细胞化学染色SOX10和Nestin双阳性,纯度在99%以上。结论本实验方法简便易行,能分离出高纯度的GFP-EPI-NCSC,可作为一种有效的工具细胞用于损伤脊髓修复研究。

不同浓度聚维酮碘致GFP转基因大鼠角膜毒性损伤的研究

目的评估不同浓度的聚维酮碘(polyvinylpyrrolidone-iodine,PVP-I)对角膜的毒性损害。方法 30只GFP转基因大鼠随机分为对照组、1 g·L^(-1) PVP-I组和5 g·L^(-1)PVP-I组,后2组局部滴PVP-I眼液建立损伤模型,对照组采用生理盐水滴眼,以体视荧光显微镜观察各组不同时间点角膜荧光强度改变,并取各组角膜组织进行固定、包埋和切片,以HE染色或荧光显微镜观察角膜组织病理改变,采用TUNEL染色分析有无细胞凋亡。结果体视显微镜观察发现,与对照组相比,PVP-I组角膜片随时间推移其荧光强度明显减弱。HE染色及荧光显微镜检测进一步证实PVP-I组出现角膜上皮细胞剥脱、基质细胞数量减少等病理变化,TUNEL染色提示,5 g·L^(-1) PVP-I组角膜出现上皮细胞凋亡。结论 PVP-I局部滴眼可造成明确的角膜损伤,PVP-I临床应用的安全性尚有待进一步探讨。

骨髓间充质干细胞参与牙髓损伤修复的体内实验研究

目的:观察体内的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)能否参与牙髓损伤的局部修复,初步探讨骨髓间充质干细胞在牙髓损伤修复中的作用。方法:构建绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞(GFP-BMMSCs)嵌合SD大鼠模型,30 d后,通过流式细胞术检测外周血单核细胞和骨髓间充质干细胞中荧光细胞的比例,冰冻切片观察心、肝、肾组织中是否有荧光细胞的分布,检测模型是否构建成功。然后利用该模型,通过制备牙本质缺损构建牙髓损伤模型,分别于牙本质缺损后5、10、15 d取材,切片,HE及免疫荧光染色,观察牙髓的病理变化以及GFP-BMMSCs在牙髓组织中的分布情况和变化。结果:HE染色可见牙本质缺损组初期有牙髓充血,后期牙髓炎症逐渐恢复并有修复性牙本质形成。免疫荧光染色可见牙髓组织中有荧光细胞的分布,牙本质缺损组比正常组中可见更多的荧光细胞,且随着牙髓炎症的恢复,荧光细胞减少。结论:牙髓损伤时,骨髓间充质干细胞可以迁移到损伤的牙髓处参与其损伤的修复。