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适于植物转基因体系优化的绿色荧光蛋白表达载体构建及其瞬时表达验证 被引量:2
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作者 王锐 王俊斌 +3 位作者 丁博 李明 包曙光 谢晓东 《中国农学通报》 CSCD 2013年第15期164-168,共5页
在建立和优化植物的转基因体系时,通常期望转化载体同时具有适用植株范围广、尺寸较小、具有多重选择标记或报告基因等优点。为此,通过Gateway技术,构建了含有绿色荧光蛋白基因GFP的植物表达载体pGWB14-GFP,并经PCR鉴定和测序验证了序... 在建立和优化植物的转基因体系时,通常期望转化载体同时具有适用植株范围广、尺寸较小、具有多重选择标记或报告基因等优点。为此,通过Gateway技术,构建了含有绿色荧光蛋白基因GFP的植物表达载体pGWB14-GFP,并经PCR鉴定和测序验证了序列的准确性。利用基因枪转化法,将该载体转入洋葱表皮和小麦叶片中,通过荧光显微镜检测,发现绿色荧光蛋白在洋葱表皮细胞和小麦叶片表皮细胞中均能瞬时表达,表明pGWB14-GFP在双子叶和单子叶植物中都能正常发挥功能。本载体在双子叶和单子叶植物植物中都可使用,大小低于17kb,含有GFP报告基因,具有两套卡那霉素和潮霉素选择标记基因,用于在细菌和植物中筛选,为植物转基因体系的构建和优化提供了功能强大的转化载体。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白基因(gfp) 植物表达载体 瞬时表达
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GFP基因在苜蓿转化组织中的荧光表达量分析 被引量:1
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作者 韩斌 马晖玲 李云霞 《草原与草坪》 CAS 2010年第6期65-68,共4页
利用农杆菌介导法将溶菌酶(Lyz)与绿色荧光蛋白(GFP)基因转入"甘农3号"紫花苜蓿(Medicago sativa)中,获得含有双元基因的紫花苜蓿转基因植株。在荧光显微镜下对不同处理、不同培养时期的苜蓿转化愈伤组织及再生转化植株进行... 利用农杆菌介导法将溶菌酶(Lyz)与绿色荧光蛋白(GFP)基因转入"甘农3号"紫花苜蓿(Medicago sativa)中,获得含有双元基因的紫花苜蓿转基因植株。在荧光显微镜下对不同处理、不同培养时期的苜蓿转化愈伤组织及再生转化植株进行荧光检测和荧光表达量的对比分析。结果表明:经预培养的转化愈伤组织中的荧光表达量明显高于未经预培养的转化子;3 d为共培养的最佳时间;侵染时经过摇床上摇动的负压处理,荧光表达量高于静止状态;共培养3 d后的转化荧光表达量达最强,随培养时间延长,表达量少量减少,但能够稳定表达。 展开更多
关键词 苜蓿 绿色荧光蛋白gfp基因 荧光检测
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绿色荧光蛋白转基因雄鼠肝细胞移植重建雌鼠的造血功能研究 被引量:1
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作者 阮光萍 王金祥 +4 位作者 庞荣清 姚翔 邓永丽 马丽花 潘兴华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第20期1-6,共6页
目的用荧光雄鼠的肝细胞回输半致死量射线照射的C57BL雌鼠,观察肝细胞是否有重建造血功能的作用。方法用荧光雄鼠的肝细胞回输给半致死量射线照射的C57BL雌鼠,在移植后18、39和53 d剪鼠尾,采血并用CD4-PE和CD8-PE标记,再用氯化铵溶血,... 目的用荧光雄鼠的肝细胞回输半致死量射线照射的C57BL雌鼠,观察肝细胞是否有重建造血功能的作用。方法用荧光雄鼠的肝细胞回输给半致死量射线照射的C57BL雌鼠,在移植后18、39和53 d剪鼠尾,采血并用CD4-PE和CD8-PE标记,再用氯化铵溶血,上流式细胞仪检测。移植87 d后杀鼠取骨髓用荧光原位杂交检测Y染色体阳性细胞的百分比,并取外周血、脾细胞、肝细胞和骨髓细胞检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞的百分比。结果回输肝细胞的雌鼠外周血中检测到GFP阳性细胞,同时检测到一部分GFP阳性细胞转化成了CD4+或CD8+T细胞,外周血中GFP阳性细胞的比例与荧光原位杂交分析的骨髓中的Y染色体阳性比例呈正相关。同时在鼠的脾细胞、肝细胞和骨髓细胞中都检测到了GFP阳性细胞。而脾细胞中检测到的GFP阳性细胞百分比高于其他细胞,相比有统计学意义(P=0.003)。结论成年鼠肝细胞含有一定量的造血干细胞,在移植鼠体内存活并分布在多脏器,重建了雌鼠的造血功能。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白(gfp)转基因 肝细胞 荧光原位杂交 Y染色体 造血重建
