糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体及其配体mRNA在哮喘大鼠中性粒细胞上的表达及布地奈德干预的研究

目的:观察布地奈德对哮喘大鼠外周血中性粒细胞上糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)及其配体(GITRL)表达水平的影响。方法:将30只清洁级SD大鼠随机分为3组:对照组、哮喘组、布地奈德干预组,取外周血进行中性粒细胞的分离提纯,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)方法检测GITR/GITRL mRNA在中性粒细胞上的表达。结果:哮喘组中性粒细胞上的GITR/GITRL mRNA的表达水平(△CT分别为3.10±0.23,13.48±2.40)显著高于对照组(△CT分别为5.16±0.70,15.79±1.27)及布地奈德干预组(△CT分别为4.83±0.93,15.63±1.73)(均P<0.05);而布地奈德干预组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。对各组的GITR/GITRL mRNA表达水平进行直线相关分析,结果显示两者表达呈正相关(R2=0.669,P<0.01)。结论:中性粒细胞可能通过GITR/GITRL信号通路参与哮喘的气道炎症过程,布地奈德可能通过下调中性粒细胞上的GITR/GITRL的表达从而减轻哮喘气道炎症反应。

类风湿关节炎患者外周血中糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关基因及其配体的表达和意义

目的:研究糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关基因(GITR)与其配体(GITRL)在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的表达及其与临床指标的相关性,探讨GITR/GITRL在RA中的意义。方法:采用实时荧光定量PCR法检测RA组(n=53)、骨关节炎(OA)组(n=35)及正常对照组(n=35)外周血GITR/GITRLmRNA含量,同时利用流式细胞仪检测上述三组患者的GITR在CD4+CD25+T细胞的表达,并研究GITRmRNA与RA患者DAS28评分、抗环瓜氨酸(CCP)抗体、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)及类风湿因子(RF)的关系。结果:RA患者外周血GITRmRNA水平和GITRLmRNA水平(分别为12.38±5.72,16.41±10.16)明显高于正常对照组(分别为8.75±3.78,11.99±8.42)及OA组(分别为9.59±5.87,12.09±7.53;均P<0.05)。RA患者与OA组及正常对照组比较,外周血CD4+CD25+GITR+T细胞的比例也明显增高[分别为(28.12±16.85)%,(21.01±14.42)%,(19.98±9.40)%,均P<0.05]。RA患者GITRmRNA表达水平与DAS28评分及ESR呈明显正相关(r值分别为0.361和0.427,P<0.01)。结论:RA患者GITR/GITRL表达增多,与RA发病及疾病活动度有关。

小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白生物信息学分析

目的获取小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白（GITR）氨基酸序列,并预测其结构和功能。方法利用网络平台及相关生物学软件对小鼠GITR氨基酸序列进行生物信息学分析。结果小鼠GITR氨基酸序列与人等其他物种具有56%的同源性,具有信号肽、胞外区、跨膜区及胞内区等结构;小鼠GITR蛋白胞外区位于第22-153号氨基酸序列区间;可能含有4个N-糖基化位点、4个丝氨酸磷酸化位点、1个苏氨酸磷酸化位点以及1个酪氨酸磷酸化位点。结论小鼠GITR氨基酸序列的生物信息学分析为进一步表达该蛋白及其相关功能研究奠定了基础。

动脉粥样硬化大鼠颈总动脉糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体的表达及意义

目的:通过检测动脉粥样硬化大鼠颈总动脉中糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor ligand,GITRL)的表达,探讨GITRL在动脉粥样硬化过程中的变化及意义。方法:建立大鼠动脉粥样硬化模型,取其颈总动脉,观察粥样硬化病变,采用免疫组织化学及蛋白质印迹(Western blotting)法检测GITRL的表达。结果:动脉粥样硬化大鼠颈总动脉的血管壁脂质沉积明显增多;弹性纤维不完整,连续性破坏、中断。动脉粥样硬化大鼠颈总动脉血管内GITRL的表达水平明显高于非动脉粥样硬化大鼠。结论:GITRL作为高脂饮食后表达上调的一种血管炎性分子,有望作为预测动脉粥样硬化发生的一种独立危险因素。

糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体在调节性T细胞的表达及功能

糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)是肿瘤坏死因子家族成员,在调节性T(Treg)细胞组成性高表达。自身免疫炎症过程中GITR的表达增加,参与调节Treg细胞活性并进一步诱导效应T细胞活化。GITR配体(GITRL)使GITR活化后导致Treg细胞的抑制功能下降。另外,GITR与多种细胞的凋亡相关,但GITR信号在机体免疫系统中的作用及GITR与T细胞之间的关系目前仍不清楚。

