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靶向B细胞的口蹄疫GHloop多肽抗原的制备及免疫效力鉴定
1
作者
侯立婷
张媛媛
+7 位作者
于晓明
杜露平
张元鹏
程海卫
乔绪稳
李丁
郑其升
陈瑾
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2023年第3期74-81,共8页
本研究将葡萄球菌A蛋白人工合成类似物的二聚体(DD)与口蹄疫的GHloop串联,按照大肠杆菌偏好性密码子优化合成GHloop-DD,并评价其免疫原性。将GHloop-DD插入到原核表达载体pET-32a中,鉴定阳性后转入E.coli BL21进行诱导表达。利用SDS-PAG...
本研究将葡萄球菌A蛋白人工合成类似物的二聚体(DD)与口蹄疫的GHloop串联,按照大肠杆菌偏好性密码子优化合成GHloop-DD,并评价其免疫原性。将GHloop-DD插入到原核表达载体pET-32a中,鉴定阳性后转入E.coli BL21进行诱导表达。利用SDS-PAGE与Western blot对目的基因表达产物的可溶性进行分析。利用镍亲和层析柱纯化目的蛋白;利用BCA试剂盒测定重组蛋白的浓度,将重组蛋白(2.5μg/只)与206佐剂乳化,制备疫苗,免疫5周龄小鼠,同时设商品化合成肽苗对照与空白对照。免疫后28 d采集试验小鼠血清,利用口蹄疫病毒多肽ELISA抗体检测试剂盒检测免疫小鼠血清的抗体水平;利用流式细胞仪测定淋巴结B细胞的数量及骨髓中长寿浆细胞的数量;利用荧光定量检测相关趋化因子的表达水平;利用细胞因子检测试剂盒检测脾脏淋巴细胞刺激后上清液中的细胞因子的水平。SDS-PAGE结果表明,GHloop-DD基因在大肠杆菌中以可溶形式获得高水平表达;Western blot结果显示,表达的重组蛋白能够与特异性抗体发生反应。免疫试验结果表明,GHloop-DD不但能够刺激免疫小鼠产生高水平的多肽特异性ELISA抗体,而且能够提高淋巴结B细胞的数目及相关趋化因子水平,使骨髓中长寿浆细胞的数量和脾脏淋巴细胞刺激后上清液中细胞因子的水平显著提高。以上结果表明,本研究制备的GHloop-DD具有良好的免疫原性,为口蹄疫多肽疫苗的研制提供了新的方向。
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关键词
ghloop
-DD
体液免疫
B细胞
长寿浆细胞
下载PDF
职称材料
利用霍乱毒素B亚单位展示猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白主要抗原表位
被引量:
4
2
作者
李图帅
陈瑾
+5 位作者
乔绪稳
汪浩
张元鹏
侯继波
郑其升
胡元亮
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第3期601-607,共7页
为探讨以霍乱毒素B亚单位为载体制备口蹄疫亚单位疫苗的可行性,利用E.coli表达CTB-GHloop嵌合基因,用SDS-PAGE分析目的基因的表达及表达产物的可溶性,利用神经节苷脂(GM1)为抗原鉴定重组蛋白五聚体的形成。将目的蛋白浓度调整为200μg/...
