GLP-1(7-36)NH_2的促胰岛素分泌作用和胞内cAMP浓度改变与胰岛素mRNA表达

目的 :观察GLP 1( 7 3 6)NH2 的促胰岛素分泌作用 ,并进一步探讨GLP 1( 7 3 6)NH2 促进胰岛素分泌的机制。方法 :放射免疫分析和细胞原位杂交的方法。结果 :随着GLP 1( 7 3 6)NH2 浓度的增加 ,胰岛素分泌逐渐增加 ;8 Br cAMP增加了胰岛素分泌 ,GLP 1( 7 3 6)NH2 则增加了胞内第二信使cAMP的浓度 ;GLP 1( 7 3 6)NH2 可增加胰岛素mRNA的表达。结论 :GLP 1( 7 3 6)NH2 可促进胰岛素分泌 ,在一定范围内呈剂量依赖性 ,其机制与GLP 1( 7 3 6)NH2

胰高糖素样肽GLP-1(7-36)NH_2对体外培养的新生大鼠胰岛细胞作用的研究

目的与方法探讨ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２对培养的新生大鼠胰岛细胞胰岛素和胶高糖素释放的影响，并以Ｆｌｕｏ－３为探针，用５７０型粘附式细胞仪研究ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２对β细胞内Ｃａ２＋的作用。结果在含１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的ＫＲＢＢ液中孵育１ｈ，ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２在１０~－１１－１０~－８ｍｏｌ／Ｌ使胰岛细胞胰岛素分泌增加和胰高糖素分泌减少；在１０~－９ｍｏｌ／Ｌ时，促胰岛素释放作用最大。在含２.８ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖时，ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２使胰岛素分泌无明显增加，但在含葡萄糖５６、１１．２和１６.７ｍｍｏｌ／Ｌ时，胰岛素分泌明显增加：在含葡萄糖１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ时，ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２使胰岛β细胞内Ｃａ~２＋升高明显。结论ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２具有葡萄糖浓度依赖的促胰岛素释放作用和抑制胰高糖素分泌作用。

健康志愿者单次皮下注射重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGLP-1(7-36)]耐受性研究

目的：在中国健康成年志愿者中评价单次皮下注射重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）[rhGLP-1（7-36）]的安全性、耐受性。方法：根据GCP设计试验方案，并获得伦理委员会批准。受试者须自愿签署知情同意书。选择42名18～50岁健康成人，将受试者随机分至0．10～0．45mg7个剂量组，每组6名，男女各半，分别接受单次皮下注射rhGLP-1（7-36），进行临床和实验室检查，考察药物耐受性。结果：单次皮下注射rhGLP-1（7-36）耐受性试验中，各组受试者各项指标测定值均在正常范围内，条件均衡，具较好可比性。因剂量至0．30mg时，不良事件（恶心、呕吐）在该组发生率超过50％，故于该剂量组试验完成后终止了下一剂量组试验，仅有4个剂量组共24名健康受试者完成了本试验。24例受试者完成的4个剂量组耐受性试验中，给药后实验室检查未见有临床意义的改变。试验中出现10例（共15例次）可能与药物有关的不良反应，如头晕、恶心、呕吐等，但均可耐受，且为一过性反应，于给药后1h内自行消失。其中，不良反应主要发生在0.25、0．30mg组（共7例12例次），而低剂量组（0．10、0．20mg）仅有3例发生轻度不良反应。15例次不良反应中，头晕、恶心有10例次，呕吐有5例次；整个试验过程未见严重不良事件。结论：24名中国健康成年受试者分别单次皮下注射rhGLP-1（7-36），最大剂量至0．20mg，比较安全、耐受性较好，为最大耐受剂量。而单次给药剂量至0．25mg或0．30mg则不良反应发生率较高，最大耐受剂量为0．20mg。建议单次用药剂量不宜超过0．20mg。在Ⅱ期临床试验中需严密观察恶心、呕吐这些与药物可能有关的不良反应及其发生机制。

