重组猪生长激素对猪脂肪组织GH-R、IGF-1、IGF-R和Leptin基因表达的影响

选用体质量 5 0 kg左右的去势长白×大约克公猪 16头 ,随机分为试验组和对照组 ,试验组猪每日肌肉注射重组猪生长激素 (rp GH) 4 m g/头 ,2 8d后屠宰采集背部皮下脂肪 ,用 RT- PCR方法 ,以 18S r RNA作内标 ,定量分析脂肪组织中生长激素受体 (GH- R)、胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)、胰岛素样生长因子 型受体 (IGF- R)和瘦蛋白(L eptin)的 m RNA丰度。结果显示 ,试验猪脂肪细胞 GH- R m RNA丰度比对照猪增加了 5 0 .9% (P<0 .0 5 ) ,IGF- 1m RNA丰度增加 2 7.8% (P<0 .0 5 ) ,IGF- R m RNA丰度增加 4 8.1% (P<0 .0 1) ,而 L eptin m RNA丰度则比对照猪减少 2 8.2 % (P<0 .0 5 )。结果提示 ,生长激素不仅可以直接调节脂肪组织 ,还可能通过脂肪 GH- R介导产生 IGF- 以旁 (自 )

二花脸和大白猪的脂肪组织中GH-R、IGF-1和IGF-ⅠR基因表达的发育性变化

分别于出生当天、3、2 0、30、4 5、90、12 0、180日龄随机屠宰二花脸公、母猪各 4头 (30日龄仅有公猪 ) ,于 2 0、30、90、12 0、180日龄随机屠宰大白猪公猪 4头 ,采集背部皮下脂肪组织。用RT PCR方法 ,以 18SrRNA作内标 ,定量分析脂肪组织中生长激素受体 (GH R)、胰岛素样生长因子 1(IGF 1)及胰岛素样生长因子Ⅰ型受体 (IGF ⅠR)基因表达的发育性变化 ,并进行品种和性别间比较。结果表明 :脂肪组织中GH RmRNA的表达有明显的发育性变化及品种差异 ,二花脸母猪GH RmRNA水平出生时较低 ,4 5日龄达到高峰 ,之后维持稳定 ;二花脸公猪GH RmRNA水平在出生时较高 ,至 4 5日龄达到最高值 ,之后显著下降 ,但总体上没有性别差异 ;大白猪公猪GH RmRNA水平极显著低于二花脸公猪 (P <0 0 1)。脂肪组织中IGF 1mRNA的表达有明显的发育性变化及性别和品种差异 ,二花脸母猪显著低于公猪 (P <0 0 5 ) ,大白猪公猪极显著低于二花脸公猪 (P <0 0 1) ;脂肪组织中IGF ⅠRmRNA的表达有明显的发育性变化 ,但在总体上没有明显的性别和品种差异。结果提示 :猪脂肪组织中GH R、IGF 1和IGF ⅠR的基因表达有特定的发育模式 ,IGF 1基因表达的品种差异可能正是两品种猪脂肪沉积规律不同的主要原因之一。

绵羊皮肤中GHR、IGF-1和IGF-1R基因表达的发育性变化及品种特点

采用相对定量反转录多聚酶链式反应（RT-PCR）方法，以18S rRNA作内标，研究了罗米丽（Romilly Hillys）×中国美利奴（新疆军垦型）杂交一代优质细毛羊和哈萨克粗毛羊皮肤中生长激素受体（GHR）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）和胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）mRNA发育性变化并进行了品种间比较。分别于30、60、90、135、180和255日龄称重、采毛样，并于30、90、135和255日龄采皮样。结果表明：粗毛羊和细毛羊体重、羊毛生长的发育模式没有明显的差异，30-135日龄体重迅速增加，135～255日龄增重十分缓慢；30-135日龄羊毛日增长逐渐增加，135-180日龄羊毛生长十分缓慢，而180-255日龄又上升到较高水平。粗毛羊皮肤中GHRmRNA在30～90曰龄显著增加（P〈0．05），90日龄达到高峰，此后显著下降（P〈0．05）；细毛羊在135日龄时GHR mRNA极显著地升高（P〈0．01），此后又极显著地下降。粗毛羊皮肤中IGF-1、IGF-1R mRNA30—90日龄上升，90日龄之后极显著下降（P〈0．01）：细毛羊皮肤中IGF—1、IGF-1R mRNA出生时较高，然后逐渐下降。品种之间比较，细毛羊GHR mRNA出现高峰晚于粗毛羊，135日龄高峰时显著地高于粗毛羊；粗毛羊IGF—1、IGF-1RmRNA在90日龄出现高峰，并极显著或显著地高于细毛羊；粗毛羊90日龄前GHR、IGF-1和IGF-1RmRNA高于细毛羊，之后低于细毛羊。结果提示：绵羊皮肤中GHR，IGF-1和IGF-1R基因表达有特定的发育模式，并存在品种差异。