系统性红斑狼疮患者CD4+ CD25 + T细胞糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体和叉状头螺旋转录因子的表达及意义

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者CD4 + CD25 + T细胞糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)和叉状头螺旋转录因子(Foxp3)的表达及意义。方法采用流式细胞术检测40例SLE患者(SLE组)和13例健康对照者(对照组)外周血辅助性T细胞17(Thl7细胞)和调节性T细胞(Treg细胞)占CD4+ T细胞的百分比及CD4 + CD25 + T细胞Foxp3和GITR的表达并进行比较。分析SLE组患者上述指标与SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分及狼疮肾炎(LN)的关系。结果SLE组Thl7细胞百分比、Thl7细胞百分比/Treg细胞百分比及CD4+ CD25 + T细胞GITR的阳性表达率均高于对照组,Treg细胞百分比低于对照组(P<O.05)。SLE组CD4+CD25 + T细胞GITR的阳性表达与SLEDAI评分呈正相关(P<0. 05).高疾病活动组Treg细胞百分比低于低疾病活动组,CD4 + CD25 + T细胞GITR的阳性表达率高于低疾病活动组(P<0. 05)。LN组Thl7细胞百分比和CD4 + CD25 + T细胞GITR的阳性表达率均高于非LN组(P<0.05).结论SLE患者存在免疫失调和Thl7细胞百分比/Treg细胞百分比失调,GITR的表达与SLE密切相关。

糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体在Tregs介导下的免疫耐受作用的研究进展

糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced TNF receptor,GITR)是胸腺和外周淋巴器官中调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)表达的一个重要功能分子,在Tregs的分化和扩张中起关键性作用,是人类Tregs非常有效的标记物,在Tregs的免疫调节中发挥重要作用。GITR具有许多重要的生物学活性,包括细胞的增殖、分化、存活和凋亡等,其相互作用可打破Tregs介导的免疫耐受,诱发或加重自身免疫性疾病,如哮喘、糖尿病、关节炎、系统性红斑狼疮等。妊娠选择了免疫耐受这一基本机制,Tregs在保护胎儿免受母体免疫攻击方面发挥重要作用,许多研究已表明:在妊娠期间中断Tregs的相互作用会导致胎儿特异性抗原的产生,继而导致不良妊娠结局。综述GITR在Tregs介导下的免疫耐受作用。

肿瘤坏死因子-α对角质形成细胞株HaCaT细胞糖皮质激素受体表达的影响

目的:研究肿瘤坏死因子(TNF)-α对角质形成细胞糖皮质激素受体(GR)表达的影响。方法:采用反转录实时定量PCR和Western blotting观察经TNF-α作用后,培养的人角质形成细胞株HaCaT细胞的GRα、GRβ mRNA和蛋白质的表达情况。结果:TNF-α对HaCaT细胞GRα的表达无明显影响,但可上调HaCaT细胞GRβ的表达,并且呈剂量和时间依赖。结论:TNF-α可增加GRβ的表达,可能是炎性细胞因子参与诱发糖皮质激素皮肤耐受现象的内在机制之一。

糖皮质激素受体-α、核因子-κB、肿瘤坏死因子-α和白介素-1β在慢性皮炎中的表达

目的:探讨糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)-α、核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-1β在慢性皮炎中的表达及其意义。方法:采用SP免疫组化染色技术检测慢性皮炎与正常对照皮肤中GR-α、NF-κB、TNF-α及IL-1β的表达及其分布。结果:GR-α在慢性皮炎组与正常对照组皮肤中阳性表达的分布情况一致,GR-α不但在表皮呈弥漫性表达,还可表达于汗腺及汗管、真皮成纤维细胞、微血管内皮细胞及其周围的一些细胞成分。然而,与正常对照皮肤相比,GR-α在慢性皮炎皮损角质形成细胞及真皮血管内皮细胞的表达明显减弱。NF-κB在慢性皮炎组与正常对照组皮肤中阳性表达主要分布在表皮角质形成细胞中,在正常对照组皮肤中均为胞质表达,而在慢性皮炎组中为胞质表达和(或)胞核均有表达。TNF-α及IL-1β在慢性皮炎与正常对照皮肤角质形成细胞胞质中的表达无明显差异,为弱阳性反应。结论:慢性皮炎皮损区角质形成细胞中GR-α的表达下调有可能会影响皮损局部的抗炎机制。