GLP-1（7-36）对高糖状态下人脐静脉内皮细胞活性的影响及其机制的初步研究

目的：研究GLP-1（7-36）对高糖培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）活性的影响及相关机制.方法：正糖（5mmol/l）和高糖（33mmol/l）环境下培养的HUVECs分别加入不同浓度的GLP-1（7-36）（0nmol/l,0.3nmol/l,3nmol/l,30nmol/l）并干预不同时间（24h,48h,72h）后行MTT检测细胞活力.选择某个合适的GLP-1（7-36）干预浓度和时间后继续行一氧化氮（NO）浓度检测.结果：①高糖培养48h、72h分别较正糖培养48h、72h细胞活力下降（p〈0.05）,②高糖培养环境下经3 nmol/l、30nmol/l浓度 GLP-1（7-36）分别干预48h、72h后较高糖对照组细胞活力显著增加（p〈0.01）,而正常糖培养环境下分别加入不同浓度GLP-1（7-36）干预不同时间后均与正糖对照组细胞活力无差异,③高糖培养48h较正糖培养下细胞培养上清液中NO的量下降,高糖组加入3nmol/l的GLP-1（7-36）后NO的量增加,正糖组中加入3nmol/l的GLP-1（7-36）后NO产量不变.结论：GLP-1（7-36）可以改善高糖引起的HUVECs活力的下降,且该保护作用与NO相关.

rhGLP-1(7-36)联合他克莫司对人肝细胞Akt的作用研究

目的观察重组人胰高血糖素样肽-1(7-36)[rh GLP-1(7-36)]联合他克莫司作用于人肝细胞系HL7702细胞系后对Akt表达的影响。方法选用处于对数生长期的人肝细胞系HL7702,分为4组:对照组、G组、F组及GF组。对照组用等量的培养基处理90 min;G组用含100 nmol/L的rhGLP-1(7-36)培养基处理90 min;F组用含5 mg/L的他克莫司处理90 min;GF组用含100 nmol/L的rh GLP-1(7-36)及5 mg/L的他克莫司处理90 min。Western blotting检测各组Akt蛋白表达水平。结果各组p-AktThr308相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05);G组、F组及GF组p-AktThr308相对表达水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),G组、F组及GF组均升高;各组p-AktSer473相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05);G组、F组及GF组p-AktSer473相对表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论rGLP-1(7-36)联合他克莫司能使Akt蛋白活化,提示GLP-1可能不依赖Akt蛋白改善他克莫司引起的肝脏脂质代谢紊乱。

rhGLP-1(7-36)对人肝HL-7702细胞系Akt、P70S6K蛋白的影响

目的观察重组人胰高血糖素样肽-1(7-36)[recombinant human glucagon like peptide-1(7-36),rhGLP-1(7-36)]对人肝HL-7702细胞系蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、核糖体蛋白S6激酶(ribosomal protein S6 kinase,P70S6K)表达的影响,探讨其作用机制。方法选用处于对数生长期的人肝HL-7702细胞系,实验组用含100 nM浓度rhGLP-1(7-36)的培养基分别处理0 min、10 min、60 min、90 min;对照组用不含100 nM浓度rhGLP-1(7-36)的培养基分别处理相同的时间。用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)分别检测各组Akt蛋白、P70S6K蛋白的表达水平。结果与对照组相比,实验组10 min、60 min、90 min时Akt蛋白、P70S6K蛋白的表达水平无明显变化;10 min、60 min、90 min时p-AktThr308蛋白、p-AktSer473蛋白及磷酸化P70S6K蛋白表达水平均升高,其中,10 min、60 min时差异无统计学意义(P>0.05),90 min时差异有统计学意义(t=-5.596,P=0.011;t=-5.405,P=0.012;t=-5.597,P=0.011)。结论 rhGLP-1(7-36)促进肝脏细胞中Akt蛋白和P70S6K蛋白的磷酸化与时间有关,该结果为研究GLP-1对肝细胞的直接作用提供依据。