Ghrelin的胃肠动力学研究进展

Ghrelin是1999年被发现的生长激素促分泌激素受体的内源性配体,是胃动素相关类家族的调节肽。Ghrelin主要由胃基底部泌酸腺X/A样细胞分泌,并释放进入血液循环。它除了可以刺激生长激素、泌乳刺激素及促肾上腺皮质激素释放外,还可以促进食欲、增强胃肠动力、刺激胃酸分泌、影响睡眠节律、调节胰腺内分泌功能、调节糖代谢、能量代谢等。此文综述了Ghrelin在胃肠动力方面的研究进展。

生长激素促分泌素受体及其内源性配体ghrelin与胃肠运动

复习生长激素促分泌素受体(GHS-R)及其内源性配体ghrelin的获得和特点,综合分析两者对胃肠动力方面的影响和机制,以及它们在治疗胃肠动力障碍的前景。

Ghrelin对大鼠消化间期胃肠肌电活动的影响及其受体在消化道的分布特征

目的探讨ghrelin对大鼠消化间期复合肌电活动(IMC)的影响及其机制。方法采用免疫组织化学和图像分析方法观察ghrelin受体(生长激素促分泌素受体,GHS-R)在大鼠消化道的分布特征;采用多导生理记录仪监测大鼠消化间期IMC,观察静脉给予ghrelin对胃肠IMC的影响;采用放射免疫法测定静脉给予ghrelin前后,IMC不同时相的血浆胃动素浓度。结果①GHS-R在胃肠道的肠肌丛和黏膜下丛有表达,胃腺体均有GHS-R免疫强阳性广泛表达,在肠腺体的阳性表达较少。②静脉给予ghrelin促进胃肠IMC,IMC周期缩短,Ⅲ相时程缩短,Ⅲ相占IMC周期百分比无显著性改变;静脉注射ghrelin后,血浆胃动素周期性波动规律不受影响,各相应时相胃动素浓度与ghrelin作用前比较无显著性差异。结论 GHS-R主要分布于大鼠消化道的肠肌丛和黏膜下丛,在胃腺体有免疫强阳性表达,在小肠腺有少量阳性表达。Ghrelin可促进胃肠运动,此作用与胃动素没有明显关系。

Ghrelin对大鼠小肠转运的作用及对中枢和胃肠道c-Fos表达的影响

目的观察静脉注射ghrelin对大鼠小肠转运的作用及对中枢和胃肠道c-Fos表达的影响。方法大鼠禁食24h,静脉注射ghrelin(2、5、10、20μg/kg),经预先埋置在十二指肠内的导管注入伊文氏蓝溶液,观察不同剂量ghrelin对大鼠小肠转运的影响及ghrelin受体拮抗剂(D-Lys3)GHRP-6对其作用的影响。采用免疫组织化学和图像分析方法观察静脉给予ghrelin对大鼠中枢和胃肠道的c-Fos蛋白的激活情况;观察(D-Lys3)GHRP-6对ghrelin作用的影响。结果 1静脉给予ghrelin 2μg/kg对大鼠小肠转运无显著影响,给予ghrelin 5、10、20μg/kg可剂量依赖性促进小肠转运,此作用可被(D-Lys3)GHRP-6阻断。2静脉注射ghrelin可激活中枢多个部位的c-Fos表达,包括下丘脑室旁核、弓状核、杏仁内侧核、迷走神经背核、孤束核、延髓最后区和胸腰段脊髓背角c-Fos均有表达;胃、十二指肠、空肠和近端结肠肠神经丛的c-Fos有不同程度的表达,其中以胃和近端结肠的c-Fos表达最为显著。应用ghrelin受体拮抗剂(D-Lys3)GHRP-6可抑制ghrelin激活的c-Fos表达。结论 Ghrelin可促进小肠转运,其促动力作用由其受体GHS-R所介导;静脉给予ghrelin可通过肠神经系统和中枢神经系统调节小肠运动。

