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代谢工程酵母菌合成紫杉烯的研究
被引量:
19
1
作者
王伟
孟超
+1 位作者
朱平
程克棣
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第8期103-108,共6页
紫杉烯是紫杉醇生物合成的重要中间体,为在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中建立一个生物合成紫杉烯的代谢途径,克隆了酵母的羟甲基戊二酰CoA(3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme A,HMG-CoA)还原酶基因和=牛儿基=牛儿基二磷酸(ger...
紫杉烯是紫杉醇生物合成的重要中间体,为在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中建立一个生物合成紫杉烯的代谢途径,克隆了酵母的羟甲基戊二酰CoA(3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme A,HMG-CoA)还原酶基因和=牛儿基=牛儿基二磷酸(geranylgeranyl diphosphate,GGDP)合酶基因,并构建了其融合表达载体pGBT9/HG;同时构建了包含紫杉烯合酶基因的表达载体pADH/TS;将这两个表达载体共转化酵母细胞,通过GC-MS分析检测工程酵母的代谢产物,结果表明获得的工程酵母能够合成紫杉烯,即在酵母细胞中建立了一个合成紫杉烯的代谢途径。
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关键词
酿酒酵母
羟甲基戊二酰CoA还原
酶
ggdp合酶
紫杉烯
合
酶
紫杉烯
生物
合
成
代谢工程
紫杉醇
酵母菌
融
合
表达载体
下载PDF
职称材料
大肠杆菌组合生物合成紫杉烯的研究
被引量:
6
2
作者
王伟
孔建强
+2 位作者
孟超
朱平
程克棣
《中国药学杂志》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2005年第18期1428-1431,共4页
目的在大肠杆菌中建立一个能够生物合成紫杉烯(紫杉醇生物合成的第一个重要中间体)的代谢途径。方法利用PCR方法克隆编码大肠杆菌1-脱氧-5-磷酸木酮糖(D-1-deoxyxylulose 5-phosphate,DXP)合酶和异戊烯二磷酸异构酶(isopentenyl diphosp...
目的在大肠杆菌中建立一个能够生物合成紫杉烯(紫杉醇生物合成的第一个重要中间体)的代谢途径。方法利用PCR方法克隆编码大肠杆菌1-脱氧-5-磷酸木酮糖(D-1-deoxyxylulose 5-phosphate,DXP)合酶和异戊烯二磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IDI)的基因,以及编码辣椒(Capsicum annuum)牻牛儿基牻牛儿基二磷酸(geranylgeranyl diphosphate,GGDP) 合酶的基因。分别构建含DXP合酶基因的表达载体pSLB208/DXP和含GGDP合酶与IDI异构酶基因的融合表达载体pAIG。将含紫杉烯合酶的表达载体pETB3和本研究构建的这2个表达栽体共转化大肠杆菌,诱导4个基因在大肠杆菌中共表达;并通过GC-MS分析大肠杆菌工程菌的代谢产物。结果在大肠杆菌中构建了一个合成紫杉烯的途径,通过GC-MS分析检测到紫杉烯的合成。结论利用代谢途径工程合成紫杉醇中间体是可行的,可为其他萜类化合物中间体代谢工程研究提供坚实的物质基础。
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关键词
DXP
合
酶
IDI异构
酶
ggdp合酶
紫杉烯
合
酶
紫杉烯
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职称材料
绿色荧光蛋白标记的表达载体pHis-EGFP的构建
被引量:
3
3
作者
王伟
孟超
+1 位作者
朱平
程克棣
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第9期35-39,共5页
为对重组蛋白的表达进行直观检测并简化蛋白纯化的步骤,构建了能在大肠杆菌中表达融合蛋白的通用表达载体pHis-EGFP。该载体含有源自表达载体pET-32a的T7启动子、终止子和源自质粒pUC18的ColE1复制子与绿色荧光蛋白报告基因。应用该载...