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农杆菌介导的Lyz-GFP基因对匍匐翦股颖Penn A-1转化和表达的研究 被引量:7
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作者 安惠惠 马晖玲 +2 位作者 李坚 白生军 马祥 《草业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期141-148,共8页
以匍匐翦股颖Penn A-1成熟胚为供试材料,建立了其植株高效再生体系。利用农杆菌介导法将溶菌酶与绿色荧光蛋白Lyz-GFP双元基因转入匍匐翦股颖Penn A-1胚性愈伤组织中,经培养获得抗病转基因植株。并对Lyz-GFP双元基因转化Penn A-1的适宜... 以匍匐翦股颖Penn A-1成熟胚为供试材料,建立了其植株高效再生体系。利用农杆菌介导法将溶菌酶与绿色荧光蛋白Lyz-GFP双元基因转入匍匐翦股颖Penn A-1胚性愈伤组织中,经培养获得抗病转基因植株。并对Lyz-GFP双元基因转化Penn A-1的适宜条件进行了研究。研究结果表明,在2.0mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA的MS培养基上Penn A-1愈伤组织诱导率最高,可达36%,且质量最好。愈伤组织在MSO+0.5mg/L NAA上分化率最高,达42.5%;浓度为300mg/L的头孢霉素(Cef)可抑制农杆菌LBA4404的生长;Penn A-1胚性愈伤组织经携有pBI121-Lyz-GFP的农杆菌LBA4404(OD600值0.3~0.5)侵染10~15min,共培养3d后,转化愈伤组织生长状况良好,转化率达12.5%,且在后期的生长和转化苗的再生中有良好的表现,转化苗再生率为27.5%;转化植株有较强的荧光表达量,并经PCR检测,获得的2株匍匐翦股颖Penn A-1转化植株中均扩增出750bp的目标基因片断。 展开更多
关键词 匍匐翦股颖 基因转化 溶菌酶Lyz基因 绿色荧光蛋白gfp基因
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用gfp基因标记法研究大豆根瘤菌在大豆根部定殖结瘤情况 被引量:10
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作者 王浩 绳志雅 +1 位作者 隋新华 陈文新 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期1-4,共4页
采用三亲本杂交的方法,将绿色荧光蛋白基因(gfp)转入高效、抗逆、广适应性的快生大豆根瘤菌Sinorhizobium frediiCCBAU 01287中,获得含gfp基因的转基因菌株CBAU 01287(G);平板传代和共生检测表明:外源质粒在CCBAU 01287中能够自我复制,... 采用三亲本杂交的方法,将绿色荧光蛋白基因(gfp)转入高效、抗逆、广适应性的快生大豆根瘤菌Sinorhizobium frediiCCBAU 01287中,获得含gfp基因的转基因菌株CBAU 01287(G);平板传代和共生检测表明:外源质粒在CCBAU 01287中能够自我复制,稳定遗传。进一步研究表明,gfp标记菌CCBAU 01287(G)可用于实时监测根瘤菌在大豆根部的早期定殖情况和定殖密度的测定;标记菌株对大豆的生长及生物量的积累与出发菌株的效果无显著差异。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白基因(gfp) 大豆根瘤菌 定殖密度
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DREB1C-GFP融合基因植物表达载体的构建 被引量:2
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作者 王涌鑫 李聪 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第3期603-607,共5页
为了便于转基因植株的分子检测,利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE PCR)方法克隆来自于水母的绿色荧光蛋白基因(GFP)和来自于拟南芥的目的基因DREB1C转录因子,并对其进行改造获得融合基因。通过酶切和连接,... 为了便于转基因植株的分子检测,利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE PCR)方法克隆来自于水母的绿色荧光蛋白基因(GFP)和来自于拟南芥的目的基因DREB1C转录因子,并对其进行改造获得融合基因。通过酶切和连接,将融合基因构建到表达载体pCAMBIA1301上,获得了具有DERB1C和GFP基因的重组表达载体pDR1-GFP,酶切和测序结果表明,该融合基因与设计相符。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白基因(gfp) DREB1C转录因子 SOE PCR 载体构建