为探讨以霍乱毒素B亚单位为载体制备口蹄疫亚单位疫苗的可行性,利用E.coli表达CTB-GHloop嵌合基因,用SDS-PAGE分析目的基因的表达及表达产物的可溶性,利用神经节苷脂(GM1)为抗原鉴定重组蛋白五聚体的形成。将目的蛋白浓度调整为200μg/ml,以白油佐剂乳化制备疫苗,免疫健康仔猪,免疫后利用ELISA测定特异性抗体水平,评价免疫后体液免疫反应,利用淋巴细胞增殖实验评价细胞免疫水平。结果表明嵌合基因在E.coli中获得高效表达,重组蛋白可溶,并能够形成五聚体;Western-blot结果显示重组蛋白能够与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生反应;以每头仔猪200μg免疫,试验猪产生较高的抗体水平与细胞免疫反应。
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关键词
重组霍乱毒素B亚单位
猪O型口蹄疫病毒
ghloop
抗原表位
亚单位疫苗
下载PDF
职称材料
题名
靶向B细胞的口蹄疫GHloop多肽抗原的制备及免疫效力鉴定
1
作者
侯立婷
张媛媛
于晓明
杜露平
张元鹏
程海卫
乔绪稳
李丁
郑其升
陈瑾
机构
江苏省农业科学院动物免疫工程研究所
江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心
兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心
省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2023年第3期74-81,共8页
基金
江苏省农业自主创新专项(CX(20)3096)。
文摘
本研究将葡萄球菌A蛋白人工合成类似物的二聚体(DD)与口蹄疫的GHloop串联,按照大肠杆菌偏好性密码子优化合成GHloop-DD,并评价其免疫原性。将GHloop-DD插入到原核表达载体pET-32a中,鉴定阳性后转入E.coli BL21进行诱导表达。利用SDS-PAGE与Western blot对目的基因表达产物的可溶性进行分析。利用镍亲和层析柱纯化目的蛋白;利用BCA试剂盒测定重组蛋白的浓度,将重组蛋白(2.5μg/只)与206佐剂乳化,制备疫苗,免疫5周龄小鼠,同时设商品化合成肽苗对照与空白对照。免疫后28 d采集试验小鼠血清,利用口蹄疫病毒多肽ELISA抗体检测试剂盒检测免疫小鼠血清的抗体水平;利用流式细胞仪测定淋巴结B细胞的数量及骨髓中长寿浆细胞的数量;利用荧光定量检测相关趋化因子的表达水平;利用细胞因子检测试剂盒检测脾脏淋巴细胞刺激后上清液中的细胞因子的水平。SDS-PAGE结果表明,GHloop-DD基因在大肠杆菌中以可溶形式获得高水平表达;Western blot结果显示,表达的重组蛋白能够与特异性抗体发生反应。免疫试验结果表明,GHloop-DD不但能够刺激免疫小鼠产生高水平的多肽特异性ELISA抗体,而且能够提高淋巴结B细胞的数目及相关趋化因子水平,使骨髓中长寿浆细胞的数量和脾脏淋巴细胞刺激后上清液中细胞因子的水平显著提高。以上结果表明,本研究制备的GHloop-DD具有良好的免疫原性,为口蹄疫多肽疫苗的研制提供了新的方向。
关键词
ghloop
-DD
体液免疫
B细胞
长寿浆细胞
Keywords
ghloop
-DD
humoral immune
B cell
long-life plasma cell
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
利用霍乱毒素B亚单位展示猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白主要抗原表位
被引量:
4
2
作者
李图帅
陈瑾
乔绪稳
汪浩
张元鹏
侯继波
郑其升
胡元亮
机构
南京农业大学动物医学院
国家兽用生物制品工程技术研究中心
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第3期601-607,共7页
基金
江苏省农业科技自主创新专项[CX(14)2089]
文摘
为探讨以霍乱毒素B亚单位为载体制备口蹄疫亚单位疫苗的可行性,利用E.coli表达CTB-GHloop嵌合基因,用SDS-PAGE分析目的基因的表达及表达产物的可溶性,利用神经节苷脂(GM1)为抗原鉴定重组蛋白五聚体的形成。将目的蛋白浓度调整为200μg/ml,以白油佐剂乳化制备疫苗,免疫健康仔猪,免疫后利用ELISA测定特异性抗体水平,评价免疫后体液免疫反应,利用淋巴细胞增殖实验评价细胞免疫水平。结果表明嵌合基因在E.coli中获得高效表达,重组蛋白可溶,并能够形成五聚体;Western-blot结果显示重组蛋白能够与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生反应;以每头仔猪200μg免疫,试验猪产生较高的抗体水平与细胞免疫反应。
关键词
重组霍乱毒素B亚单位
猪O型口蹄疫病毒
ghloop
抗原表位
亚单位疫苗
Keywords
cholera toxin B
type O foot-and-disease virus
ghloop
subunit vaccine
分类号
S859.797 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
靶向B细胞的口蹄疫GHloop多肽抗原的制备及免疫效力鉴定
侯立婷
张媛媛
于晓明
杜露平
张元鹏
程海卫
乔绪稳
李丁
郑其升
陈瑾
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
利用霍乱毒素B亚单位展示猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白主要抗原表位
李图帅
陈瑾
乔绪稳
汪浩
张元鹏
侯继波
郑其升
胡元亮
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2016
4
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职称材料
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