马动脉炎病毒GL蛋白主要抗原域的表达及间接ELISA的初步建立

在分析马动脉炎病毒GL蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆GL蛋白一段抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因插入pET-32a的BamHⅠ和XhoⅠ之间构建了GL蛋白主要抗原域原核表达载体pET-GL1。将pET-GL1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了EAV GL蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用His.Bind亲和层析柱纯化重组EAV-GL1蛋白,以纯化的重组GL1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测马动脉炎病毒抗体的iGL1-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为9.65μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490>0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490>2。应用iGL1-ELISA对马血清样品进行检测,结果表明iGL1-ELISA与病毒中和试验的符合率达到94.1%,与国外同类试剂盒的符合率达到95.6%。

富硒灵芝硒蛋白(Se-GL-P)生化性质的初步分析

作为阐明一种从富硒灵芝中得到的蛋白(Se-GL-P)结构与功能关系的基础性工作,Se-GL-P的结构在此得到了初步表征.分子质量通过电泳和分子筛两种方法进行了测定,通过高效液相色谱、毛细管等电聚焦电泳、原位胶内酶切和Edman降解等方法分别测定了蛋白质的氨基酸组成、等电点、肽图以及N端氨基酸序列等方面的性质,并对其同源性进行了鉴定.结果表明,该蛋白质的相对分子质量为36600,等电点为4.01,N端20个氨基酸序列为DINGGGATLPQKLYLTPDVL.实验得到结论:Se-GL-P是一种新的硒蛋白,并属于功能性DING蛋白家族的一员.

PKC抑制剂对MGC803细胞中P-gp表达及耐药性的影响

背景与目的:既往研究发现,肿瘤细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)与蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)信号转导系统关系密切,但其作用机制有待于进一步研究。本实验拟通过研究长春新碱(vincristine,VCR)及选择性PKCα、β抑制剂myr-ψPKC对人胃癌细胞MGC803的作用,探讨PKC信号转导系统与mdr1基因的关系。方法:用Westernblot检测MGC803细胞中mdr1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达以及VCR作用对其表达的影响,用流式细胞术对VCR及作用后的细胞进行周期分析,同时用MTT法验证VCR诱导后及其作用下MGC803细胞的药物敏感性。结果:MGC803细胞在VCR短期作用下,P-gp表达增加,在myr-ψPKC的作用下其表达受到抑制。通过细胞周期分析发现VCR和myr-ψPKC共同作用的细胞其凋亡比例为31.23%,显著高于VCR单独作用时的细胞凋亡率(18.41%)(P<0.05)。VCR刺激后MGC803细胞对VCR的IC50为(284.0±13.2)ng/ml,是阴性对照组IC50犤(127.0±17.6)ng/ml犦的2.24倍,是myr-ψPKC组IC50犤(212.0±30.4)ng/ml犦的1.33倍。结论:MGC803细胞在VCR的短期作用下可诱导产生P-gp,而myr-ψPKC可通过选择性抑制PKCα、β而抑制P-gp的表达和逆转其耐药性,从而促进MGC803细胞的凋亡。PKC可能对胃癌mdr1表达有调节作用。

灵芝孢子粉对镉致雄性大鼠睾丸雄激素结合蛋白和抑制素表达的影响

目的观察灵芝孢子粉对镉致雄性大鼠睾丸雄激素结合蛋白和抑制素的影响。方法 45只SD雄鼠,随机均分为3组:对照组、Cd组、灵芝孢子粉拮抗组(GLS+Cd)。灵芝孢子粉拮抗组用5mg/kg灵芝孢子粉灌胃,对照组与Cd组灌胃等量生理盐水,每天1次。Cd组和GLS+Cd组腹腔注射Cd Cl22mg/kg,隔天1次。对照组腹腔注射等量生理盐水。3个月后分3批处死,间隔为1个月。用RT-PCR法对抑制素和雄激素结合蛋白的表达量进行定量分析,睾酮定量分析酶联免疫检测试剂盒测定血清睾酮浓度。结果在镉染毒1个月时,Cd组ABP(雄激素结合蛋白)表达量应激性升高,在第3个月Cd组ABP表达量低于灵芝孢子粉拮抗组,有统计学意义(P<0.05);随着镉染毒时间延长,第2、3个月Cd组INH-B(抑制素B)表达量低于灵芝孢子粉+Cd组,有统计学意义(P<0.05);镉染毒3个月时,与对照组比较,Cd组和灵芝孢子粉拮抗组血清睾酮水平明显降低(P<0.05);与Cd组比较,灵芝孢子粉+Cd组血清睾酮水平浓度高(P<0.05)。结论灵芝孢子粉可以通过提高ABP、INH-B的表达对镉致雄性大鼠支持细胞损伤有一定的保护作用。

