GLI3基因表达与新疆维吾尔族先天性马蹄内翻足发病的关系

目的探讨GLI3基因表达与新疆维吾尔族先天性马蹄内翻足(ICTEV)发病之间的关系。方法选择新疆地区84例ICTEV患儿(维吾尔族51例,汉族33例)和39例足部创伤正常儿童(维吾尔族25例,汉族14例),分别采用实时荧光定量PCR、Western blot法检测足部肌肉组织中的GLI3 mRNA及蛋白。结果观察组足部肌肉组织中GLI3 mRNA及蛋白相对表达量分别为0.61±0.02、68.72±3.05,对照组分别为0.07±0.01、22.38±1.74,P均<0.01;观察组维吾尔族患儿足部肌肉组织中GLI3 mRNA及蛋白相对表达量分别为0.73±0.01、83.01±4.42,汉族患儿分别为0.40±0.02、56.85±3.50,P均<0.05;对照组维吾尔族和汉族患儿足部肌肉组织中GLI3mRNA及蛋白相对表达量比较,P均>0.05。结论 GLI3基因表达与新疆维吾尔族ICTEV的发病有一定关系,维吾尔族可能更易受GLI3基因表达水平的影响而导致ICTEV的发生。

GLI3基因新发突变致多指（趾）畸形一家系

目的对1个先天性多指(趾)畸形家系进行GLI家族锌指3基因(GLI3)突变分析,进一步丰富GLI3的突变谱。方法收集1例临床诊断为多指(趾)畸形的患儿资料,提取患儿外周血DNA,应用全外显子测序方法检测与患儿症状相关的致病基因,并在家系其他成员中应用Sanger测序进行验证。结果该家系中包括患儿在内的4位多指(趾)畸形患者位于7p14.1的GLI3基因存在c.2783delG(p.Arg928Profs24X)框移突变。在该家系的正常成员中未检测到该位点突变。经查询HGMD、Clinvar及dbSNP数据库均未见相关报道。该病例多指(趾)畸形诊断明确,其突变位点为新突变。GLI3基因的c.2783delG(p.Arg928Profs24X)框移突变可能为该家系的发病原因。结论本研究发现新发突变GLI3[c.2783delG(p.Arg928Profs24X)],进一步丰富了GLI3基因的突变谱,为深入研究多指(趾)畸形的发病机制提供了新的内容。

常染色体显性Pallister-Hall综合征患儿1例的GLI3基因变异分析

目的探讨1例Pallister-Hall综合征(PHS)患儿的临床特点及遗传学病因。方法选取2020年6月2日于南方医科大学珠江医院就诊的1例PHS患儿为研究对象。对患儿进行全外显子组检测,对候选变异进行Sanger测序家系验证。结果基因检测提示患儿携带GLI3基因(NM_000168)c.3320_3330delGGTACGAGCAG(p.G1107Afs×18)杂合变异,其父母均未携带相同变异。结论GLI3基因c.3320_3330delGGTACGAGCAG(p.G1107Afs×18)移码变异可能是患儿的遗传学病因。对于以下丘脑错构瘤、中心性多指(趾)畸形为主要特征的患儿,应考虑PHS并进行GLI3基因的变异检测。

GLI3基因与单纯性马蹄内翻足的关联分析及其突变筛查

目的对GLI3基因与单纯性马蹄内翻足进行关联分析和突变筛查,探讨GLI3基因与单纯性马蹄内翻足的相关性。方法应用限制性片段长度多态性分析技术,分析84个单纯性马蹄内翻足核心家系中GLI3基因内两个单核苷酸多态(singlenuc leotide polymorphisms,SNP)位点的基因型,并应用ETDT软件统计分析各SNP位点基因型与单纯性马蹄内翻足的关联;应用变性梯度凝胶电泳技术对103例单纯性马蹄内翻足患者GLI3基因的第9至12外显子进行突变筛查。结果经ETDT分析,位于GLI3基因第4外显子的cSNPrs846266差异无统计学意义(χ2=3.3582,P>0.05);第14外显子的cSNPrs929387差异有统计学意义(χ2=7.2466,P<0.05),在单纯性马蹄内翻足核心家系中存在传递不平衡;发现1例患者及其母亲的第9外显子有108(G→A)的同义点突变。结论GLI3基因与单纯性马蹄内翻足相关,其第9至12外显子可能并非该病的突变热点。