为对重组蛋白的表达进行直观检测并简化蛋白纯化的步骤,构建了能在大肠杆菌中表达融合蛋白的通用表达载体pHis-EGFP。该载体含有源自表达载体pET-32a的T7启动子、终止子和源自质粒pUC18的ColE1复制子与绿色荧光蛋白报告基因。应用该载体成功地表达并纯化了酵母GGDP(geranylgeranyldiphosphate,GGDP)合酶融合蛋白,结果表明所构建的载体是一个实用的表达载体,并建立了离子交换层析和亲和层析两步纯化融合蛋白的方法。
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关键词
表达载体
绿色荧光蛋白(EGFP)
ggdp合酶
绿色荧光蛋白标记
构建
蛋白纯化
融
合
蛋白
离子交换层析
T7启动子
PUC18
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职称材料
题名
代谢工程酵母菌合成紫杉烯的研究
被引量:
19
1
作者
王伟
孟超
朱平
程克棣
机构
中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第8期103-108,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(20172071)
国家"863"计划资助项目(2001AA23402)
北京市自然科学基金资助项目(5992012)
文摘
紫杉烯是紫杉醇生物合成的重要中间体,为在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中建立一个生物合成紫杉烯的代谢途径,克隆了酵母的羟甲基戊二酰CoA(3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme A,HMG-CoA)还原酶基因和=牛儿基=牛儿基二磷酸(geranylgeranyl diphosphate,GGDP)合酶基因,并构建了其融合表达载体pGBT9/HG;同时构建了包含紫杉烯合酶基因的表达载体pADH/TS;将这两个表达载体共转化酵母细胞,通过GC-MS分析检测工程酵母的代谢产物,结果表明获得的工程酵母能够合成紫杉烯,即在酵母细胞中建立了一个合成紫杉烯的代谢途径。
关键词
酿酒酵母
羟甲基戊二酰CoA还原
酶
ggdp合酶
紫杉烯
合
酶
紫杉烯
生物
合
成
代谢工程
紫杉醇
酵母菌
融
合
表达载体
Keywords
Saccharomyces cerevisiae 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase geranylgeranyl diphosphate synthase Taxadiene synthase Taxadiene
分类号
Q591 [生物学—生物化学]
TQ465.5 [化学工程—制药化工]
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职称材料
题名
大肠杆菌组合生物合成紫杉烯的研究
被引量:
6
2
作者
王伟
孔建强
孟超
朱平
程克棣
机构
中国医学科学院-中国协和医科大学药物研究所
出处
《中国药学杂志》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2005年第18期1428-1431,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(20172071)国家863计划资助项目(2001AA23402)北京市自然科学基金(5992012)
文摘
目的在大肠杆菌中建立一个能够生物合成紫杉烯(紫杉醇生物合成的第一个重要中间体)的代谢途径。方法利用PCR方法克隆编码大肠杆菌1-脱氧-5-磷酸木酮糖(D-1-deoxyxylulose 5-phosphate,DXP)合酶和异戊烯二磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IDI)的基因,以及编码辣椒(Capsicum annuum)牻牛儿基牻牛儿基二磷酸(geranylgeranyl diphosphate,GGDP) 合酶的基因。分别构建含DXP合酶基因的表达载体pSLB208/DXP和含GGDP合酶与IDI异构酶基因的融合表达载体pAIG。将含紫杉烯合酶的表达载体pETB3和本研究构建的这2个表达栽体共转化大肠杆菌,诱导4个基因在大肠杆菌中共表达;并通过GC-MS分析大肠杆菌工程菌的代谢产物。结果在大肠杆菌中构建了一个合成紫杉烯的途径,通过GC-MS分析检测到紫杉烯的合成。结论利用代谢途径工程合成紫杉醇中间体是可行的,可为其他萜类化合物中间体代谢工程研究提供坚实的物质基础。
关键词
DXP
合
酶
IDI异构
酶
ggdp合酶
紫杉烯
合
酶
紫杉烯
Keywords
D-1-deoxyxylulose 5-phosphate synthase
isopentenyl diphosphate isomerase
geranylgeranyl diphosphate synthase
taxadienesynthase
taxadiene
分类号
R914 [医药卫生—药物化学]
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职称材料
题名
绿色荧光蛋白标记的表达载体pHis-EGFP的构建
被引量:
3
3
作者
王伟
孟超
朱平
程克棣
机构
中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第9期35-39,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(20172071)
国家"863"计划资助项目(2001AA23402)
文摘
为对重组蛋白的表达进行直观检测并简化蛋白纯化的步骤,构建了能在大肠杆菌中表达融合蛋白的通用表达载体pHis-EGFP。该载体含有源自表达载体pET-32a的T7启动子、终止子和源自质粒pUC18的ColE1复制子与绿色荧光蛋白报告基因。应用该载体成功地表达并纯化了酵母GGDP(geranylgeranyldiphosphate,GGDP)合酶融合蛋白,结果表明所构建的载体是一个实用的表达载体,并建立了离子交换层析和亲和层析两步纯化融合蛋白的方法。
关键词
表达载体
绿色荧光蛋白(EGFP)
ggdp合酶
绿色荧光蛋白标记
构建
蛋白纯化
融
合
蛋白
离子交换层析
T7启动子
PUC18
Keywords
Expression vector Enhanced green fluorescent protein (EGFP) Geranylgeranyl diphosphate synthase
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
S941.42 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
代谢工程酵母菌合成紫杉烯的研究
王伟
孟超
朱平
程克棣
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
19
下载PDF
职称材料
2
大肠杆菌组合生物合成紫杉烯的研究
王伟
孔建强
孟超
朱平
程克棣
《中国药学杂志》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2005
6
下载PDF
职称材料
3
绿色荧光蛋白标记的表达载体pHis-EGFP的构建
王伟
孟超
朱平
程克棣
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
3
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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