glipr1基因的原核表达及多克隆抗体制备

目的克隆表达胶质瘤致病相关蛋白1基因(glipr1)并制备多克隆抗体,运用该抗体检测各肿瘤细胞系中GLIPR1的表达。方法通过PCR技术以含glipr1基因的c DNA克隆质粒(p LX304-glipr1)为模板获得glipr1(M)片段,再将此片段克隆至表达载体p ET-15b上,并转入大肠杆菌BL21-Codon Plus(DE3)进行表达;Ni柱纯化后的GLIPR1(M)蛋白作为抗原免疫家兔,获得多克隆抗体,Western blot法检测其特异性,并检测GLIPR1在A549、PC14、LNCa P、PC3及U87细胞中的表达。结果成功构建了表达载体p ET-15bglipr1(M),并获得了纯化的GLIPR1(M)蛋白,成功制备了兔抗GLIPR1多克隆抗体,特异性高,可用于检测各细胞系中GLIPR1的表达,GLIPR1在U87中的表达最高。结论成功表达了GLIPR1(M)蛋白,并获得了多克隆抗体,为进一步研究GLIPR1的功能和作用机制奠定了基础。

急性髓系白血病GLIPR1基因甲基化及其表达

目的:检测GLIPR1基因在急性髓系白血病(AML)细胞株和AML患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子甲基化的关系。方法:以5株白血病细胞株,以及54例治疗前AML患者骨髓、48例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓、40例慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓、35例对照骨髓和8例治疗后完全缓解AML患者骨髓为样本,采用RT-PCR检测GLIPR1mRNA表达水平,采用甲基化特异PCR(MS-PCR)方法检测GLIPR1基因甲基化状态,并对GLIPR1mRNA表达水平与其甲基化状态进行相关性分析。结果:GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平低于CML急性变细胞株和ALL细胞株,而前者甲基化水平高于后者。5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平明显上调,而在CML急性变细胞株和ALL细胞株中的表达水平上调不明显。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平(0.38±0.20)明显低于ALL骨髓(0.76±0.18)、CML骨髓(0.80±0.14)和对照骨髓(0.85±0.12),在完全缓解AML骨髓中的表达水平明显高于治疗前AML骨髓(0.78±0.13vs.0.36±0.20);而ALL和CML骨髓中的表达水平与对照骨髓比较无明显差异(P>0.05)。GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化阳性率(81.5%)明显高于ALL骨髓(37.5%)、CML骨髓(27.5%)和对照骨髓(14.3%),在完全缓解AML骨髓中的甲基化阳性率明显低于治疗前骨髓(12.5%vs.75.0%);而在ALL和CML骨髓中的甲基化阳性率与对照骨髓比较无明显差异(P>0.05)。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平与其甲基化呈负相关。结论:GLIPR1基因在AML中表达下调或缺失及启动子甲基化可能是导致GLIPR1基因表达沉默的原因,GLIPR1基因表达和甲基化水平对判断AML患者的疗效有一定意义。

葛根素经p53/GLIPR1途径调节膀胱癌UMUC-3细胞增殖及侵袭的机制研究

目的:探讨葛根素经p53/GLIPR1途径调节膀胱癌UMUC-3细胞增殖及侵袭的机制。方法:设膀胱癌UMUC-3细胞组、氟尿嘧啶组(80.0μg·ml^-1)、葛根素低、高剂量组(剂量分别为60.0μg·ml^-1、120.0μg·ml^-1),置于CO2培养箱(37℃、5%CO2、2%O2、93%N2)培养72 h。细胞培养结束后,测定各组UMUC-3细胞增殖水平、侵袭能力、凋亡率水平以及p53、GLIPR1基因蛋白水平。结果:氟尿嘧啶组、葛根素低、高剂量组吸光度(A)值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p53 m RNA、蛋白水平低于UMUC-3细胞组(P<0.05),凋亡率、GLIPR1 m RNA、蛋白水平高于UMUC-3细胞组(P<0.05);葛根素低剂量组A值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p53 m RNA、蛋白水平高于氟尿嘧啶组(P<0.05),凋亡率、GLIPR1 m RNA、蛋白水平低于氟尿嘧啶组(P<0.05);葛根素高剂量组A值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p53 m RNA、蛋白水平低于氟尿嘧啶组(P<0.05),凋亡率、GLIPR1 m RNA、蛋白水平高于氟尿嘧啶组(P<0.05)。结论:葛根素通过抑制p53 m RNA、蛋白的表达,促进GLIPR1 m RNA、蛋白的表达进而抑制膀胱癌细胞的增殖及侵袭,促进膀胱癌细胞的凋亡。

胶质瘤致病相关蛋白1对肺癌A549细胞生长及分化的影响

目的:观察胶质瘤致病相关蛋白1(GLIPR1)对肺癌A549细胞生长及分化的影响,以期为肺癌药物的研制提供线索。方法:构建重组慢病毒Lenti-GLIPR1和包含GLIPR1胞外可溶性区段(GLIPR1-S)基因片段的LentiGLIPR1-S,感染A549细胞后,通过Western blot法检测GLIPR1或GLIPR1-S蛋白的表达,细胞计数法检测细胞生长,免疫细胞化学法观察细胞分化。结果:A549细胞经慢病毒Lenti-GLIPR1和Lenti-GLIPR1-S感染后,均可表达相应蛋白,细胞生长受抑,细胞形态发生改变,向肺上皮细胞分化。结论:感染GLIPR1和GLIPR1-S均可促进A549细胞向肺上皮细胞分化,抑制A549细胞的生长。

胶质瘤发病相关蛋白1与肿瘤

胶质瘤发病相关蛋白1(glioma pathogenesis-related protein 1,GLIPR1)隶属于CAP蛋白超家族,由1个指导分泌的信号肽、1个保守的富含半胱氨酸的结构域及1个跨膜结构域组成CAP。近年研究表明,胶质瘤发病相关蛋白1启动子甲基化水平决定了其在胶质瘤和黑色素瘤中的表达上调。而在前列腺癌、肺癌、骨肉瘤以及白血病等肿瘤中表达下调。在不同类型的肿瘤中,GLIPR1通过不同的信号通路参与调控肿瘤的发展进程。本文针对胶质瘤发病相关蛋白1参与调控多种肿瘤发生及发展的机制进行综述,以期为上述肿瘤的诊断与治疗提供重要的线索。