GLI3、EN1基因在单纯性马蹄内翻足发生中的功能研究

为了探讨人类GLI3基因在单纯性马蹄内翻足(Idiopathic congenital talipes equinovarus,ICTEV)发生时所起的作用,文章构建了大鼠Gli3基因启动子区域荧光素酶报告基因表达载体来分析Gli3基因启动子的活性,并利用P-Match软件预测大鼠Gli3基因启动子区域可能的调控元件,应用ChIP实验加以验证。并利用RT-PCR、免疫组化和Western blotting的方法分析大鼠En1与ICTEV的相关性。经P-Match软件预测,Gli3基因启动子区域有3个转录因子En1的可能结合位点,经ChIP实验证实位点1是真正结合位点。RT-PCR、免疫组化和Western blotting方法都证实En1基因在马蹄内翻足模型鼠中表达下降。结果提示大鼠的转录因子En1可能是Gli3基因的上游负调控元件。在ICTEV患者中,很可能是由于EN1基因表达水平的下降导致了GLI3基因表达水平的上升,最终导致ICTEV的发生。

GLI3基因在单纯性马蹄内翻足发病机制中的作用

目的探讨GLI3基因与单纯性马蹄内翻足（idiopathiccongenitaltalipesequinovarus，ICTEV）的相关性。方法应用变性梯度凝胶电泳技术检测GLI3基因编码区的突变。用逆转录-PCR方法研究GLI3基因在ICTEV患者下肢的表达情况。构建ICTEV大鼠模型，应用实时定量PCR、免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹（Westernblotting）方法研究Gli3基因在ICTEV模型鼠下肢肌肉组织中的表达。结果在84例ICTEV患者外周静脉血中未发现GLI3基因第1～8外显子以及第13外显子存在突变。在ICTEV患者及正常人下肢拇长屈肌中均未检测到GLI3基因的表达。不论在mRNA水平还是在蛋白质水平，Gli3基因在ICTEV模型胎鼠下肢组织中的表达均明显高于正常对照胎鼠。结论GLI3基因的编码区突变可能不是ICTEV发病的主要原因，但GLI3基因的表达异常与马蹄内翻足的发病可能有关。

GLI3基因在单纯性马蹄内翻足发生中的调控机制

目的探讨在单纯性马蹄内翻足发生过程中GLl3基因的凋控机制。方法构建荧光素酶报告基因表达载体，分析大鼠Glj3基因5’侧翼启动子区域的活性。用P-Match软件预测Gli3基因上游序列中转录因子的结合位点，并通过染色质免疫沉淀实验、凝胶迁移实验验证。用RNA干扰实验以及构建Hoxdl3表达载体，观察其在L6细胞中对Gli3基因表达的影响。结果在大鼠Gli3基因序列的启动子区域发现2个Hoxdl3的结合位点，染色质免疫沉淀和凝胶迁移实验证实Hoxdl3结合于结合位点2上。Hoxdl3表达下调时，Glj3基因表达明显上调。Hoxdl3基因表达上调时，Gj诏基因则表达下调。结论在大鼠胚胎肢体发育中，Hoxdl3蛋白可能与Gj馏基因启动子区的Hoxdl3结合位点2结合，调控Gj据的表达。

GLI3基因新突变导致多指（趾）并指（趾）畸形一家系

目的对1个先天性多指（趾）并指（趾）畸形（synpolydactyly）家系进行GLI3基因的突变分析。方法应用Sanger法检测先证者GLI3基因的突变，并在家系其他成员及100名正常对照中进行验证。结果测序显示该家系中的3例患者均发生了GLI3基因的C．480dupC（P．Alal6lfs）杂合移码突变，导致其蛋白质产物从第161位氨基酸开始编码紊乱。在该家系的正常成员以及100名无亲缘关系的正常对照中未检测到同样的突变。结论GLI3基因C．480dupC（P．Alal61fs）杂合突变可能为该家系的发病原因。上述突变的发现进一步丰富了GLI3基因的突变谱。

东北地区GLIS3基因多态性与2型糖尿病合并视网膜病变的关联性研究

目的探讨GLIS3基因多态性与中国东北地区2型糖尿病合并视网膜病变的相关性。方法采用病例对照研究方法,选取糖尿病合并视网膜病变患者(DR组)、糖尿病未合并视网膜病变患者(DNR组)、健康人群(NC组)各120例为研究对象。应用PCRRFLP方法测定GLIS3基因rs7041847与rs7034200多态的基因分型。用非条件logistic回归计算比值比及95%置信区间。结果 DR、DNR组分别与NC组比较,GLIS3基因rs7041847多态AG、AG/GG基因型、G等位基因患者发病风险显著增加(P<0.05),rs7034200多态CC、AC/CC基因型、C等位基因患者发病风险显著增加(P<0.05)。结论在中国东北地区,GLIS3基因rs7041847、rs7034200是2型糖尿病的危险因素,并未发现GLIS3基因与视网膜病变的易感性相关。