慢性肾功能衰竭肾阳虚型大鼠肾组织细胞糖皮质激素受体、细胞白介素-1β及肿瘤坏死因子-α的变化

目的研究肾阳虚型慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾组织细胞糖皮质激素受体(GR)及白介素-1(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎性因子的变化,探讨CRF肾阳虚证的证候学基础。方法采用腺嘌呤灌胃复制肾阳虚型CRF模型,并设正常组、模型组(腺嘌呤每日200 mg/kg)、济生肾气丸组(腺嘌呤每日200 mg/kg+济生肾气丸每日40 g/kg)、保肾康组(腺嘌呤每日200 mg/kg+保肾康每日33.3 mg/kg),保肾康为对照组。实验全过程24 d,第1～12日每日灌胃1次,第12日后隔日灌胃1次。实验结束,用酶联免疫吸附法测定肾组织IL-1β、INF-α及GR的水平。结果模型组大鼠肾组织细胞IL-1β、INF-α水平明显升高,GR水平明显降低。济生肾气丸组、保肾康组与模型组比较IL-1β、INF-α水平显著降低,GR水平显著升高。济生肾气丸组同保肾康组比较IL-1β、INF-α明显降低,GR水平明显升高。结论 IL-1β、INF-α及GR与CRF肾阳虚证密切相关;济生肾气丸能降低IL-1β、TNF-a水平,并能提高GR的活性。

肿瘤坏死因子及其单克隆抗体对肾病综合征复发患者糖皮质激素受体表达的影响

【目的】研究肿瘤坏死因子α（TNF-α及其单克隆抗体（简称单抗）对肾病综合征（NS）复发患者外周血单个核细胞（PBMC）糖皮质激素受体（GR）亚型表达的影响。[方法]25例NS患者根据病情分为NS复发组（A组，13例）、NS稳定组（B组，12例）；ELISA法检测两组及正常对照组（C组）TNF-α、TNF—α单抗干预前后的PBMC培养液上清中ORa、GRp的蛋白表达。【结果】干预前A组GRn表达低于B、c组，GR8表达高于B、C组，且差异均有显著性（P〈0．05）。TNF-α干预后三组GRβ表达较干预前高，A组GRa较干预前低，差异均有显著性（P〈0．05），TNF-α及其单抗干预后三组GR8表达较各TNF-α干预组低，A组GRd表达较其TNF-α干预组高（P〈0．05），较干预前则均无明显变化（P〉0．05）。TNF-α单抗干预后A组GRα表达较干预前高，GRf]表达较干预前低，且差异均有显著性（P〈0．05）。[结论]NS复发与GRa表达减低、GRβ表达亢进有关，TNF-α可能通过引起GR亚型比例改变参与Ns复发，而其单抗可缓解这种改变。

阻断糖皮质激素受体对严重烫伤大鼠血浆肿瘤坏死因子含量的影响

目的：为进一步阐明烫伤后糖皮质激素受体（ＧＲ）减少，对血浆肿瘤 坏死因子（ＴＮＦ）含量的影响。方法 以 ＲＵ３８４８６阻断大鼠体内的 ＧＲ，观察其血 浆肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）含量的变化。结果 烫伤８小时后，大鼠血浆中ＴＮＦ含量 是对照组的１２．５倍（Ｐ＜０．０１），复合ＧＲ阻断后，将进一步提高。结论 烫伤后 ＧＲ减少，可导致体内ＴＮＦ释放增多，这可能正是ＧＲ减少加重烫伤后肺、肾功能 衰竭的原因之一。

糖皮质激素受体激动剂地塞米松对大鼠血清促炎因子IL-6、TNF-α表达及神经病理性疼痛的影响

目的:探索坐骨神经分支选择性损伤诱导的早期神经病理性疼痛(SNI)模型中给予糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)激动剂对痛行为及促炎因子IL-6、TNF-α分泌的影响。方法:成年雄性SD大鼠随机均分为四组:Sham+Vehicle(生理盐水组),SNI+Vehicle组,SNI+DEX(GR激动剂地塞米松)组,SNI+RU(GR抑制剂米非司酮)组。Von Frey纤维丝检测各组大鼠缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)的变化;Western Blot和免疫荧光染色检测各组脊髓中GR的表达水平;Elisa检测血清IL-6和TNF-α表达变化。结果:与SNI+Vehicle组比较,SNI+DEX组大鼠PWT阈值和脊髓GR的表达增高(P<0.05),血清IL-6和TNF-α浓度降低(P<0.05);SNI+RU组大鼠PWT阈值和脊髓GR表达降低(P<0.05),血清IL-6和TNF-α浓度升高(P<0.05)。结论:GR在脊髓水平能够通过下调促炎因子IL-6和TNF-α的表达缓解SNI诱导的早期神经病理性疼痛。

