二甲双胍对糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4基因表达的影响

观察二甲双胍对ＳＴＺ糖尿病大鼠血糖和骨骼肌中葡萄糖转运体Ⅳ（ＧＬＵＴ４）基因表达的影响。方法ＳＴＺ糖尿病大鼠每公斤体重１００ｍｇ／ｄ二甲双胍灌胃治疗３周后，斑点杂交测定骨骼肌中的ＧＬＵＴ４ｍＲＮＡ含量。结果糖尿病治疗组的血糖降低３０．３％，较非治疗组低２８．６％，而骨骼肌中ＧＬＵＴ４ｍＲＮＡ含量较非治疗组高６５．６％。结论二甲双胍促进骨骼肌中ＧＬＵＴ４基因表达可能是其降低ＳＴＺ糖尿病大鼠血糖的机制之一。

电针对实验性2型糖尿病大鼠股四头肌GLUT4基因的影响

目的探讨股四头肌GLUT4基因表达与2型糖尿病(T2DM)的关系,以及电针对T2DM大鼠股四头肌GLUT4基因表达的影响。方法给食源性肥胖大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)造成T2DM模型,随机分为电针组、优降糖组、模型组,设正常对照组。处理4周后,用罗氏活力型血糖仪测空腹血糖(FPG)、放免法测空腹胰岛素(FINS)、原位杂交测股四头肌GLUT4m RNA表达。结果治疗后电针组FPG、FINS显著降低,与模型组差异显著,接近正常组水平;优降糖组FPG显著降低,接近正常组水平,FINS低于模型组但无显著差异。模型组股四头肌GLUT4m RNA表达明显低于电针组和正常组水平,与优降糖组无显著差异;优降糖组股四头肌GLUT4 mRNA表达明显低于电针组和正常组;电针组和正常组无显著差异。结论T2DM大鼠存在股四头肌GLUT4基因表达低下,电针和优降糖均可以改善T2DM大鼠股四头肌GLUT4基因的表达,而电针对改善T2DM大鼠股四头肌GLUT4基因表达的作用优于优降糖。

人GLUT4基因的克隆及原核表达的初步实验研究

目的 通过反转录聚合酶链方法 ,从人新鲜手术肌肉组织获得人葡萄糖转运子 4 (GLUT4 )cDNA基因 ,并分别克隆入测序载体、表达载体 ,获得具有正确序列的目的基因及其原核表达产物 ,为其进一步的抗体制备、活性鉴定及研究应用奠定物质基础。方法 经GenBank在线检索 ,设计、确定人GLUT4cDNA基因特异引物 ,采用反转录聚合酶链 (RT PCR)方法从一例手术的人新鲜腹部肌肉组织总RNA模板中 ,获得人GLUT4表达片段cDNA的基因 ,经克隆入测序载体pGEM 3zf(- )测序 ,验证cDNA大小、完整性及序列。再克隆入表达载体 pBV2 2 0 ,经温度诱导 ,在E .coli获得表达。结果 以设计的特异引物 ,从人肌肉组织模板中能得到预期大小完整的人GLUT4cDNA基因 ,并能插入预定的克隆载体中测序 ,所得基因的序列与目的基因的序列相符。所获GLUT4cDNA基因插入原核非融合表达载体pBV2 2 0 ,获得预期大小的重组表达产物。结论 从人肌肉组织中能获得具有正确序列、含完整起始及终止密码的人GLUT4cDNA基因。

电刺激引起C2C12肌管IL-6蛋白及IL-6、GLUT4基因表达的变化

目的:研究骨骼肌细胞在不同时间的电刺激下产生的GLUT4基因与肌源性IL-6蛋白含量及其基因表达之间的关系。方法:以小鼠骨骼肌肌母细胞(C2C12)为研究对象,分为电刺激组和对照组。分别测定当刺激时间为45 min、60 min、75 min、90 min及120 min时C2C12肌管内糖原含量、GLUT4和IL-6 mRNA表达以及C2C12肌管上清液IL-6含量。结果:(1)电刺激各组GLUT4 mRNA表达均有所增加,其中60 min、75 min和120 min组显著高于对照组(P<0.05);电刺激75 min和120 min组IL-6 mRNA表达显著高于对照组(P<0.05);电刺激各组上清液IL-6含量均显著高于对照组(P<0.05)。(2)随电刺激时间增加,上述各项指标均先增加,后下降,90 min时达低谷。(3)随电刺激时间延长,C2C12肌管糖原含量逐渐减少,其中,刺激120分钟组糖原含量与对照组相比显著减少(P<0.05)。结论:(1)电刺激C2C12肌管对细胞糖代谢产生了一定影响;(2)电刺激C2C12肌管引起的GLUT4 mRNA表达的增加很可能与肌管收缩产生的IL-6有关。