周易象数切脉疗法对功能性消化不良患者Ghrelin、GHS-R分子表达变化的影响

目的观察周易象数切脉疗法对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)患者血清胃促生长素(Ghrelin)释放及胃体黏膜Ghrelin、生长激素促分泌物受体(growth hormone secretagogue recepter,GHS-R)分子表达变化的影响.方法观察对象为80例FD合格受试者.治疗组40例行周易象数切脉疗法治疗,莫沙必利西药组40例予枸橼酸莫沙必利分散片口服治疗,检测2组治疗前、治疗第7、14、21天血清Ghrelin的变化情况;同时检测治疗前后胃体黏膜Ghrelin、GHS-R分子表达变化.结果治疗前,血清Ghrelin、胃体黏膜Ghrelin、GHS-R比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,2组血清Ghrelin含量、胃体黏膜Ghrelin、GHS-R与治疗前比较增高显著,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后2组同一时间点Ghrelin含量比较,差异有统计学意义(P<0.05);采用Spearman相关性分析,结果显示,血清Ghrelin与胃体黏膜Ghrelin、GHS-R表达呈正相关(P=0.002,P=0.001).结论周易象数切脉疗法对功能性消化不良患者良好的临床疗效可能与上调胃肠激素Ghrelin释放及胃体黏膜Ghrelin、GHS-R表达升高相关.

Ghrelin及其受体和酰基化酶在羔羊不同组织的表达差异研究

采用real-time PCR检测生长激素释放肽(Ghrelin)及其受体(GHS-R)和酰基化转移酶(GOAT)在羔羊下丘脑、垂体、瘤胃、皱胃底、皱胃窦、十二指肠、空肠、回肠、心、肝、脾、肾、胰腺、睾丸的mRNA表达水平。结果显示,Ghrelin、GHS-R和GOAT mRNA在羔羊各组织中均有表达,其中Ghrelin mRNA主要表达于皱胃底(P<0.01),其次是十二指肠和胰腺(P<0.05);GHS-R mRNA主要表达于垂体(P<0.01),其次是下丘脑(P<0.05);GOAT mRNA在皱胃底和睾丸的表达水平相对较高,均显著高于其他组织(P<0.05)。研究结果表明,Ghrelin系统在反刍动物组织中广泛分布,Ghrelin可能与GHS-R和GOAT共同参与协调羔羊生长调控、摄食等功能的调节作用,为进一步研究反刍动物体内Ghrelin的生物学功能奠定了基础。

侧脑室微量注射ghrelin对大鼠小肠转运和肌电活动的影响及作用机制

目的探讨侧脑室微量注射ghrelin对大鼠小肠转运和小肠消化间期复合肌电活动(interdigestive myoelectric complex,IMC)的影响及作用机制。方法 1大鼠分别接受十二指肠导管置入及侧脑室套管置入,在禁食状态下经侧脑室给予ghrelin(0.4,1.6或6.4μg/kg),经十二指肠导管注入伊文氏蓝溶液,观察不同剂量ghrelin对禁食大鼠小肠转运的影响。另两组大鼠分别经侧脑室给予ghrelin受体拮抗剂(D-Lys3)GHRP-6(3.7μg/kg),(D-Lys3)GHRP-6(3.7μg/kg)+ghrelin(6.4μg/kg),探讨ghrelin的作用机制。2大鼠分别接受肠道电极置入及侧脑室套管置入,在禁食状态下采用多道生理记录仪监测消化间期MC,观察侧脑室微量注射ghrelin(6.4μg/kg)对大鼠小肠IMC的影响。经侧脑室给予(D-Lys3)GHRP-6(3.7μg/kg)和NPY抗体(4μg/kg),再经侧脑室给予ghrelin(6.4μg/kg);经静脉给予阿托品(1 mg/kg)、酚妥拉明(1 mg/kg)或普萘洛尔(1 mg/kg),再经侧脑室给予ghrelin(6.4μg/kg),观察侧脑室注射ghrelin对IMC影响的作用机制。结果 1侧脑室微量注射ghrelin 0.4μg/kg对大鼠小肠转运无显著影响,ghrelin 1.6μg/kg和6.4μg/kg促进小肠转运,此促进作用可被(D-Lys3)GHRP-6阻断。2侧脑室微量注射ghrelin促进十二指肠和空肠IMC,使IMC周期缩短,Ⅲ相频率和振幅增加,Ⅲ相时程缩短,对Ⅲ相占IMC周期百分比无显著性改变。阿托品和(D-Lys3)GHRP-6不同程度地抑制ghrelin的促动力效应;酚妥拉明和普萘洛尔对ghrelin的促动力作用无显著影响。结论侧脑室微量注射ghrelin可促进小肠运动,这可能是通过外周胆碱能通路起作用,ghrelin受体GHS-R参与其促动力作用。

