诺如病毒新型GII.4流行株Sydney_2012在上海地区的检出和鉴定

为了解上海地区诺如病毒相关急性胃肠炎疫情的流行病学特点及流行株基因型的演化情况，2012年3月至2013年2月，收集上海市两处哨点医院成人急性胃肠炎粪便样本进行诺如病毒的分子检测并对其基因特征进行系统分析。在502份样本中，GI群共检出19例，检出率3．78％，呈现低位流行、全年散发的状态，无明显的季节分布；GII群检出86例，检出率17．13％，在10～12月出现高位流行，并发现中老年人群GII群诺如病毒检出率显著高于青年个体（Pd0．05）。同时首次于2012年9月在上海地区检出新型GII．4变异株Sydney-2012，证实是该变异株引发了2012年秋冬季诺如病毒急性胃肠炎的高位流行。序列分析表明该变异株为GII．e型开放阅读框（Openreadingframe，ORF）1与GII．4型ORF2的重组体，目前已成为本地区的优势流行株。研究发现，2012年上海地区出现GII．4新型变异株Sydney_2012，并引发秋冬季诺如病毒急性胃肠炎的高位流行。

诺如病毒GⅡ.4型流行株基因序列分析和流行病学研究

目的研究诺如病毒的基因特征和变化规律,预测诺如病毒的进化方向及流行趋势,为预防诺如病毒病的暴发打下良好基础。方法采用RNA提取试剂Trizol提取诺如病毒毒株RNA,采用试剂盒TaKaRa Ex TAP进行PCR扩增,利用Bioedit软件对基因序列进行拼接,然后对基因序列分析。将PCR扩增出的P区域克隆到表达载体,构建原核表达质粒。在大肠埃希菌中表达P蛋白,重组蛋白经SDS-PAGE凝胶分离检测。以ABO血型健康人唾液为受体研究P粒子与唾液HBGA结合能力,检测方法采用间接ELISA法。结果实验用诺如病毒毒株与GⅡ.4流行株在RdRp区的核苷酸序列同源性达到94%以上,其中US95/96株94%,Farmington Hills株94.2%,Hunter株94.7%,DenHaag2006b株95.8%,Osaka2007株96.5%,NewOrleans2009株97.2%,Sydney2012株98.4%。实验株与GⅡ.4流行株在衣壳蛋白区的核苷酸序列同源性达到94%以上,其中US95/96株94.3%,Farmington Hills株94.1%,Hunter株95.2%,DenHaag2006b株96.3%,Osaka2007株96.8%,NewOrleans2009株97.8%,Sydney2012株98.6%；氨基酸同源性达到96%以上,其中US95/96株为96.1%,Farmington Hills株96.3%,Hunter株97.1%,DenHaag2006b株96.8%,Osaka2007株97.3%,NewOrleans2009株97.8%,Sydney2012株98.9%。实验株在RdRp区核糖核苷酸序列的与Neworleans2009和Sydney2012同源性较高,实验株中P2区氨基酸位点发生多点位定向突变,如P2区第95位由天冬酰胺（N）突变为组氨酸（H）。重组蛋白经SDS-PAGE凝胶分离检测产物大小为35ku的目的蛋白表达。检测P粒子与唾液HBGA结合能力（A450值）血型A为3.815.12；血型B为3.124.05；血型O为2.853.51。结论诺如病毒在遗传上具有多样性,变异快的特点,因而很难有疫苗对它长期安全有效。通过对GII.4型基因序列的研究,有助于寻找其关键位点变化规律和流行株进化机理,有助于预测诺如病毒的进化方向及流行趋势。