EGF和AG1478对GL15细胞增殖、侵袭和GFAP表达的影响

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号通路对人胶质母细胞瘤GL15细胞系细胞生物学特性影响的分子机制。方法Gimsa染色分析GL15细胞核型,甲基四唑兰(MTT)和Transwell分别检测表皮生长因子(EGF),AG1478对GL15细胞增殖和侵袭力的影响,逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测EGF和AG1478作用后GL15细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA和蛋白表达。结果Gimsa染色表明EGFR所在的7号染色体过度扩增。外源性的EGF双向调节GL15细胞增生和生长,小剂量(50ng/ml,100ng/ml)EGF能促进细胞增生和提高细胞侵袭能力以及GFAPmRNA和蛋白表达,而大剂量(200ng/ml)则能降低其增殖和侵袭能力,AG1478则能明显拮抗EGF活性。结论GL15胶质母细胞瘤细胞系的生物学活性与EGFR所在的7号染色体过度扩增密切相关。EGF可双向调节GL15细胞系的生长,AG1478能不完全抑制EGFR的活性。EGFR是基因治疗胶质母细胞瘤的理想靶点。

内皮抑素质粒联合阿霉素对人脑胶质肉瘤GL15细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨内皮抑素(ES)以及ES和阿霉素联合应用对人脑胶质肉瘤细胞株GL15增殖和凋亡的影响。方法通过质粒转染的方法,运用MTT法和流式细胞仪检测了ES以及ES和阿霉素联合应用对GL15细胞株增殖和凋亡的影响。结果MTT法检测表明阿霉素对转染pcDNA3.1 ES的GL15细胞的生长抑制作用明显增强,细胞增殖明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测表明,转染pcDNA3.1 ES后,G0/G1期细胞明显增加(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01);联合阿霉素治疗后,上述差异更加显著(P<0.01)。结论ES联合ADM可明显抑制人脑胶质肉瘤GL15细胞株的生长,二者联用可以产生协同抗瘤作用。

内皮抑素对人脑胶质瘤GL15细胞株β-catenin和Cyclin D1表达的影响

目的探讨内皮抑素对人脑胶质肉瘤细胞株GL15中β-catenin和Cyclin D1表达的影响。方法通过质粒转染的方法向GL15细胞中转染pcDNA3.1ES质粒,通过SABC免疫组织化学方法检测转染组与非转染组细胞中β-catenin和Cyclin D1表达。结果空白对照组细胞爬片中β-catenin和CyclinD1的平均光密度值分别为(0.3758±0.0371)和(0.4092±0.0417),而内皮抑素质粒转染组细胞爬片中β-catenin和CyclinD1的平均光密度值分别为(0.2462±0.0275)和(0.2046±0.0357);空白对照组中β-catenin和Cyclin D1的平均光密度值均高于内皮抑素转染组,统计学分析表明在不同组别之间,β-catenin的平均光密度值有显著性差异,其中Cy-clin D1的平均光密度值有极显著性差异。结论内皮抑素在GL15细胞株中可以抑制β-catenin蛋白的过度表达和异位表达,并通过直接和间接的途径,抑制Cyclin D1蛋白的过度表达,从而发挥抑制肿瘤发展的作用。

LRIG3基因沉默对神经胶质瘤细胞系GL15增殖及PCNA和Ki-67表达的影响

背景与目的:富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3(leucine-rich repeats and immunoglobin-like domains3,LRIG3)是LRIG基因家族成员之一,在多种肿瘤中均有表达下调,但其作用尚不明了。本研究旨在探讨RNA干扰沉默LRIG3基因表达对神经胶质瘤细胞系GL15增殖及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki-67表达的影响及其机制。方法:用携带U6启动子和LRIG3特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的质粒载体pGenesil2-LRIG3-shRNA1、pGenesil2-LRIG3-shRNA2及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-negative shRNA(neg)转染胶质瘤细胞系GL15,G418筛选出稳定株,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测LRIG3表达的改变,应用噻唑蓝(MTT)法检测稳定转染后对GL15细胞增殖的影响,应用免疫组化SABC法检测对照组和实验组GL15细胞中PCNA和Ki-67的表达。结果:shRNA1及shRNA2组细胞LRIG3 mRNA水平与对照组相比分别下降了52.4%和63.8%,LRIG3蛋白水平分别下降了50.9%和67.4%。MTT结果显示实验组细胞增殖率高于对照组。对照组细胞PCNA阳性率为(35.40±5.69)%,shRNA1及shRNA2组细胞PCNA阳性率分别为(72.13±5.64)%和(81.93±5.23)%,差异均有统计学意义(P<0.01)。Ki-67阳性率在对照组细胞为(49.73±5.73)%,shRNA1及shRNA2组细胞分别为(82.27±5.50)%和(88.67±3.52)%,差异均有统计学意义(P<0.01)。Ki-67表达与PCNA表达呈正相关(r=0.932,P<0.001)。结论:下调LRIG3基因表达可促进胶质瘤细胞的增殖。

胶质母细胞瘤细胞系GL15生物学特性的实验研究

目的明确GL15细胞系的生物学特征并探讨表皮生长因子(EGF)对GL15细胞系生物学特征的影响。方法观察GL15细胞的形态和生长增殖特性,Giemsa染色分析核型,免疫细胞化学行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、增殖细胞核抗原(PCNA)染色,流式细胞仪分析细胞周期,Transwell、MTT法检测EGF对GL15细胞生物学特征的影响,与U251MG和U373MG细胞系进行比较。结果GL15细胞为典型的胶质母细胞瘤形态,核型分析显示多条染色体均有扩增,其中EGF受体所在的7号染色体数目增加较为明显(4条7号染色体)。GFAP和PCNA分别在胞浆和胞核呈阳性表达。EGF可双向调节细胞增殖活性、侵袭性及GFAP蛋白表达。结论GL15细胞系保持了胶质母细胞瘤的生物学特征,是研究胶质母细胞瘤理想的细胞平台。该细胞系的生物学特性与EGF受体有紧密关系。

IS201对GL15胶质瘤细胞FAK、ERK1/2蛋白表达及磷酸化的影响

背景与目的:之前已有研究证明,整合素参与调节细胞多种生物学效应;黏着斑激酶(FAK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达及磷酸化的水平与胶质瘤细胞恶性程度及其诊断、预后密切相关。本研究通过检测整合素αvβ3拮抗剂IS201对人GL15胶质瘤细胞FAK、ERK1/2蛋白表达及其磷酸化的影响,探讨其意义。方法:用不同浓度的整合素αvβ3拮抗剂IS201处理GL15细胞,用Western印迹法检测细胞的FAK、ERK1/2表达量以及FAK、ERK1/2的磷酸化程度。结果:各实验组不同浓度的IS201均能明显降低FAK、ERK1/2的表达,对FAK、ERK1/2的磷酸化有明显的抑制作用。各实验组差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:IS201对人GL15胶质瘤细胞FAK、ERK1/2蛋白表达量及其磷酸化均起负性调节作用,对胶质瘤的细胞增殖和侵袭性生长等恶性生物学行为起抑制作用。