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PAMs移除猪红细胞表面GFP-Escherichia coli的体外观察 被引量:2
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作者 凌小雅 朱乐乐 +4 位作者 孙加乐 王缘 张睿玉 薛晓姝 尹伟 《山西农业科学》 2021年第9期1132-1136,共5页
为了观察猪红细胞与猪肺泡巨噬细胞(PAMs)相互作用以清除免疫复合物的生物学过程,采用显微镜技术和流式细胞技术,借助平行板流动小室灌流系统构建猪红细胞免疫黏附致敏GFP-Escherichia coli与PAMs的细胞动态互作模型,并对GFP-Escherichi... 为了观察猪红细胞与猪肺泡巨噬细胞(PAMs)相互作用以清除免疫复合物的生物学过程,采用显微镜技术和流式细胞技术,借助平行板流动小室灌流系统构建猪红细胞免疫黏附致敏GFP-Escherichia coli与PAMs的细胞动态互作模型,并对GFP-Escherichia coli从猪红细胞表面向PAMs转移的过程进行了研究。结果表明,黏附有GFP-Escherichia coli的猪红细胞流动至PAMs处停留,绿色荧光点位于红细胞与PAMs交接处。随后,猪红细胞脱离连接,GFP-Escherichia coli完全转移至PAMs并被PAMs吞噬清除。试验成功拍摄到PAMs移除猪红细胞表面GFP-Escherichia coli的过程,可为猪红细胞免疫黏附介导免疫复合物清除的研究提供可视化的证据。 展开更多
关键词 猪红细胞 猪肺泡巨噬细胞(PAMs) gfp-escherichia coli 免疫复合物清除
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基于用GFP标记的大肠杆菌构建大鼠可视化细菌性前列腺感染模型 被引量:2
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作者 张晓燕 陈慧慧 +2 位作者 王海鹰 姚银辉 鲁澄宇 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1022-1025,共4页
目的采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的大肠杆菌构建大鼠细菌性前列腺炎模型,观察细菌在组织中的侵袭路径和机体免疫反应,并建立感染菌在体直接定量的分析方法。方法于分组大鼠左侧前列腺背叶注入大肠杆菌K88-GFP... 目的采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的大肠杆菌构建大鼠细菌性前列腺炎模型,观察细菌在组织中的侵袭路径和机体免疫反应,并建立感染菌在体直接定量的分析方法。方法于分组大鼠左侧前列腺背叶注入大肠杆菌K88-GFP液(1.49×109cfu.ml-1)0.05 ml,采用腺体表面荧光成像及组织切片荧光显微镜观察,研究荧光菌的感染侵袭过程以及机体的免疫反应,建立可视化细菌性前列腺炎模型。结果①通过表面拍照和病理切片得出细菌在腺体内主要侵袭途径,以及组织的病理变化过程。②测定从感染腺体内提取分离的GFP荧光强度,初步建立直接测定感染菌数量的方法。结论利用GFP标记的细菌可以构建可视化细菌性前列腺炎模型,利用荧光成像技术可以标定感染的程度并进行直接细菌计量,为进一步开展抗菌药PK/PD研究提供新思路。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 大肠杆菌 感染 前列腺炎 可视化 模型
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产肠毒素性大肠杆菌K88的致病特性及其益生菌的筛选 被引量:6
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作者 张赛群 朱红梅 +2 位作者 周涵韬 黄素芳 刘波 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期386-392,共7页
在获得绿色荧光蛋白(GFP)标记的菌株K88-GFP并证明其与K88具有遗传同质性的基础上,以K88-GFP为致病菌,腹腔注射侵染小鼠,在不同时间进行眼球采血,测定血液生理生化指标,并采取不同器官或组织,培养后利用紫外光激发K88-GFP的绿色荧光,观... 在获得绿色荧光蛋白(GFP)标记的菌株K88-GFP并证明其与K88具有遗传同质性的基础上,以K88-GFP为致病菌,腹腔注射侵染小鼠,在不同时间进行眼球采血,测定血液生理生化指标,并采取不同器官或组织,培养后利用紫外光激发K88-GFP的绿色荧光,观察计数这种产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)在小鼠体内的分布。同时通过体外抑制和活体饲喂试验,进行了益生菌的筛选。结果证实,ETEC致病菌具有较强的侵袭性,它可以侵袭小鼠肝、肾、心、肺及脑、肌肉等器官和组织,尤其可对肝、肾造成严重的损伤;筛选得到益生菌株PB JK-2,在体内外均对K88具有较好的抑制作用。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 K88 K88-GFP致病特性 益生菌