嗜酸粒细胞型哮喘患儿外周血单个核细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2 mRNA和M2巨噬细胞检测及意义

目的:检测嗜酸粒细胞型哮喘(EA)患儿外周血单个核细胞(PBMC)肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)mRNA和M2巨噬细胞,并分析其意义。方法:回顾性收集EA患儿100例,根据糖皮质激素(ICS)治疗后2周内症状缓解情况,分为完全缓解组(78例)和部分缓解组(22例)。另选取体检健康儿童52例,设为对照组。比较三组临床资料[肺功能、血常规、呼出气一氧化氮(FeNO)]、TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞占比、治疗前后免疫细胞[辅助性T细胞1(Th1)、辅助性T细胞2(Th2)]以及细胞因子[白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-13、精氨酸酶1(Arg-1)]。分析EA患儿预后的影响因素,并进行相关性分析。结果:完全缓解组和部分缓解组用力肺活量(FVC)、呼吸流量峰值(PEF)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞(LYM)、白细胞(WBC)、FeNO与对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05),但两组间上述指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。治疗前,完全缓解组与部分缓解组TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞占比、M2/M1、IL-4、IL-13、IL-2、Arg-1高于对照组,Th1、Th1/Th2、IFN-γ低于对照组,且完全缓解组TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞、Th1、IL-4、IL-13、Arg-1与部分缓解组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。治疗后,完全缓解组和部分缓解组TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞占比、M2/M1、IL-4、IL-13、IL-2、Arg-1降低,Th1、Th1/Th2、IFN-γ升高,且完全缓解组与部分缓解组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞、IL-4、IL-13、Arg-1为EA患儿预后的影响因素(均P<0.05)。Pearson分析结果显示,M2巨噬细胞与IL-4、IL-13呈负相关,与TIPE2 mRNA、Arg-1呈正相关;TIPE2 mRNA与IL-4、IL-13的水平呈负相关(均P<0.05)。结论:EA患儿PBMC中TIPE2 mRNA与M2巨噬细胞呈高表达,均为影响预后的因素。

TNF-α和IL-1对大鼠肝细胞糖皮质激素受体表达及功能的影响

目的 研究TNF α和IL 1对大鼠肝细胞糖皮质激素受体 (GR)的表达和转录激活能力的影响 ,探讨炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的内在机制。方法 免疫细胞化学染色分析经TNF α和IL 1刺激培养后BRL 3A大鼠肝细胞株GR的表达和核转位变化 ,应用糖皮质激素反应元件报告质粒pMAMneo CAT分析系统观察GR的转录激活能力改变。结果 BRL 3A细胞经TNF α和IL 1刺激培养 12h后 ,其胞浆和胞核GR蛋白水平的表达明显降低 ,尤以核内GR降低更加显著 ;转染pMAMneo CAT质粒的肝细胞在地塞米松存在情况下 ,经TNF α和IL 1刺激后CAT含量显著下降 ,两者协同效果更加明显。结论 TNF α和IL 1可以通过降低BRL 3细胞GR的表达和核转位而抑制GR的转录激活能力 ,这可能是炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的主要机制。

