白细胞介素1β促进GH_3细胞中人生长激素基因表达的机制

目的研究白细胞介素1β(IL-1β)对大鼠垂体GH3细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其可能的调节机制。方法采用荧光素酶报告基因方法。建立含hGH基因启动子(-484～30bp)和荧光素酶融合基因的稳定转染GH3细胞株,然后加入IL-1β或IL-1β与胞内信号转导途径的抑制剂,通过检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量以及GH3细胞内荧光素酶的变化,反映IL-1β对GH分泌、合成、hGH基因启动子活性的影响及可能的作用机制。结果IL-1β(10～104U/ml)均能刺激大鼠垂体GH3细胞中GH的分泌和合成,102～104U/ml的IL-1β还能剂量依赖性地增加细胞中荧光素酶的表达熏最高达对照组的161%;在胞内信号转导抑制剂中,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂PD98059(40μmol/L)和p38MAPK抑制剂SB203580(5μmol/L)均能完全阻断IL-1β促进GH3细胞中荧光素酶表达的作用,磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)抑制剂LY294002(10μmol/L)能部分抑制IL-1β的促进作用;Pit-1蛋白过表达和表达被抑制对IL-1β的促进作用没有影响;在含不同长度hGH基因启动子序列的质粒中,IL-1β促进GH3细胞中hGH基因启动子活性的关键序列在-196～-132bp之间。结论IL-1β能增强垂体GH3细胞中hGH基因的启动子的活性,此作用可能需要激活细胞内依赖MAPK。

东亚马氏钳蝎部分纯化的神经毒素对GH＿3细胞钠电流的影响

马氏钳蝎粗毒经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析分离后可得到几个组分。其中峰Ⅱ毒素对蜚蠊毒性较大，而峰Ⅲ毒素对小白鼠毒性较大，可以认为它们是部分纯化的昆虫类毒素和哺乳类毒素。用膜片箝全细胞记录方式研究了峰Ⅱ、峰Ⅲ毒素对大鼠垂体前叶克隆化细胞ＧＨ＿３细胞钠电流的影响，结果表明峰Ⅲ毒素使钠电流失活变慢，是典型的α型哺乳类毒素；而峰Ⅱ毒素使电压依赖性钠激活曲线显著地向负的方向移动。这种部分纯化的昆虫类毒素对一种哺乳动物细胞钠电流的影响表现出典型的β型哺乳类毒素的性质。