胰高糖素样肽-1(7-36)NH_2引起的胰岛β细胞内游离钙变化

目的探讨胰高糖素样肽（ＧＬＰ）－１（７－３６）ＮＨ_２促胰岛素分泌的机制。方法以 Ｆｌｕｏ－３为探针，用粘附式细胞仪研究 ＧＬＰ－ １（７－ ３６）ＮＨ_２对培养的新生大鼠胰岛β细胞内游离 Ｃａ^（２＋）浓度的作用。结果在 ２．８ ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖时，ＧＬＰ－ １（７－ ３６）ＮＨ_２不能使胰岛 β细胞内游离 Ｃａ^（２＋）升高，而优降糖使β细胞内游离 Ｃａ^（２＋）升高明显。在 １６．７ ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖时，ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２使胰岛β细胞内Ｃａ^（２＋）升高明显，ＥＧＴＡ和硝苯吡啶能完全阻滞ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２引起的Ｃａ^（２＋）升高。结论ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ_２具有葡萄糖浓度依赖的促胰岛素释放作用，细胞外Ｃａ^（２＋）通过电压依赖性钙通道内流对其引起的β细胞内游离Ｃａ^（２＋）升高起重要作用。

胰高糖素样肽-1(7-36)NH_2引起胰岛β细胞cAMP的变化

目的 探讨GLP -1(7-36 )NH2 促胰岛素分泌的细胞内机制。方法 用放免法检测GLP -1(7-36 )NH2 在不同葡萄糖浓度下对培养的新生大鼠胰岛 β细胞的胰岛素分泌量和cAMP含量的变化。 结果 在 2 .8mmol/L葡萄糖时 ,GLP -1(7-36 )NH2 使 β细胞胰岛素分泌和cAMP含量无明显增加 ;优降糖能使胰岛素分泌增加 ,而cAMP含量无明显变化。在 5 .6 ,11.2和 16 .7mmol/L葡萄糖时 ,GLP -1(7-36 )NH2 使胰岛素分泌和cAMP含量均明显增加。在 16 .7mmol/L葡萄糖时 ,加入EGTA或硝苯吡啶后 ,GLP -1(7-36 )NH2 不能引起胰岛素分泌 ,但仍使cAMP含量增加。结论 GLP -1(7-36 )NH2 具有葡萄糖浓度依赖的刺激cAMP生成的作用 。

胃袖状切除对肥胖大鼠体重及Ghrelin、GLP-1、PYY_(3-36)水平的影响

目的探讨胃袖状切除术的减肥作用及其机制。方法通过高脂饮食诱导SD肥胖大鼠,然后随机分为胃袖状切除(SG)组和假手术(SS)组。术后连续观察8周,比较两组术后体重、摄食和外周血Ghrelin、GLP-1、PYY3-36浓度的变化。结果SG组术后摄食量明显下降(P<0.05),体重连续3周持续下降,然后缓慢回升,至第8周时体重仍低于术前,外周血Ghrelin浓度下降,GLP-1和PYY3-36浓度升高(P<0.05),随着时间延长,血Ghrelin浓度逐渐升高,GLP-1和PYY3-36浓度逐渐回落。SS组术后食量、血Ghrelin、GLP-1和PYY3-36浓度无明显变化(P>0.05),8周后体重明显高于术前(P<0.05)。结论肥胖大鼠胃袖状切除术减重效果确切,术后Ghrelin浓度下降,GLP-1及PYY3-36浓度升高致使摄食量减少可能是其减肥的主要作用机制。

重组人胰高血糖素样多肽-1(7-36)在健康人体的药代动力学

目的研究重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）[rhGLP-1（7-36）]（促胰岛素生成药）在健康志愿者的药代动力学.方法选择12,9名健康志愿者,分别单次（0.1,0.15,0.2 mg）和多次（0.2 mg）皮下注射rhGLP-1（7-36）,连续5日,用荧光酶联免疫分析法测定其血药浓度,用DAS软件计算其药代动力学参数.结果单次：药-时曲线符合一房室模型,Cmax、AUC0-t随剂量增加而增加,tmax约为19～21 min,ti/2为10～14min.多次：首次与末次给药后的Cmax分别为（726.76±94.07）,（737.15±72.12）ng·L-1;tmax为18min左右;t1/2为15～17 min.结论在0.1～0.2 mg内,过程呈一级线性动力学特征,体内无蓄积,耐受性较好.

