黄酮类化合物GL-V9对肝细胞癌细胞的抑制作用及其机制

目的全球范围内,肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一,尤其在中国,其发病率极高。由于当前的治疗手段疗效有限,肝细胞癌患者的预后通常不佳。本研究旨在探讨黄酮类化合物GL-V9对肝细胞癌细胞的抑制效果及其作用机制。方法采用Cell counting kit-8(CCK-8法)检测不同浓度的GL-V9在不同时间对肝细胞癌细胞系Bel-7404的细胞增殖影响。通过平板克隆实验测定GL-V9对Bel-7404细胞增殖能力的影响。通过流式细胞术分析GL-V9对Bel-7404细胞凋亡率的影响。采用蛋白免疫印迹法检测GL-V9对Bel-7404细胞中自噬标志物LC3和Beclin-1的表达变化。结果GL-V9显著地抑制了肝细胞癌细胞系Bel-7404的增殖,导致肝细胞癌细胞的细胞凋亡率增加,以及LC3和Beclin-1的表达显著变化。结论GL-V9对肝细胞癌细胞的显著抑制效应可能与GL-V9作用下肝细胞癌细胞系中自噬通路的激活有关。

高效液相色谱法测定GL-V9的含量和有关物质

目的建立GL-V9含量和有关物质测定的HPLC法,并进行全面的方法学验证。方法采用RPHPLC法测定GL-V9的含量,并对其有关物质进行检测。色谱柱为ODS-3(4.6 mm×150 mm,5μm),甲醇-乙腈-10 mmol·L^-1磷酸铵(用磷酸调节pH值至3.2)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长274 nm。结果在含量测定色谱条件下,GL-V9浓度在1.98~19.82μg·mL^-1与峰面积呈良好线性关系(r=1.000);在有关物质测定色谱条件下,有关物质汉黄芩素、GLV9-Z8、GLV9-Z10分别在质量浓度0.0505~0.4039μg·mL^-1(r=0.9997)、0.1936~1.9362μg·mL^-1(r=0.9999)、0.1902~1.9021μg·mL^-1(r=0.9998)与峰面积呈良好的线性关系;汉黄芩素、GLV9-Z8、GLV9-Z10总含量分别为0.02%、0.03%、0.24%。结论本方法专属性好、准确可靠、灵敏度高、重现性好,可用于GL-V9有关物质的检测分析及质量控制。

高抗肿瘤活性汉黄芩素衍生物GL-V9在大鼠体内的组织分布和排泄研究

目的:研究抗肿瘤化合物汉黄芩素衍生物GL-V9在大鼠体内的组织分布及排泄特点。方法:组织分布实验中,灌胃给予50mg/kg的GL-V9混悬液后,根据既定的时间点处死大鼠,采集相应的血浆样品和胃、小肠、肝脏等组织样品,然后以乙酸乙酯作为提取剂对生物样品进行处理后通过UPLC-MS/MS法测定其中的GL-V9含量。排泄实验中,同样灌胃给予大鼠50mg/kg的GL-V9混悬液,按照既定的时间段收集粪便、尿液和胆汁样品,测定排泄样品中GL-V9的含量,获得相应的累积排泄率。结果:各组织和排泄样品中GL-V9在2~1000ng/mL范围内线性关系良好(R^2>0.99)。组织分布实验结果显示,灌胃给药后GL-V9由胃肠道逐渐向肝脏、肺、肾组织分布,在脑、心和血浆中的含量较低。排泄实验表明,口服给药后,粪便中GL-V9排泄量最高,累积排泄率达(75.41±41.77)%。结论:GL-V9在大鼠各组织中的分布较为广泛,尤其是胃肠道、肝脏、肺和肾脏组织,而粪便则是GL-V9在大鼠体内的主要排泄途径。

黄酮类化合物GL-V9对人胃低分化黏液腺癌细胞株的凋亡作用及其机制

探讨黄酮类化合物GL-V9对人体低分化胃黏液腺癌细胞系MGC-803和BGC-823的凋亡作用及其机制。采用MTT法观察不同浓度的GL-V9作用于两种胃癌细胞后对其细胞活力的影响。采用Annexin V-FITC/PI双染法、DAPI染色法观察GL-V9对MGC-803细胞株凋亡率和细胞核形态的影响。采用免疫印迹法观察GL-V9对MGC-803细胞株中主要凋亡蛋白caspase-9,caspase-3的影响。应用钙离子荧光探针Fluo-3 AM检测GL-V9对MGC-803细胞株内钙离子浓度变化的影响。实验结果表明,GL-V9可以抑制胃癌细胞株MGC-803,BGC-823细胞活性,改变MGC-803细胞核形态,激活caspase-9,caspase-3蛋白,诱导细胞凋亡。同时,GL-V9可以显著上调MGC-803细胞中钙离子水平,这可能与GL-V9作用下的胃癌细胞株中线粒体凋亡通路的激活相关。

GL-V9 reverses adriamycin resistance in hepatocellular carcinoma cells by affecting JNK2-related autophagy

Adriamycin resistance in HCC seriously hinders the treatment of patients,it is necessary to investigate the mechanisms.Autophagy is involved in adriamycin resistance and JNK2 is related to autophagy.However,whether JNK2 inducing drug resistance though autophagy is unknown.GL-V9,a new synthesized flavonoid derivative,has been proved of its anti-tumor effects.The aim of the study is to explore the role of JNK2-related autophagy on adriamycin-induced drug resistance and the effects of GL-V9 on reversing adriamycin resistance.We concluded that JNK2 played an important role in drug resistance induced by adriamycin.The high expression of JNK2 activated protective autophagy in Hep G2-DOXR cells under non-stress condition,which protected cells from drug attacking.Furthermore,we found that GL-V9 reversed adriamycin resistance by blocking the JNK2-related protective autophagy in HCC.