电针对功能性消化不良大鼠下丘脑和海马胃促生长素及受体mRNA表达的影响

目的观察电针对功能性消化不良(FD)大鼠下丘脑和海马胃促生长素(Ghrelin)及Ghrelin受体(GHS-R)m RNA表达的影响。方法将80只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、药物治疗组和电针治疗组,每组20只。采用夹尾造模法复制FD大鼠模型,药物治疗组采用西沙必利溶液灌胃治疗,电针治疗组采用电针治疗。4组均采用Western blot法检测下丘脑和海马Ghrelin蛋白水平的表达,Real-time PCR法检测下丘脑和海马GHS-R m RNA的表达。结果与模型对照组比较,药物治疗组大鼠下丘脑Ghrelin蛋白、下丘脑、海马GHS-R m RNA的表达均升高(P<0.05),电针治疗组大鼠下丘脑、海马Ghrelin蛋白GHS-R m RNA的表达上调(P<0.05);与药物治疗组比较,电针治疗组大鼠海马Ghrelin蛋白和GHS-R m RNA的表达上调(P<0.05)。结论电针和药物可通过调节FD大鼠下丘脑和海马Ghrelin蛋白和GHS-R m RNA的含量,激活下丘脑神经元和海马兴奋性突触,通过海马-下丘脑通路,发挥胃肠效应,良性调节脑肠轴的失衡状态。

建鲤生长激素促泌素受体1基因的特性及其与增重相关SNP位点的筛选

GHS-R基因在哺乳类为候选的肥胖和生长数量性状位点。本实验使用RT-PCR及PCR的方法,从建鲤(Cyprinus carpio var.jian)分离到2个jlGHS-R1s,称为jlGHS-R1a和jlGHS-R1b(分别简称1a和1b)。jlGHS-R1s的阅读框编码360个氨基酸,两者间相似性高达96%;另外还存在2个jlGHS-R1s的转录变体(分别简称1a'和1b'),选择性切割了翻译起始碱基后第490-680 nt的191 bp片段,该片段两端碱基分别为gt-ag,这种选择性切割导致翻译提前终止,仅翻译184个氨基酸,包括前面3个半跨膜区,这与已报道的罗非鱼等的保留内含子的转录变体不同。jlGHS-R1s的阅读框被1个内含子分隔,该内含子位于第260个氨基酸密码子的第1和第2个碱基之间,1a和1b的内含子长度分别为676 bp和885 bp。使用分段PCR在建鲤群体的1a和1b基因上共找到32个SNP位点,构建PCR-RFLP法对其中9个SNPs进行基因型检测,结果发现各种基因型在322尾建鲤中均有出现,但存在着明显的偏分布。与增重的相关分析表明,位点1a-I_C386T和1b-E1_G159T与雌雄鱼鱼种和成鱼阶段增重分别呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)相关,CC型和GG型个体增重最快,另外有5个位点则与其中的某阶段或者某性别的增重相关,为了确定上述所得标记的适用性,选取其中4个标记在另外7个家系共610尾鱼中检测,结果 C386T和G159T还是与增重呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)相关,可用于建鲤分子育种。

肺脾两虚型COPD模型大鼠下丘脑、胃组织Ghrelin及其受体的表达变化

目的：观察肺脾两虚型慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠下丘脑组织、胃组织中生长激素释放肽（Ghrelin）及其受体GHS-R的变化,结合脑肠轴调节作用探究其在COPD肺脾两虚型大鼠模型中的作用。方法：48只Wistar大鼠随机分为空白组、肺脾两虚型COPD观察组（根据造模时间不同,分为28,35,42 d组）,每组12只。空白组大鼠吸入空气＋气管内注射等量生理盐水＋灌服等量生理盐水;观察组烟熏＋气管内滴注脂多糖（造模第1,14天）＋灌服冰冷番泻叶浸液至造模结束。于造模28,35,42 d末将大鼠处死,取大鼠胃组织及下丘脑组织,分别采用蛋白免疫印迹法（Western blot）,免疫组化法及实时荧光定量PCR法（Real-time PCR）检测大鼠各组织中脑肠肽Ghrelin及其受体GHS-R的蛋白含量及mRNA水平,观察其在疾病过程中的动态表达。结果：与空白组比较,模型组大鼠随着造模时间的增长,其下丘脑、胃组织中Ghrelin及其受体GHS-R的蛋白表达逐渐减少（P〈0.05）;同时,模型组各组大鼠下丘脑、胃组织Ghrelin及GHS-R的平均吸光度呈不同程度减少（P〈0.05）;另外,模型组大鼠下丘脑组织、胃组织的mRNA表达水平也不同程度降低（P〈0.05）。结论：Ghrelin及其受体在下丘脑组织、胃组织中的表达变化或许是引起COPD合并营养不良的原因之一,脑肠轴的调节作用在COPD营养状况不良状况中起着重要作用。