胰高血糖素样肽-1(7-36)NH_2的促胰岛素分泌作用和胞内cAMP浓度改变

目的:观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)(7-36)NH2的促胰岛素分泌作用,并进一步探讨GLP-1(7-36)NH2促进胰岛素分泌的相关机制。方法:通过放射免疫分析的方法观察GLP-1(7-36)NH2的促胰岛素效应和GLP-1(7-36)NH2对胞内cAMP浓度的影响。结果:随着GLP-1(7-36)NH2浓度的增加,胰岛素分泌逐渐增加;CAMP类似物8-溴环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)增加了胰岛素分泌,GLP-1(7-36)NH2则增加了胞内第二信使cAMP的浓度。结论:GLP-1(7-36)NH2可以促进胰岛素分泌,在一定范围内呈剂量依赖性,其机制与GLP-1(7-36)NH2增加了胞内第二信使cAMP有关。

重组人胰高糖素样多肽-1(7-36)对胰岛β细胞分泌功能影响的实验研究

目的观察重组人胰高糖素样多肽-1(7-36)(促胰岛素生成药)对大鼠血糖和胰岛β细胞功能的影响。方法12周龄OLETF大鼠随机分为给药组和模型组(n=10),并以同种系非糖尿病LETO大鼠作为对照组;干预2,8周后,处死;于12,14及20周龄时,行口服葡萄糖耐量试验,测定血糖及血清胰岛素。结果经该药治疗,能降低2型糖尿病OLETF大鼠的进食量和体质量,增加血清胰岛素水平,部分改善葡萄糖耐量。结论重组人胰高糖素样多肽-1(7-36)能够改善OLETF大鼠分泌胰岛素的功能,降低血糖。

RP-HPLC法测定重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)原料及其制剂的肽含量和有关物质

目的:建立重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGIP-1(7-36)]原料及制剂的肽含量和有关物质的RP-HPLC测定方法。方法:采用ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.2 mol·L-1硫酸钠缓冲液(用乙醇胺调节pH至2.3)-乙腈(82:18)为流动相A,50%乙腈为流动相B,调整流动相的比例[A-B(55:45)]使主峰的保留时间在20-25 min,流速为1.0 mL·min-1,检测波长214 nm,柱温为45℃。结果:线性范围为0.6-18.6μg,制剂平均回收率为96.01%,原料和制剂精密度试验RSD分别为0.15%和0.25%,最低检测限6.25 ng。结论:本方法可用于rhGLP-1(7-36)原料及其制剂的肽含量和有关物质的测定,具有准确、简便、快速、灵敏的特点。

气相色谱法测定重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)注射液中丙二醇含量

目的建立气相色谱（GC）法测定重组人胰高血糖素类多肽-1（rh GLP-1）（7-36）注射液中丙二醇的含量。方法采用石英毛细管柱（30 m×320μm,0.5μm）,载气为N2,流速：1ml/min,进样口温度为230℃,检测温度为250℃,进样量为1μl;结果丙二醇的浓度在0.5~1.5 mg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系（r=0.9991）,平均回收率（n=9）为100.2%;不同色谱条件下,耐用性良好,RSD均〈2.0%。结论该方法快速、简便、重复性好,适用于rh GLP-1（7-36）注射液中丙二醇含量的测定。

胰升糖素样肽GLP－1（7－36）NH_2对血糖和血糖调节激素的影响

采用ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２外周灌流及脑室注射到禁食大鼠的方法，观察ＧＬＰ－１（７－６）ＮＨ２对大鼠血糖及血糖调节激素的影响。结果表明：静脉输入ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２使糖耐量曲线明显低平，血糖浓度恢复实验前水平比对照组提前。一次性推注葡萄糖后，外周输入ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２使Ｃ肽特别是胰岛素浓度明显增高，而不影响胰升糖素的水平。脑室注射ＧＬＰ－１（７３６）ＮＨ２对血糖无明显影响。本实验表明ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２在一次性推注葡萄糖后是通过刺激胰岛β细胞的分泌来调节血糖水平的。ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２可能在糖尿病的致病机理中起重要作用。本研究为研制ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２高活性类似物奠定了基础。

