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检测SortaseA酶催化蛋白质连接效率的新型报道系统
被引量:
1
1
作者
李健
王鹏举
+2 位作者
崔云凤
邹培建
秦刚
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期284-293,共10页
利用分子进化技术对Sortase A酶的催化活性进行定向改造已经成为当前的研究热点和重点,为了高效筛选特定催化活性的Sortase A酶突变体,需要建立一种能够快速准确鉴定Sortase A酶活性的方法。为此,设计了由GFP-LPETG蛋白和GGGYK-Biotin...
利用分子进化技术对Sortase A酶的催化活性进行定向改造已经成为当前的研究热点和重点,为了高效筛选特定催化活性的Sortase A酶突变体,需要建立一种能够快速准确鉴定Sortase A酶活性的方法。为此,设计了由GFP-LPETG蛋白和GGGYK-Biotin组成的新型报道底物系统。利用重组基因工程技术,成功制备GFP-LPETG蛋白,野生型Sortase A酶及近期报道的一个高活性突变型Sortase A酶。以GFP-LPETG及GGGYK-Biotin为报道底物建立连接体系,结果显示,连接反应动力学可直接通过SDS-PAGE凝胶电泳法精确测定。用此连接体系比较野生型与突变型Sortase A酶催化的连接反应效率,证实高活性突变酶具有野生酶无法比拟的高催化活性。此报道系统简单快速灵敏,可应用于系统的筛选,为后续进一步定向优化Sortase A酶奠定了基础。
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关键词
Sortase
A酶
连接反应效率
报道底物
GFP-LPETG蛋白
gggyk-biotin
高活性突变体
原文传递
题名
检测SortaseA酶催化蛋白质连接效率的新型报道系统
被引量:
1
1
作者
李健
王鹏举
崔云凤
邹培建
秦刚
机构
天津科技大学生物工程学院
中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期284-293,共10页
基金
中国科学院百人计划项目(No.KSCW2-YW-BR-4)
天津科技支撑计划项目(No.11ZCZDSY08100)资助~~
文摘
利用分子进化技术对Sortase A酶的催化活性进行定向改造已经成为当前的研究热点和重点,为了高效筛选特定催化活性的Sortase A酶突变体,需要建立一种能够快速准确鉴定Sortase A酶活性的方法。为此,设计了由GFP-LPETG蛋白和GGGYK-Biotin组成的新型报道底物系统。利用重组基因工程技术,成功制备GFP-LPETG蛋白,野生型Sortase A酶及近期报道的一个高活性突变型Sortase A酶。以GFP-LPETG及GGGYK-Biotin为报道底物建立连接体系,结果显示,连接反应动力学可直接通过SDS-PAGE凝胶电泳法精确测定。用此连接体系比较野生型与突变型Sortase A酶催化的连接反应效率,证实高活性突变酶具有野生酶无法比拟的高催化活性。此报道系统简单快速灵敏,可应用于系统的筛选,为后续进一步定向优化Sortase A酶奠定了基础。
关键词
Sortase
A酶
连接反应效率
报道底物
GFP-LPETG蛋白
gggyk-biotin
高活性突变体
Keywords
sortase A, protein ligation efficency, reporter substrates, GFP-LPETG~
gggyk-biotin
, high activity mutant
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
检测SortaseA酶催化蛋白质连接效率的新型报道系统
李健
王鹏举
崔云凤
邹培建
秦刚
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
原文传递
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