单用长效β2肾上腺素受体激动剂与联合糖皮质激素治疗老年中重度慢性阻塞性肺病患者的疗效比较

目的观察吸入性糖皮质激素(ICS)联合长效β2肾上腺素受体激动剂(LABA)、单独使用LABA对老年中重度COPD患者的疗效。方法选取102例稳定的老年中重度COPD患者,随机分成治疗组与对照组,治疗组吸入布地奈德福莫特罗粉吸入剂,对照组吸入福莫特罗,共治疗6个月。分别于治疗前和治疗3、6个月测定患者肺功能第1秒用力呼吸容积(FEV1)占预计值%、FEV1/用力肺活量(FVC)、检测血中白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度,测定外周血有核细胞糖皮质激素受体(GR)-αmRNA、GR-βmRNA百分比,并进行圣乔治呼吸问卷评分。结果无论是治疗组还是对照组,与治疗前相比,治疗3、6个月的FEV1%、FEV1/FVC%逐渐上升(P<0.05);治疗3、6个月血中TNF-α、IL-8浓度均逐渐下降(P<0.05);治疗后外周血有核细胞GR-αmRNA表达水平逐渐上升,GR-βmRNA表达水平逐渐下降(P<0.05);治疗后圣乔治评分逐渐下降(P<0.05)。与对照组相比,治疗组患者的FEV1%、FEV1/FVC%治疗后上升的幅度更大;治疗组TNF-α、IL-8下降的幅度更大(P<0.05);治疗组GR-αmRNA上升的幅度更大,GR-βmRNA下降的幅度更大(P<0.05);治疗组圣乔治评分下降的幅度更大(P<0.05)。结论 LABA、ICS/LABA都能够改善老年中重度COPD患者的肺功能,减轻炎症反应,调节GR,改善生活质量,而且ICS/LABA优于单一LABA治疗。

大鼠严重烫伤早期应激反应中肝脏糖皮质激素受体变化的实验研究

目的 研究大鼠在严重烫伤早期应激反应中肝脏糖皮质激素受体 (GR)的表达变化及意义 ,探讨影响GR改变的分子机制。方法 通过免疫印迹分析GR在严重烫伤后早期不同时相点肝脏中的表达变化及烫伤血清、细胞因子以及高浓度地塞米松对体外培养肝细胞GR表达的影响 ;应用放免和ELISA方法测定烫伤大鼠血清皮质酮和细胞因子TNF α、IL 1β的浓度变化。 结果 大鼠肝脏GR的表达在严重烫伤后早期显著下调 ,而血清皮质酮和血清炎性细胞因子在烫伤早期均显著升高 ,体外实验则证实烫伤血清和TNF α、IL 1对培养肝细胞GR的表达有明显抑制作用 ,高浓度地塞米松作用则不明显。结论 严重烫伤会引起大鼠肝脏GR表达显著下调 ,烫伤早期分泌增多的炎性细胞因子可能是引起GR下调的主要原因之一 。

青藤碱通过糖皮质激素受体发挥抗炎作用的研究

目的观察阻断及沉默Raw264.7细胞糖皮质激素受体(GR)对青藤碱(SIN)抗炎作用的影响。方法采用小鼠巨噬细胞系Raw264.7为研究对象,以脂多糖(LPS)诱导细胞炎症模型,选择糖皮质激素药地塞米松(Dex)作为阳性药,选用GR特异性拮抗剂米非司酮(Ru486)进行干预,并采用si RNA技术沉默GR。ELISA检测细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的变化,Western blot检测GR的表达,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测TNF-α、IL-6 m RNA水平的变化。结果 q RT-PCR和ELISA检测结果显示LPS刺激下Raw264.7细胞的TNF-α与IL-6在m RNA和蛋白水平均升高(P<0.05),Dex和SIN作用后均可明显降低其表达(P<0.05),但在GR拮抗剂干预下,Dex和SIN的抗炎作用被抑制,与LPS组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。炎症状态下,GR蛋白表达较正常组明显降低(P<0.05),Dex和SIN对GR蛋白表达的影响不明显(P>0.05)。si RNA技术成功沉默GR蛋白表达后,Dex和SIN的抗炎作用明显被减弱(P<0.05)。结论SIN能通过作用于GR发挥抗炎作用,具有类皮质激素样作用,GR是SIN发挥抗炎作用的靶点之一。

TNF-α对人糖皮质激素受体表达的影响

目的:研究TNF-α对人糖皮质激素受体(GR)表达的影响,探讨炎性细胞因子与糖皮质激素抵抗的相关性.方法:分离人外周血单个核细胞(PBMCs),用TNF-α刺激培养后,采用RT-PCR方法分析其与未用TNF-α刺激培养的PBMCs在GRα和GRβmRNA表达方面的变化.结果:经TNF-α刺激培养24 h的PBMCs,与未加TNF-α刺激培养的PBMCs相比,GRαmRNA表达无显著变化(P>0.05),GRα/GAPDHmRNA分别为1.16±0.73,1.20±0.51,但GRβmRNA表达明显增加(P<0.05),GRβ/GAPDH mRNA分别为1.62±0.59,0.81±0.66.结论:TNF-α可以增加GRβ的表达,这可能是炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的内在机制之一.