共聚焦激光扫描显微镜研究大鼠脑缺血谷氨酸载体GLAST mRNA和EAAT_1的表达与其细胞分布

目的 :通过应用共聚焦激光扫描显微镜技术 (confocallaserscanningmicroscope ,CLSM)观察脑缺血后谷氨酸载体GLASTmRNA和EAAT1蛋白表达的细胞定位 ,探讨CLSM技术中三维重建和三维显示在观察基因和蛋白在神经细胞上空间定位的应用。方法 :对脑缺血后采用原位杂交和免疫组织化学相结合的荧光双标技术标记的脑片进行双通道断层扫描以及三维数据重组。结果 :脑缺血后 ,荧光免疫组化双标显示大脑皮质缺血半暗区内的谷氨酸载体EAAT1蛋白与星形胶质细胞和神经元均有共表达 ;原位杂交结合免疫组化的荧光双标显示缺血周边区谷氨酸载体GLASTmRNA与星形胶质细胞和神经元有明显的共表达。结论 :共聚焦激光扫描显微镜观察脑缺血后谷氨酸载体GLASTmRNA和EAAT1蛋白在神经胶质细胞和神经元上的空间定位 ,为进一步研究脑缺血后谷氨酸载体系统作用机制提供了更为准确的形态依据。