骨髓间充质干细胞联合RANK-Fc局部注射促进糖尿病大鼠骨折愈合的可能机制

目的检测促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和抗炎因子白介素-10(IL-10)在骨髓间充质干细胞(MSC)联合RANK-Fc促进GK糖尿病大鼠骨折愈合过程骨组织中的表达,探讨促炎—抗炎平衡在此过程中的作用。方法 7—8周龄SPF级雄性GK大鼠40只,喂养高脂饲料糖尿病造模。造模成功后(随机血糖≥11.1 mmol/L)选取大鼠左侧肢体,人为造成股骨中段开放性骨折并给与克氏针复位内固定,随机分为4组(n=10只),其中3组分别在骨折周围肌肉软组织注射培养浓缩的骨髓MSC、RANK-Fc、骨髓MSC和RANK-Fc混合液,于实验后第12周分别行X线摄片、取骨折处骨组织检测TNF-α和IL-10的表达。结果骨折内固定术后第12周摄片对照组骨愈合不佳,断端骨皮质不连续,骨密度较低;MSC组、RANK-Fc组、MSC+RANK-Fc组可见骨密度较对照组高,骨痂生长,连续爬行,骨皮质连续,MSC+RANK-Fc组愈合情况最佳;Western blot结果:对照组促炎因子TNF-α明显高于MSC组、RANK-Fc组、MSC+RANK-Fc组,而抗炎因子IL-10明显低于其他3组(P<0.05)。结论骨髓MSC联合RANK-Fc局部注射可以抑制GK糖尿病大鼠骨折内固定术后机体的炎症反应,从而促进骨折的愈合。

骨髓间充质干细胞对糖尿病周围神经病变大鼠骨组织OGP/RANKL表达的影响

目的检测骨髓间充质干细胞局部注射后糖尿病周围神经病变大鼠骨组织OPG/RANKL的表达水平。方法 8周龄SPF级雄性自发性2型糖尿病GK大鼠30只,高脂饲料喂养造模。造模成功后(随机血糖≥11.1 mmol/L)暴露大鼠左侧股骨,人为造成开放性骨折并给予克氏针复位内固定,将培养收集浓缩的骨髓间充质干细胞注射于骨折周围肌肉软组织,于实验后第12周、16周、20周分别取材用免疫组化、western blot测定骨质OPG、RANKL的表达。结果实验组大鼠术后第12周、16周、20周骨组织免疫组化和western blot测定OPG表达明显较对照组增高,而RANKL的表达结果正好相反。结论骨髓间充质干细胞局部移植可以促进GK糖尿病大鼠骨折后骨组织中OPG的高表达,抑制RANKL表达,从而促进糖尿病大鼠骨折后骨质的愈合。

骨髓间充质干细胞促进糖尿病大鼠骨折愈合的研究

目的检测促炎因子TNF-α、IL-6及抗炎因子IL-4、IL-10以及Toll样受体4在骨髓间充质干细胞促进糖尿病大鼠骨折愈合过程中的动态变化,探讨炎症失衡在此过程中的作用及可能机制。方法 7~8周龄SPF级雄性自发性2型糖尿病GK大鼠56只,喂养高脂饲料造模。造模成功后(随机血糖≥11.1 mmol/L)暴露大鼠左侧股骨,人为造成开放性骨折并给与克氏针复位内固定,将培养收集浓缩的骨髓间充质干细胞注射于骨折周围肌肉软组织,于实验后第1周、3周、6周、8周分别行X线摄片、下腔静脉取血测定炎症因子、骨折局部软组织检测TLR4表达。结果术后第1周、3周、6周、8周对照组TNF-a、IL-6、TLR-4表达均高于实验组(P<0.05),而IL-4、IL-10则低于实验组(P<0.05);两组动物在手术后第三周均可见骨折处骨痂生长,实验组更加明显,但对照组骨痂不均匀,骨密度较低。结论骨髓间充质干细胞局部移植可以降低GK糖尿病大鼠骨折后机体的炎症反应,促进骨折愈合。

屏障系统中饲养不同周期的SD大鼠及GK大鼠肠道菌群的比较

为了观察在SPF级屏障系统内饲养不同周期的SD大鼠与GK大鼠(Ⅱ型糖尿病大鼠)肠道菌群及细菌量的变化,试验采用SPF级SD大鼠及GK大鼠分别在SPF屏障系统中饲养4周、8周、6个月后,采集动物回肠、盲肠部的新鲜粪便,采用选择性培养基分离细菌,运用全自动微生物鉴定仪(型号为Micro Satation)鉴定细菌种类,根据不同培养皿中的菌落数计算细菌量。结果表明:在屏障系统内饲养不同周期的SD大鼠,肠道菌群种类及细菌量未发生明显变化;GK大鼠回肠、盲肠部双歧杆菌、拟杆菌、嗜酸乳杆菌、肠球菌的细菌数随着饲养周期的增加而减少,大肠杆菌、变形杆菌的细菌数随着饲养周期的增加而增加。说明SPF级SD大鼠在屏障系统内饲养不同时间,其肠道菌群及数量不会发生变化;GK大鼠自发性的糖脂代谢紊乱,可能是其肠道菌群紊乱的主要原因。

益气活血方对糖尿病GK大鼠肾脏保护作用的研究

研究益气活血方对糖尿病GK大鼠肾脏保护作用。通过8只雄性Wistar大鼠作为正常对照组,16只雄性GK大鼠按体质量、血糖值随机分为模型组、益气活血方组,每组8只,连续给药6周。每周称大鼠体质量,并测空腹血糖（FBG）;第3,6周末检测糖化血红蛋白值（Hb ALc）与24 h代谢值并收集尿液,生化法检测尿糖（U-GLU）、尿肌酐（U-CREA）、尿蛋白总量（U-TP）,计算24 h蛋白排泄率（UAER）;6周末,麻醉处死大鼠,心脏取血,生化法检测血清中肌酐（CREA）、尿酸（UA）及总胆固醇（CHOL）,手工法检测血清谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）;取双肾,称重,计算肾肥大指数,将肾置中性甲醛,PAS染色,光镜下观察病理变化。结果显示,与正常组相比,模型组FBG,Hb ALc,24 h代谢值,U-GLU,UAER,血清CREA,UA,CHOL,肾肥大指数均显著性升高（P〈0.05）,体质量增长速度、血清GSH-Px均显著性降低（P〈0.05）,模型组大鼠肾病理切片有明显肾小球损伤及结构改变;与模型组相比,给药组大鼠血清GSH-Px显著性升高（P〈0.05）,FBG,Hb ALc,24 h代谢值,U-GLU,UAER,血清CREA,UA,CHOL,肾肥大指数显著性降低（P〈0.05）,给药组大鼠肾病理切片的肾小球损伤及结构改变有所改善。结果表明益气活血方可明显升高糖尿病GK大鼠的血清GSH-Px,降低FBG,Hb ALc,24 h代谢值,U-GLU,UAER,血清CREA,UA,CHOL,肾肥大指数,改善肾脏病理。