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溶杆菌SNNU513基因gfp标记及在玉米根部定殖 被引量:3
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作者 武坤毅 王斐斐 +2 位作者 崔浪军 章华伟 白成科 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期134-142,共9页
溶杆菌属细菌在植物病害生物防治中有着广阔的应用潜力。本文以本实验室从中药材远志分离筛选的溶杆菌属新菌株Lysobacter sp.SNNU513为材料,筛选出高效制备该菌株感受态细胞Inoue法,电击转化条件为场强20 kV/cm、电脉冲时间5 ms时可将... 溶杆菌属细菌在植物病害生物防治中有着广阔的应用潜力。本文以本实验室从中药材远志分离筛选的溶杆菌属新菌株Lysobacter sp.SNNU513为材料,筛选出高效制备该菌株感受态细胞Inoue法,电击转化条件为场强20 kV/cm、电脉冲时间5 ms时可将含绿色荧光蛋白基因gfp的质粒pGLO导入该菌株感受态细胞中,重组菌SNNU513-pGLO能高效、稳定表达绿色荧光蛋白基因,与出发菌株的生长特性、抑菌活性等生物学特性差异不显著。将成功构建的重组菌SNNU513-pGLO用于检测该菌株在玉米根部的定殖规律,结果表明,定殖量从表皮到韧皮部有明显减少趋势。 展开更多
关键词 生防菌 溶杆菌属 生物学特性 定殖
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Lyz-GFP双元基因在苜蓿愈伤组织中的转化 被引量:2
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作者 韩斌 马晖玲 李云霞 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期352-357,共6页
利用农杆菌介导法将溶菌酶(Lyz)与绿色荧光蛋白(GFP)基因转入"甘农1号"杂花苜蓿(Medicago sativaMartyn)和"甘农3号"紫花苜蓿(Medicago sativaL.)品种中,获得含有该双元基因的苜蓿转基因愈伤组织;采用荧光检测和PCR扩增技术... 利用农杆菌介导法将溶菌酶(Lyz)与绿色荧光蛋白(GFP)基因转入"甘农1号"杂花苜蓿(Medicago sativaMartyn)和"甘农3号"紫花苜蓿(Medicago sativaL.)品种中,获得含有该双元基因的苜蓿转基因愈伤组织;采用荧光检测和PCR扩增技术,检测到溶菌酶Lyz和绿色荧光蛋白GFP基因在苜蓿愈伤细胞中的表达;研究该双元基因在苜蓿品种"甘农1号"和"甘农3号"中转化的若干影响因素,确定适宜的转化条件以期提高基因转化效率。结果表明:75 mg.L-1的卡那霉素对苜蓿愈伤组织的生长具有显著抑制效应;300 mg.L-1头孢霉素能够有效地抑制农杆菌LBA4404的生长;OD600值为0.4~0.5的农杆菌适宜的侵染时间是10 min;经预培养3~4 d的材料侵染后再共培养3 d之后,在愈伤组织诱导培养基MS+2,4-D 2.0 mg.L-1+KT 0.5 mg.L-1+0.6%琼脂+2.5%蔗糖的培养基上诱导出抗性愈伤组织;"甘农1号"和"甘农3号"的抗性愈伤组织诱导率分别为35%和32%。 展开更多
关键词 苜蓿 溶菌酶Lyz基因 绿色荧光蛋白gfp基因 愈伤组织 农杆菌介导
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基因枪介导擎天凤梨遗传转化体系的建立 被引量:4
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作者 沈晓岚 王炜勇 +3 位作者 毛碧增 俞少华 田丹青 俞信英 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期77-84,共8页
擎天凤梨的愈伤组织获取较为困难、而且愈伤分化缓慢且极易死亡,使用农杆菌介导转基因面临着受体难以获得、侵染后愈伤死亡率高、转化时间长以及成本高等问题。使用基因枪介导的转基因方法相对来说更为直接快速,但也面临转化效率不高、... 擎天凤梨的愈伤组织获取较为困难、而且愈伤分化缓慢且极易死亡,使用农杆菌介导转基因面临着受体难以获得、侵染后愈伤死亡率高、转化时间长以及成本高等问题。使用基因枪介导的转基因方法相对来说更为直接快速,但也面临转化效率不高、插入基因表达定位不清等问题。本研究以擎天凤梨组培苗的茎尖生长组织为材料,以基因枪介导结合GFP荧光蛋白基因,对转化中的主要影响因子进行研究,建立并优化了遗传转化体系,获得了转化再生植株,并利用GFP荧光蛋白基因的荧光特性,分析确定了外源基因的表达定位,为进一步利用分子育种手段培育擎天凤梨新品种打下基础。 展开更多
关键词 擎天凤梨 基因 遗传转化体系 gfp荧光蛋白基因
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苏云金芽胞杆菌标记重组菌株的构建与杀虫基因水平转移 被引量:8