轴后多指(趾)的基因调控研究新进展

轴后多指(趾)是常见的先天畸形。肢端发育通过复杂的细胞间通讯和基因表达网络来调控,其中任何一个基因的突变将可能导致不同类型多指(趾)或其他肢端发育异常。综合征型轴后多指(趾)的基因调控主要与Shh-Gli3通路的基因有关。通过家系分析发现5个非综合征型轴后多指(趾)基因座,仅有一个家系的Gli3基因被确定与发病有关。

先天性甲状腺功能减退症患儿GLIS3基因突变研究

目的 研究先天性甲状腺功能减退症（CH）患儿GLIS3基因突变的类型和特点,为CH患儿的早期诊断及治疗提供理论依据.方法 选取2007年2月至2016年11月山东地区50例CH患儿,并提取其外周血中白细胞全基因组DNA,用Primer5.0软件设计11对序列特异性引物对GLIS3基因第2～11外显子进行聚合酶链反应扩增,对扩增产物采用一代测序法（Sanger测序法）进行直接测序.采用DNA MAN软件与GLIS3基因的参考序列（美国国立生物技术信息中心Reference Sequence：NC_000009.12）进行序列比对分析,根据比对结果进行基因突变筛查.结果 50例确诊为CH的新生儿中,男22例,女28例,男女比例为1.0∶1.3;年龄（2.5±0.5）岁;甲状腺发育不良、缺如、异位的比例分别为12％（6/50例）、46％（23/50例）、42％（21/50例）.在1例甲状腺缺如患儿第10外显子区发现GLIS3基因cDNA的2 507位点发生了C＞A的突变（c.C2507A）,导致第836密码子的脯氨酸变为谷氨酰胺（p.P836Q）.此突变为杂合型的错义突变.在另1例甲状腺缺如患儿第2外显子区发现一个GLIS3突变体（rs780019691,c.C289T）,该位点为无义突变,导致第97密码子的精氨酸变为终止密码子（p.R97X）.结论 山东地区CH患儿中GLIS3基因突变率较低,且基因型与表型关系尚不明确,需进一步研究.

单核苷酸多态性微阵列联合染色体G显带核型分析产前诊断1例7p14.1-p12.3缺失胎儿

目的明确1例双足多趾及侧脑室增宽胎儿染色体拷贝数变异(copy number variants,CNVs)性质及来源,为产前遗传咨询提供依据。方法采用常规G显带技术分析胎儿脐血及其父母的外周血染色体核型,用单核苷酸多态性微阵列芯片(single nucleotide polymorphism array,SNP-array)对胎儿及其父母进行全基因组拷贝数变异分析。结果G显带结果显示胎儿的染色体核型为46,XN,del(7)(p14p12),其父母染色体核型均未见异常。SNP-array检测结果显示胎儿染色体7p14.1-p12.3区存在6.412Mb杂合缺失,其父母基因组拷贝数未见异常。结论胎儿染色体拷贝数杂合缺失为新发致病性突变,被诊断为Greig头多并指综合征(GCPS),缺失区域包含的GLI3是该综合征的关键基因。

一个遗传性轴后多指(趾)畸形家系的临床及遗传学分析

目的对一个轴后多指(趾)畸形家系进行基因突变分析,探讨其遗传学病因。方法采用高通量测序技术对患儿,舅舅及其父母的全外显子组进行平行测序,并用Sanger测序进行验证。应用计算机软件预测突变位点氨基酸进化保守性和突变可能导致的蛋白质结构和功能变化,分析突变位点的性质。结果高通量及Sanger测序结果显示,先证者、母亲及其舅舅GLI3基因均存在第15个外显子c.4332T>A(p.Tyr1444’)杂合无义突变,为新突变。患儿父亲未检测到该突变位点。用Mutation'Taster软件预测该突变为致病性,突变区域序列在不同物种间高度保守。结论GLI3基因c.4332T>A(p.Tyr1444')杂合无义突变是其分子发病机制,突变位点的检出明确了多指(趾)畸形患儿的诊断,丰富了GLI3基因的突变谱。