胰腺内分泌肿瘤ghrelin和受体GHS-R1A的表达及患者血浆ghrelin、瘦素水平

目的 检测胰腺内分泌肿瘤患者血浆及肿瘤组织ghrelin水平、血浆瘦素水平,探讨它们之间的关系及临床意义.方法 采用ELISA法检测11例胰腺内分泌肿瘤患者的术前血浆ghrelin及瘦素水平,以28例正常志愿者作为对照.免疫组织化学染色法检测11个肿瘤和27个对照组织ghrelin及其受体GHS-R1A的表达.并与临床病理资料进行相关分析.结果 胰腺内分泌肿瘤患者血浆ghrelin水平为（16.0±5.0）pg/ml,显著低于对照组的（21.0±2.0）pg/ml（P=0.047）;瘦素水平为（0.34±0.03）ng/ml,与对照组的（0.38±0.04）ng/ml无显著差异.肿瘤患者的血浆ghrelin与瘦素水平呈正相关（P=0.015）,但与各项临床病理指标均不相关;对照组的血浆瘦素水平与体重指数呈正相关（P=0.002）,而肿瘤患者两者不相关.肿瘤组织ghrelin的表达率明显低于对照组织（64%对100%,P=0.004）,而GHS-R1A的表达率与对照组无显著差异.肿瘤组织ghrelin和GHS-R 1A的表达与各项临床病理指标均不相关.结论 胰腺内分泌肿瘤表达ghrelin及GHS-R1A,患者血浆ghrelin及瘦素水平发生变化.

5个鸭品种生长激素基因座位遗传多态性检测

应用PCR-SSCP技术首次分析5个品种鸭生长激素基因座位5’端调控区、外显子与部分内含子和3’端调控区中的多态位点,对具有多态性的位点进行测序,以探讨鸭生长激素基因遗传变异情况,比较不同品种该基因座位遗传多样性差异。结果在5个品种鸭中共检测到5个多态位点,多态位点频率在5个不同品种鸭中存在明显差异。序列比较分析结果表明:鸭生长激素基因座位5’端与3’端调控区和外显子序列具有极高的保守性,在5个鸭品种间不存在任何差异,所测出的序列与已知鸭GH序列相应部分完全一致。检测出的6处突变点(包括4个替换、1个插入和1个缺失)均位于内含子区域。推测鸭生长激素基因表达差异可能受内含子序列影响。

生长素的发现及研究进展

生长素(ghrelin)及其受体的发现使内分泌代谢调节的研究取得了明显的进展。除对生长激素轴的影响,生长素对机体多系统的调节作用越来越引起人们关注。而其细胞及分子机制的研究及可能的临床试用是目前研究的重点。本文简述了该系统的发现、发展及进一步研究的方向。

生长激素释放剂受体启动子的结构和功能分析

目的 利用构建好的含有生长激素释放剂受体（GHS-R）启动子区不同长度的缺失突变体的重组质粒,对GHS-R启动子区的结构和功能进行初步分析.方法 将重组质粒转染GH3细胞,用双荧光素酶报道系统检测各个重组子的启动子活性,筛选GHS-R启动子区重要的转录调控区域.结果 pGL3-Enhancer-B相对活性（8.40±0.86）比pGL3-Enhaneer-A（2.30±0.21）显著升高;pGL3-Enhancer-C相对活性（5.20±0.30）比pGL3-Enhancer-B（8.40±0.86）明显下降;pGL3-Enhancer-D相对活性（10.60±0.54）比pGL3-Enhancer-C（5.20±0.30）明显升高;pGL3-Enhancer-E相对活性（14.10±0.74）比pGL3-Enhancer-D（10.60±0.54）明显升高.结论 GHS-R启动子上游-254～-168之间,-625～-355之间,-910～-625之间存在正性调控区域;而在-355～-254之间存在负性调控区域.