转高赖氨酸融合蛋白基因水稻蛋白消化稳定性

以我国自主培育的转高赖氨酸融合蛋白基因水稻(简称转GL基因水稻)为材料,参考中华人民共和国国家标准,通过体外模拟胃/肠液消化实验,研究转GL基因水稻蛋白的消化稳定性。结果表明:质量浓度为5g/L的总蛋白在胃液中2min内完全消化,质量浓度为2g/L的总蛋白在肠液中15s～2min内完全消化;而以5倍于国标规定的质量浓度进行消化时,总蛋白在模拟胃液中60min仍可观察到未降解片段,在模拟肠液中2min内则全部消化;两步法体外模拟消化结果,胃液中极难降解的蛋白片段在经肠液作用5min后,完全被降解。本研究表明,转GL基因水稻蛋白在模拟胃肠液中不具有消化稳定性。

GSPT1 Functions as a Tumor Promoter in Human Liver Cancer

Objective This study analyzed the role of G1 to S phase transition 1 protein(GSPT1)in promoting progression of liver cancer cells.Methods A bioinformatics database was used to analyze the expression levels of GSPT1 in liver cancer tissues and the prognosis of patients.Subsequently,Western blotting and quantitative PCR were used to verify the expression levels of GSPT1 between normal hepatocytes and hepatoma cells.We used a CRISPR/Cas9 system to construct knockouts of GSPT1 in HepG2 and HCCLM9 liver cancer cells.The effect of GSPT1 on liver cancer cell migration and invasion was analyzed using flow cytometry,migration,and tumor formation assays.Results The Cancer Genome Atlas Liver Hepatocellular Carcinoma dataset indicated that GSPT1 expression was upregulated in liver cancer cell lines,and patients with liver cancer had poor prognosis.Knockout of GSPT1 in cells significantly inhibited tumor proliferation,cell migration,and growth in vivo.Conclusion In this study,we found that GSPT1 promotes the migration and invasion of liver cancer cells.

基于gL蛋白的牛传染性鼻气管炎间接ELISA检测方法的建立及初步应用

为建立牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhintracheitis,IBR)的血清学诊断方法,本试验对牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhintracheitis virus,IBRV)gL蛋白进行原核表达和纯化,作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法。结果显示,iELISA方法的最优反应条件:抗原包被质量浓度为0.773 mg/L,4℃过夜;3%BSA、37℃封闭1 h;血清1∶20稀释,室温孵育30 min;二抗稀释度为1∶5000,37℃孵育30 min;底物反应条件为37℃5 min。特异性试验结果显示,该方法仅与IBR阳性血清反应呈阳性,而与牛口蹄疫(FMD)、牛病毒性腹泻(BVD)、布鲁菌病的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果显示,阳性血清1∶640稀释时检测结果仍呈阳性,表明该方法敏感性较高。重复性试验结果显示,批内变异系数为1.9%~7.7%,批间变异系数为2.6%~4.6%。对171份牛血清进行IBRV抗体检测,本试验建立的iELISA方法检出阳性样品67份,阳性率为39%;商品化试剂盒检出阳性样品60份,阳性率为35%,二者的阴性符合率为89.6%,阳性符合率为93.6%。本试验建立的iELISA方法可用于IBR的临床检测,为IBR的检疫防控提供技术支持。