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烟草质体分裂蛋白NtFtsZs在大肠杆菌中的定位分析(英文) 被引量:1
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作者 王东 孔冬冬 +3 位作者 鞠传丽 胡勇 何奕昆 孙敬三 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第8期931-935,共5页
分别构建了两个烟草 (NicotianatabacumL .)质体分裂基因NtFtsZ1和NtFtsZ2与编码绿色荧光蛋白的gfpS65A、V68L、S72A基因相融合的原核表达载体 ,并导入大肠杆菌 (Escherichiacoli)JM10 9菌株中进行表达。全长NtFtsZs∶GFP融合蛋白在菌... 分别构建了两个烟草 (NicotianatabacumL .)质体分裂基因NtFtsZ1和NtFtsZ2与编码绿色荧光蛋白的gfpS65A、V68L、S72A基因相融合的原核表达载体 ,并导入大肠杆菌 (Escherichiacoli)JM10 9菌株中进行表达。全长NtFtsZs∶GFP融合蛋白在菌体中有规律地定位 ,暗示NtFtsZs能识别大肠杆菌潜在的分裂位点 ,并能与大肠杆菌的内源FtsZ发生聚合作用 ;融合蛋白的诱导表达抑制了宿主菌的分裂 ,形成了明显的丝状菌体 ,证明真核生物的ftsZ基因与大肠杆菌的ftsZ基因有相似的作用。同时构建了NtFtsZs不同缺失的原核表达载体 ,对这两个基因所编码蛋白不同结构域的功能做了初步分析。实验结果表明 ,烟草FtsZ蛋白的C端结构域与其在大肠杆菌细胞中的正确定位有关 ;而N端结构域与NtFtsZs∶GFP融合蛋白的聚合有关。 展开更多
关键词 烟草 质体分裂蛋白NtFtsZs 大肠杆菌 定位分析 质体分裂基因 绿色荧光蛋白 缺失表达 原核定位
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养猪微生物发酵床垫料中大肠杆菌K_(88)(Escherichia coli K_(88))生长动态分析
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作者 蓝江林 史怀 +1 位作者 陈倩倩 刘波 《福建农业科技》 CAS 2021年第12期1-6,共6页
为明确自然条件下养猪发酵床垫料对大肠杆菌生长的影响,探究大肠杆菌(Escherichia coli)在垫料中的生长状况,采用人工接种方法,将绿色荧光蛋白(GFP)标记的大肠杆菌K_(88)接种到养猪微生物发酵床垫料中;采用平板分离培养方法,观察大肠杆... 为明确自然条件下养猪发酵床垫料对大肠杆菌生长的影响,探究大肠杆菌(Escherichia coli)在垫料中的生长状况,采用人工接种方法,将绿色荧光蛋白(GFP)标记的大肠杆菌K_(88)接种到养猪微生物发酵床垫料中;采用平板分离培养方法,观察大肠杆菌K_(88)-GFP(Escherichia coli K_(88)-GFP)在垫料中的生长动态。结果表明:E.coli K_(88)-GFP在灭菌处理的新鲜垫料和使用1年的旧垫料中均能很好生长,分离培养168 h含量分别达到4.03×10^(8) cfu·g^(-1)和5.37×10^(8) cfu·g^(-1),在数量级上无显著差别;而在未灭菌处理的新鲜垫料和使用1年旧垫料中均不能生长。说明在自然环境下,养猪微生物发酵床垫料对大肠杆菌K_(88)的生长有抑制作用。 展开更多
关键词 大肠杆菌K_(88)GFP 微生物发酵床 动态模拟
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小番茄内生菌耐药基因检测及种植模型中GFP标记菌转移研究 被引量:1
6
作者 钟薇馨 石珂弋 +4 位作者 陈意群 王晓佩 陶皖豫 马凯雄 孙永学 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期55-60,共6页
【目的】调查广州市售小番茄内生菌中常用抗菌药物耐药基因流行情况及基于绿色荧光蛋白(GFP)标记的大肠埃希菌人工栽种模型探讨耐药基因转移进入小番茄果实内的可能性。【方法】采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法... 【目的】调查广州市售小番茄内生菌中常用抗菌药物耐药基因流行情况及基于绿色荧光蛋白(GFP)标记的大肠埃希菌人工栽种模型探讨耐药基因转移进入小番茄果实内的可能性。【方法】采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法分离鉴定市售小番茄内生菌,PCR定性检测内生菌中氯霉素类(cmlA)、四环素类(tetA和tetM)、磺胺类(sul1、sul2和sul3)和喹诺酮类(oqxA、oqxB、qnrB、qnrS和qepA)等药物耐药基因的流行情况;采用GFP标记–大肠埃希菌人工种植模型检测小番茄果实、叶片和根系中目标GFP菌,探讨内生菌及GFP标记进入小番茄内部的可能性。【结果】市售小番茄分离的52株内生菌菌株中,肠杆菌属Enterobacter和克雷伯菌属Klebsiella占有较高比例,几乎所有菌株均携带oqx B基因(总阳性率达92.31%),在人工种植模型第27天采集的果实中分离出含有GFP标记的内生菌。【结论】小番茄内生菌中oqx B基因最为流行,耐药基因可通过根系浇灌的方式转移到小番茄果实内。 展开更多