CGRP对GLP-1和胰岛素分泌的影响

目的 :进一步探讨类胰高血糖素肽 1(GLP 1)的分泌机制和生理意义。方法 :应用三种不同浓度的降钙素基因相关肽 (CGRP)进行实验 ,通过放射免疫分析方法检测CGRP对GLP 1和胰岛素分泌的影响。结果 :无论外源性葡萄糖是否存在 ,低浓度组和中浓度组CGRP于各实验时间对GLP 1、胰岛素分泌均无影响 ,P >0 .0 5;而高浓度组CGRP均刺激GLP 1、胰岛素的分泌 ,并随CGRP处理时间的延长 ,GLP 1(7～ 3 6)酰胺、胰岛素血浆水平呈逐渐增加趋势 ,并以 90min水平最高 ,与对照组相比差异存在显著性 ,P <0 .0 1。结论 :CGRP对胰岛素刺激可能是全部或部分通过GLP 1途径发挥作用 ;低、中浓度的CGRP不能影响GLP 1和胰岛素分泌 ,高浓度的CGRP能刺激GLP

脑室给予胰升糖素样肽GLP－1（7－36）对大鼠血糖及血糖调节激素的影响

采用给禁食大鼠脑室灌注溶于不同溶剂中的ＧＬＰ－１（７－３６）的方法，观察ＧＬＰ－１在中枢对大鼠血糖及血糖调节激素浓度的影响。结果表明：脑室灌注溶于生理盐水的ＧＬＰ－１与单纯灌注生理盐水相比，血糖无明显变化，但１小时后，血中胰岛素、胰升糖素浓度均明显降低；脑室灌注溶于３０％葡萄糖的ＧＬＰ－１与单纯灌注３０％葡萄糖相比，血糖明显升高，在３０’、４５’、６０’有显著性差异，血中胰岛素浓度明显低于对照组，胰升糖素浓度无变化。这些实验说明ＧＬＰ－１参与了中枢神经系统对胰岛分泌激素功能的调节。

胰高血糖素样肽1(GLP-1)对心血管疾病治疗的研究进展

胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是肠道L细胞分泌的一种由30个氨基酸组成的多肽,具有促进胰岛素分泌,抑制胰高血糖素分泌和刺激胰岛β细胞增殖等生物学作用。GLP-1在体内主要以GLP-1(7-36a)的形式存在。GLP-1(7-36a)的半衰期很短(1～2 min),可被二肽基肽酶4(diaminopeptidyl peptidase-4,DPP4)迅速降解为GLP-1(9-36a),因此GLP-1(9-36a)是GLP-1在循环中的主要存在形式。GLP-1不仅具有调控血糖和能量代谢的作用,还有保护心肌细胞、改善心脏功能和舒张血管等作用,直接或间接发挥心血管保护效应。心血管疾病是2型糖尿病的常见并发症和首要死因。目前基于GLP-1的2型糖尿病药物研发主要有两个方向:可以抵抗DPP4降解的GLP-1受体(GLP-1R)激动剂和DPP4抑制剂。虽然,这两种方法均可延长内源性GLP-1的作用,但显然未兼顾GLP-1(9-36a)对心脏的保护效应。本文通过总结GLP-1(7-36a)及GLP-1(9-36a)在心血管效应方面的异同及其生理学研究进展,探讨GLP-1应用于心血管疾病治疗的新策略。

rhGLP-1(7-36)对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护机制研究

目的探讨rhGLP-1(7-36)对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)大鼠肾脏的保护机制。方法DKD模型大鼠随机分成模型组、rhGLP-1(7-36)低剂量组(20μg·kg^(-1))、rhGLP-1(7-36)中剂量组(40μg·kg^(-1))、rhGLP-1(7-36)高剂量组(80μg·kg^(-1)),另设正常组,皮下注射给药4周。全自动生化分析仪检测24 h尿微量白蛋白、血肌酐及尿肌酐平,计算肌酐清除率;进行腹腔糖耐量实验并计算药时曲线下面积(area under the cure,AUC);HE染色行肾组织病理形态学观察;Western blotting检测肾组织SIRT1蛋白水平。结果与模型组相比,rhGLP-1(7-36)高剂量组大鼠肌酐清除率有明显改善(P<0.05);24 h尿微量白蛋白水平明显下降(P<0.05);腹腔糖耐量AUC水平明显减小(P<0.05);肾组织病理变化有不同程度改善;肾组织SIRT1蛋白水平明显上升(P<0.05)。结论rhGLP-1(7-36)能有效改善DKD大鼠的肾脏功能,其机制可能与上调肾脏组织的SIRT1水平有关。