10
作者 周琴 孙明 +2 位作者 李林 杨在清 喻子牛 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期142-146,共5页
利用SOE法将构建的绿色荧光蛋白基因gfp和苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白基因cry1Ac10的嵌合基因克隆到穿梭载体pAD4412上获得重组质粒pBMBZGC10,再通过电转化法导入苏云金芽胞杆菌无质粒突变株CryB中获得重组菌株CryB(pBMBZGC10).将重... 利用SOE法将构建的绿色荧光蛋白基因gfp和苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白基因cry1Ac10的嵌合基因克隆到穿梭载体pAD4412上获得重组质粒pBMBZGC10,再通过电转化法导入苏云金芽胞杆菌无质粒突变株CryB中获得重组菌株CryB(pBMBZGC10).将重组菌株CryB(pBMBZGC10)的发酵液按30、60和90ml共3个浓度梯度,菌数约为107~108·ml-1,分次喷洒供试植株小白菜、蕹菜和番茄,结果表明,cry1Ac10基因没有向供试土壤细菌、真菌和放线菌转移,也未在供试植物根、茎和叶中检测到该基因. 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 绿色荧光蛋白基因(gfp) 杀虫晶体蛋白基因 水平转移
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Construction of Fusion Expression Vector Carrying GFP and ZmCIPK
11
作者 TAI Fu-ju WANG Qi WANG Wei SHEN Teng-fei LI Xiao 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第5期655-658,共4页
[Objective] The aim was to isolate the CBL-interacting protein kinases(CIPK)from maize(Zea mays L.)and construct the fusion gene expression vector which consisted the ZmCIPK8 and GFP.[Method] The ZmCIPK8 cDNA was succ... [Objective] The aim was to isolate the CBL-interacting protein kinases(CIPK)from maize(Zea mays L.)and construct the fusion gene expression vector which consisted the ZmCIPK8 and GFP.[Method] The ZmCIPK8 cDNA was successfully cloned by using RT-PCR method.And then,it was connected to the pBlueScript SK(pSK)plasmid,which contained the GFP gene.So that the fusion gene vector pSK-CIPK-GFP was obtained.Then,the fusion gene was connected into the efficient plant expression vector PBI121 to construct the fusion gene expression vector PBI-CIPK-GFP.At last,the recombined expression vector was transformed to Agrobacterium tumefaciems LBA4404 to produce the engineering strain LBA4404-PBI-CIPK-GFP.[Result] The fusion gene expression vector which consisted of GFP and ZmCIPK8 gene and engineering strain LBA4404-PBI-CIPK-GFP were successfully constructed.[Conclusion] The results lays a foundation for further study of subcellular localization of ZmCIPK8,which can help to clarify the molecular mechanism of regulation serious stresses,and also provides an important basis for the research on resistance stress engineering of maize. 展开更多