关键词 小番茄 种植模型 耐药基因 GFP标记–大肠埃希菌 内生菌
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基于巨噬细胞吞噬模型的阿胶品质生物评价方法构建 被引量:4
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作者 刘靖 郝俊杰 +2 位作者 刘士敬 肖小河 牛明 《中国现代中药》 CAS 2019年第6期771-776,781,共7页
目的:建立基于小鼠巨噬细胞系RAW264.7吞噬模型的阿胶生物活性评价方法。方法:采用CCK-8法考察细胞密度、孵育时间以及阿胶对巨噬细胞增殖活性的影响,确定合适的阿胶给药浓度。采用高内涵结合荧光成像技术,通过考察其感染复数(multiplic... 目的:建立基于小鼠巨噬细胞系RAW264.7吞噬模型的阿胶生物活性评价方法。方法:采用CCK-8法考察细胞密度、孵育时间以及阿胶对巨噬细胞增殖活性的影响,确定合适的阿胶给药浓度。采用高内涵结合荧光成像技术,通过考察其感染复数(multiplicity of infection,MOI,MOI=细菌数/细胞数)、给药剂量等影响因素,分析阿胶影响巨噬细胞的整体吞噬率及单个细胞吞噬指数。结果:确定最佳检测方法,即给药时间为24h、MOI值为200倍、细菌刺激时间为2h。与Control组相比,在阿胶质量浓度为0.125~2.0mg·mL^-1时,可促进巨噬细胞的增殖,在0.5mg·mL^-1时阿胶促进巨噬细胞的增殖能力达到最强;在阿胶质量浓度为0.25~1.0mg·mL^-1时,对单个细胞的吞噬能力没有明显作用,但是对巨噬细胞的整体吞噬率具有剂量依赖的促进作用,并在0.25mg·mL^-1时阿胶促进巨噬细胞吞噬率的能力达到最强。结论:本研究建立了以巨噬细胞吞噬绿色荧光标记的大肠杆菌(Green Fluorescent Protein-Escherichia coli,GFP-E.coli)为生物模型的高内涵荧光成像筛选技术的阿胶品质评价生物方法,可用于对不同品质阿胶的检测。 展开更多
关键词 阿胶 巨噬细胞 大肠杆菌 吞噬 生物评价
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Construction of Yeast Vectors with Resistance to Geneticin 被引量:3
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作者 林会兰 张广 +1 位作者 周全 陈国强 《Tsinghua Science and Technology》 SCIE EI CAS 2002年第4期384-386,392,共4页
Two Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae shuttle vectors containing a resistance marker to geneticin (G418) are constructed. Both vectors contain a kanamycin resistant marker (KanMX4) module coding aminoglyc... Two Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae shuttle vectors containing a resistance marker to geneticin (G418) are constructed. Both vectors contain a kanamycin resistant marker (KanMX4) module coding aminoglycoside 3' phosphotransferase (APH) that renders E. coli resistant to kanamycin and S. cerevisiae to geneticin. These vectors overcome the shortage of the conventional yeast vectors bearing HIS3, TRP1, LEU2, and URA3 modules as selection markers, which require hosts to be auxotrophic. Green fluorescent protein (GFP) is used as the reporter to examine the functions of the vectors. The vectors are powerful tools for the convenient cloning and controlled expression of genes in most S. cerevisiae strains. 展开更多
关键词 geneticin (G418) shuttle vector green fluorescent protein (GFP) Escherichia coli (E. coli) Saccharomyces cerevisiae
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