不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因(GLDH)cDNA片段克隆与RNAi表达载体构建

根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的GLDH基因片段分别以正向和反向两种形式插入到间隔基因YYT的两端,经鉴定已插入到植物表达载体中,成功地构建了干扰GLDH基因表达的RNAi植物双元表达载体pRNAi-GLDH,并将表达载体转化到农杆菌菌株LBA4404中,为深入研究GLDH基因功能提供有效的工具。

内源抗坏血酸对水稻种子萌发及幼苗生长的影响

为了解内源抗环血酸在水稻(Oryza sativa)种子中的作用,以野生型品种‘中花11’(ZH-11)、抗坏血酸合成关键酶GLDH基因的上调(超表达)株系GO-2及下调(干涉)株系GI-2为材料,研究了抗环血酸含量对其种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,GO-2株系的种子萌发率比野生型ZH-11高6%,比干涉型GI-2高60%。外源添加1 mmol L–1抗坏血酸后,干涉型GI-2萌发率提高了22%,GO-2及ZH-11则没有明显增加。GO-2株系在幼苗的根长、株高、分蘖数和鲜重等指标上均高于ZH-11和GI-2。实时荧光定量测定结果表明,GO-2株系叶片的GLDH基因表达量显著上调,而GI-2株系则显著下调。这说明抗坏血酸有助于维持水稻种子活力和促进水稻种子发芽和幼苗生长。

内源抗坏血酸对水稻叶片抗氧化胁迫的影响

以野生型水稻(Oryza sativa)品种‘中花11’(WT)、抗坏血酸合成关键酶GLDH基因的上调(超表达)株系GO-2及下调(干涉)株系GI-2的离体叶片为实验材料,用甲基紫精(MV)高光诱导的光氧化胁迫处理,研究内源抗坏血酸对水稻叶片抗光氧化能力的影响.MV高光处理后,超表达型水稻叶片的超氧阴离子和过氧化氢含量明显低于野生型和干涉型.水稻叶片的膜脂过氧化加剧,可溶性蛋白发生了降解,其中干涉型受到的影响最大.叶绿素荧光相关参数的变化体现了超表达的优势.结果显示抗坏血酸含量高的超表达株系具有更强的抗氧化胁迫能力,而干涉型株系的抗氧化胁迫能力最差,从而说明了内源抗坏血酸能明显增强水稻抗氧化能力.