Effects of fulvestrant on biological activity and Wnt expression in rat GH3 cells

The present study investigated the influence of anti-estrogen treatment （fulvestrant） on pituitary adenoma cell line GH3 biological activity, the estrogen receptor a pathway, the WnT pathway, and mechanisms of decreased Wnt inhibitory factor-1 expression in GH3 cells. Results showed that fulvestrant suppressed GH3 cell proliferation and reduced hormone secretion in a dose-dependent manner. Estrogen receptor a and Wnt4 expression decreased, but Wnt inhibitory factor-1 expression increased in a dose-dependent manner following fulvestrant treatment, and β-catenin expression remained unchanged. Inhibitors of DNA methylation and histone modification upregulated Wnt inhibitory factor-1 expression. Results suggested that fulvestrant suppressed biological activity of GH3 cells via the estrogen receptor a and Wnt pathways. These results suggested that decreased Wnt inhibitory factor-1 expression in GH3 cells played a role in epigenetic mechanisms. Anti-estrogen therapies could provide novel treatments for growth hormone adenomas.

氟维司群对泌乳素瘤GH3细胞系增殖和分泌的影响

目的探讨雌激素受体拮抗剂氟维司群对泌乳素腺瘤GH3细胞增殖和分泌泌乳素的影响。方法将GH3细胞分为对照组、不同浓度的氟维司群组(0.04、1、25、625 nM)和雌二醇组。观察氟维司群和雌二醇对GH3细胞活力、泌乳素水平、凋亡以及转化生长因子-β3(Transforming growth factorβ3,TGF-β3)的影响。结果与对照组相比,雌二醇组GH3细胞活力明显增加(P<0.01),氟维司群25 nM组和625 nM组细胞活力分别下降35.3%和42.4%,差异显著(P<0.01)。与对照组和雌二醇组相比,1 nM组凋亡细胞增加,差异有统计学意义(P<0.05),25 nM组和625 nM组凋亡细胞数分别占总细胞数12.9%和17.3%,差异显著(P<0.01)。与对照组相比,氟维司群能抑制泌乳素分泌,25 nM组和625 nM组分别下降62.3%和81.6%,差异显著(P<0.01)。蛋白印迹试验证实雌激素可抑制TGF-β3表达,随着氟维司群浓度增加,TGF-β3表达量逐渐上升。结论雌二醇可促进GH3细胞增殖和泌乳素分泌,而雌激素受体拮抗剂氟维司群能够有效抑制雌激素作用,期间有TGF-β3参与,为泌乳素瘤临床治疗提供新的药物选择。

大鼠MKNK2过表达载体构建及其在GH3细胞系的表达

为了扩增克隆大鼠MKNK2基因,构建其真核过表达载体并转染GH3细胞系,研究其对生长激素(GH)的影响,为后续研究MKNK2基因的功能及其在大鼠垂体细胞的作用提供试验基础,试验依据NCBI数据库中预测的大鼠MKNK2基因序列,以大鼠垂体c DNA为模板,采用常规克隆技术获得大鼠MKNK2基因CDs区并对其进行分子遗传进化分析,然后将其构建到真核过表达载体并命名为MKNK2-pc DNA3.1,最后将此过表达载体用LipofectamineTM2000转染GH3细胞,应用qRT-PCR检测GH1和PIT1基因表达。结果表明:成功获得了大鼠MKNK2基因,构建了真核表达载体MKNK2-pc DNA3.1,分子遗传进化分析发现MKNK2基因相对保守。说明过表达大鼠MKNK2基因对GH3细胞的生长相关基因GH1和PIT1具有显著促进作用(P<0.05)。

p38 MAPK通路特异性抑制剂SB203580对大鼠垂体GH3细胞增殖和分泌的影响

目的观察p38 MAPK通路特异性抑制剂SB203580对生长激素腺瘤GH3细胞增殖和分泌的影响,以探索p38 MAPK通路作为生长激素腺瘤潜在治疗靶点的可行性。方法 MTT实验检测不同浓度SB203580处理生长激素腺瘤GH3细胞24、48和72 h后细胞增殖活力。不同浓度的SB203580处理生长激素腺瘤GH3细胞72 h后经Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪分析细胞凋亡的情况。ELISA检测不同浓度的SB203580处理生长激素腺瘤GH3细胞72 h后细胞上清中生长激素的分泌水平。结果 SB203580能够有效抑制生长激素腺瘤GH3细胞的增殖(P <0.05),并呈现良好的时间依赖性与浓度依赖性。不同浓度的SB203580能够显著诱导生长激素腺瘤GH3细胞凋亡(P <0.05)。SB203580处理泌生长激素腺瘤GH3细胞可显著降低生长激素水平(P <0.05),呈现良好的浓度依赖性。结论 p38 MAPK通路特异性抑制剂SB203580可抑制生长激素腺瘤GH3增殖和生长激素分泌,并能促进细胞凋亡。

异氰酸烯丙酯对大鼠垂体腺瘤细胞生物活性的影响及机制

目的 观察异氰酸烯丙酯对大鼠垂体腺瘤细胞(GH3细胞)生物活性的影响,并探讨其作用机制。方法 常规培养大鼠GH3细胞,将细胞随机分为0.1、1、10μmol/L实验组及对照组,分别给予终浓度0.1、1、10μmol/L异硫氰酸烯丙酯及等体积DMSO继续培养。用细胞增殖试验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,ELISA法检测细胞培养上清液中生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1),Western blotting法检测细胞内细胞周期相关蛋白[周期蛋白激酶-4(CDK-4)、p21、p27蛋白]表达。结果 培养24、48、72 h,对照组及0.1、1、10μmol/L实验组增殖能力(OD值)逐渐降低(P均<0.05),G1期细胞比例逐渐升高、S期细胞比例逐渐降低(P均<0.05),细胞培养上清液中GH、IGF-1水平逐渐降低(P均<0.05),CDK4蛋白相对表达量逐渐降低、p21和p27蛋白相对表达量逐渐升高(P均<0.05)。结论 异硫氰酸烯丙酯素可抑制GH3细胞生物活性,其机制可能与调控细胞周期相关蛋白(CDK4、p21、p27蛋白)表达有关。

Heregulin-1可调节垂体细胞ErbB受体磷酸化

目的 Heregulin-1是重要的内皮样生长因子家族成员,本研究观察体外条件下重组Heregulin-1α对垂体GH3细胞ErbB受体磷酸化激活水平、时相变化规律影响以及恒河猴垂体组织中Heregulin-1及其受体表达.方法 给予过夜培养GH3细胞重组Heregulin-1α 0～10nM,分别于给药10min,6h,24h和48h提取细胞蛋白,行Western blot,检测磷酸化ErbB-3受体和GAPDH,定义磷酸化ErbB-3受体与GPADH比值（P/G）为磷酸化水平.使用免疫荧光双标法检测恒河猴垂体组织Heregulin-1及ErbB-4受体的表达与分布.结果 体外给予重组Heregulin-1α可引起ErbB-3受体的快速持续的磷酸化激活,以5和10nM Heregulin-1α效果显著;GH3细胞ErbB-3受体自分泌激活,提示GH3细胞可自身合成并释放一定量的Heregulin-1.免疫荧光显示Heregulin-1及其受体ErbB-4可部分表达于恒河猴垂体组织细胞中,但无明显共位.结论 本研究提示Heregulin-1α/ErbB受体信号通路存在于垂体瘤细胞系及高等动物垂体组织中,其生理功能及在垂体肿瘤发生中的作用有待深入研究.