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GFP报告因子结合流式细胞术的蛋白-蛋白相互作用单细菌水平分析
1
作者
苏柳钦
张健强
+2 位作者
何盛斌
吴丽娜
颜晓梅
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期602-609,共8页
在基于腺苷酸环化酶功能重构的细菌双杂交(BACTH)系统中引入lac启动子控制的gfp基因作为蛋白质相互作用的报告基因,采用实验室自行研制的超高灵敏流式检测装置(HSFCM)建立了一种单细菌水平的、简单、快速、高通量的蛋白-蛋白相互作用分...
在基于腺苷酸环化酶功能重构的细菌双杂交(BACTH)系统中引入lac启动子控制的gfp基因作为蛋白质相互作用的报告基因,采用实验室自行研制的超高灵敏流式检测装置(HSFCM)建立了一种单细菌水平的、简单、快速、高通量的蛋白-蛋白相互作用分析方法.将分别携带有相互作用蛋白对编码基因和gfp报告基因的质粒共转化至报告菌株,利用HSFCM对单个细菌的散射光和荧光同时进行检测.结果表明蛋白-蛋白相互作用激活了gfp报告基因的表达,并存在双稳态现象:即一部分细菌的gfp报告基因被激活,细菌荧光信号强度明显高于阴性对照组,而另一部分细菌的gfp报告基因未被激活,细菌荧光信号分布与阴性对照组重叠.利用HSFCM在单细菌水平对荧光信号强度和表达GFP报告因子的细菌比例进行分析,能有效地区分表达GFP报告因子的阳性菌和报告基因未被激活表达的阴性菌,揭示了细菌个体蛋白的异质性表达.这将为相互作用蛋白对的检测及筛选提供一种快速的分析方法.
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关键词
蛋白-蛋白相互作用
BACTH系统
gfp报告因子
单细菌水平
超高灵敏流式检测技术
下载PDF
职称材料
题名
GFP报告因子结合流式细胞术的蛋白-蛋白相互作用单细菌水平分析
1
作者
苏柳钦
张健强
何盛斌
吴丽娜
颜晓梅
机构
厦门大学化学化工学院
出处
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期602-609,共8页
基金
国家自然科学基金(21472158,21105082,21225523,21475112,216278111)
文摘
在基于腺苷酸环化酶功能重构的细菌双杂交(BACTH)系统中引入lac启动子控制的gfp基因作为蛋白质相互作用的报告基因,采用实验室自行研制的超高灵敏流式检测装置(HSFCM)建立了一种单细菌水平的、简单、快速、高通量的蛋白-蛋白相互作用分析方法.将分别携带有相互作用蛋白对编码基因和gfp报告基因的质粒共转化至报告菌株,利用HSFCM对单个细菌的散射光和荧光同时进行检测.结果表明蛋白-蛋白相互作用激活了gfp报告基因的表达,并存在双稳态现象:即一部分细菌的gfp报告基因被激活,细菌荧光信号强度明显高于阴性对照组,而另一部分细菌的gfp报告基因未被激活,细菌荧光信号分布与阴性对照组重叠.利用HSFCM在单细菌水平对荧光信号强度和表达GFP报告因子的细菌比例进行分析,能有效地区分表达GFP报告因子的阳性菌和报告基因未被激活表达的阴性菌,揭示了细菌个体蛋白的异质性表达.这将为相互作用蛋白对的检测及筛选提供一种快速的分析方法.
关键词
蛋白-蛋白相互作用
BACTH系统
gfp报告因子
单细菌水平
超高灵敏流式检测技术
Keywords
protein-protein interaction
BACTH system
gfp
reporter protein
single-bacterium analysis
high sensitivity flow cytometry
分类号
O657.3 [理学—分析化学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GFP报告因子结合流式细胞术的蛋白-蛋白相互作用单细菌水平分析
苏柳钦
张健强
何盛斌
吴丽娜
颜晓梅
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2018
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