关键词 MAIZE CIPK Fusion gene
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A Viral Expression Vector from Foxtail mosaic virus to Express Green Fluorescent Protein
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作者 CHEN You-qian WU Juan +2 位作者 ZHU Pin LI Xiang ZHU Xi-wu 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2019年第2期42-47,共6页
[Objective]Foxtail mosaic virus(FoMV)infects gramineous and dicotyledonous plants.In this study,we sought to construct a viral vector based on FoMV to express exogenous proteins in plants.[Method]A recombinant viral e... [Objective]Foxtail mosaic virus(FoMV)infects gramineous and dicotyledonous plants.In this study,we sought to construct a viral vector based on FoMV to express exogenous proteins in plants.[Method]A recombinant viral expression vector was constructed by inserting the promotor of Potato virus X(PVX)and exogenous gene sequences into the 3’non-coding region of the FoMV coat protein gene.[Results]The plasmid pCB301-FoMV-CP-PVXprom-GFP expressed green fluorescent protein in inoculated Nicotiana benthamiana leaves.[Conclusion]A recombinant viral expression vector was constructed successfully. 展开更多
关键词 Foxtail mosaic virus Recombinant viral expression vector Green fluorescent protein Exogenous gene sequences Nicotiana benthamiana
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人参锈腐生防菌Psn86的GFP标记及在土壤和有机肥中的定殖示踪
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作者 解宇娇 李自博 +2 位作者 王丹 周如军 傅俊范 《中国植保导刊》 北大核心 2018年第2期5-10,共6页
为跟踪分析从人参内生菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)中优选的人参锈腐生防菌Psn86在有机肥及土壤中的存活能力与定殖特性,利用农杆菌介导的真菌遗传转化体系,获得了含有绿色荧光蛋白基因(gfp)的哈茨木霉标记菌株Psn86-g。结果表明... 为跟踪分析从人参内生菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)中优选的人参锈腐生防菌Psn86在有机肥及土壤中的存活能力与定殖特性,利用农杆菌介导的真菌遗传转化体系,获得了含有绿色荧光蛋白基因(gfp)的哈茨木霉标记菌株Psn86-g。结果表明,该菌株在生长速率、产孢量、对酸碱度和温度的适应性及对人参锈腐菌的抑菌活性等方面与原始哈茨木霉菌株Psn86无显著差异(P>0.05)。同时研究了标记菌株Psn86-g在有机肥与山林土混合物、有机肥、山林土3种处理中的定殖能力以及人参生长对该菌株在3种处理中定殖的影响。结果显示,标记菌株Psn86-g在土肥混合的处理组中定殖中最好,其次为山林土中,在有机肥中定殖最差。种植人参比未种植人参更有利于菌株的存活。标记菌株Psn86-g在不同处理组中的菌落数随时间的延长均略有下降,16 d后趋于稳定,维持在1×105 cfu/g,较初始接菌量下降了约1个数量级。 展开更多
关键词 哈茨木霉Psn86 绿色荧光蛋白基因(gfp) 土壤定殖
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