^(32)P标记测定Glut_4基因突变的核酸序列分析

本实验采用了单链构型多态法（PCR-SSCP）筛选非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）病人的葡萄糖转运子（Glut_4）基因突变，进行临床基因诊断，探讨NIDDM的遗传异质性与其临床表现型的特点。选择一对（Glut_4）基因外显子4a的侧翼引物，对90例非胰岛素依赖型糖尿病患者外周淋巴组织基因组的DNA进行PCR扩增，该产物经SSCP方法发现有一例异常带型，显示了电泳的泳动变位，并应用同位素^(32)P标记，进行了核酸序列分析，对NIDDM患者进行临床基因诊断有助于阐明NIDDM的病因学，

广西巴马小型猪Glut4基因克隆和真核表达

葡萄糖转运蛋白4(Glut4)是调控肌肉葡萄糖代谢的关键因子。本研究旨在克隆广西巴马小型猪Glut4基因,构建真核表达载体,转染C2C12细胞,研究Glut4功能。以广西巴马小型猪背最长肌组织作为实验材料,通过RT-PCR技术扩增出Glut4基因编码序列,连接入PMD18-T克隆载体,测序鉴定正确后提取克隆质粒。用Bam HⅠ和HindⅢ限制性内切酶双酶切克隆质粒,获得Glut4片段,连接至p EGFP-N1载体上,构建p EGFP-N1-Glut4表达载体,提取p EGFP-N1-Glut4重组质粒转染至C2C12细胞,观察细胞荧光表达情况,并检测转染24 h和48 h时培养液的葡萄糖水平。实验结果表明:广西巴马小型猪Glut4基因编码区序列长1 530 bp,编码509个氨基酸,与参考序列(序列号为EU590115.1)的同源性为99.7%;重组质粒转染C2C12细胞能表现出绿色荧光。转染24 h和48 h时,p EGFP-N1-Glut4组细胞培养液的葡萄糖浓度均显著低于空载体组(16.08±0.49 vs.17.13±0.13,4.93±0.19 vs.6.28±0.12,p<0.01)。在C2C12成肌细胞中过表达广西巴马小型猪Glut4基因,能增加细胞的葡萄糖摄入量。

Glut4基因rs5417位点多态性和血糖水平交互作用与睡眠呼吸暂停综合征的相关性研究

目的探讨葡萄糖转运子4(glucose transporter 4,Glut4)基因rs5417位点多态性和血糖交互作用与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)的相关性。方法连续选取2010年1—12月新疆维吾尔自治区人民医院高血压科住院患者,经病史询问和体格检查,对疑似OSAS的870例患者进行夜间多导睡眠监测和血糖等相关生化指标检测。留取外周静脉血标本并提取外周血基因组DNA,采用Taqman-PCR技术对Glut4基因rs5417进行基因型鉴定。分析Glut4基因rs5417位点多态性和血糖水平交互作用与OSAS的相关性。结果 870例患者中,空腹血糖≥5.6 mmol/L患者204例,占23.45%。OSAS检出率为72.11%。携带(AA+AC)基因型人群中,空腹血糖≥5.6 mmol/L患者中OSAS检出率高于空腹血糖<5.6 mmol/L(81.11%vs.67.89%,P=0.003);然而携带位点(CC)基因型人群中,这种差异无统计学意义,多元Logistic回归分析提示,校正年龄、性别等危险因素后空腹血糖≥5.6 mmol/L是OSAS的重要危险因素,OR(95%CI)为1.20(1.02,1.42),P=0.026。空腹血糖≥5.6 mmol/L携带(AA+AC)基因型OSAS风险是空腹血糖<5.6 mmol/L携带(AA+AC)基因型患者的1.88倍,其95%CI:1.16~3.05,P=0.011。空腹血糖≥5.6 mmol/L携带(CC)基因型OSAS风险是空腹血糖<5.6 mmol/L携带(AA+AC)基因型患者的2.02倍,其95%CI:1.04~3.92,P=0.038。结论 Glut4基因rs5417位点(CC)基因型和空腹血糖≥5.6 mmol/L之间的交互作用进一步增加OSAS患病风险。

应用SSCP检测非胰岛素依赖型糖尿病Glut_4基因突变

实验选择了一对葡萄糖转运蛋白基因（Ｇｌｕｔ４基因）外显子４α的侧翼引物，应用单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法，扩增６０例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者外周淋巴细胞基因组的ＤＮＡ，经琼脂糖凝胶电泳检测证实为２５２ｂｐ，该产物经６％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测发现１例异常带型，显示了电泳的泳动变位。进一步深入研究ＮＩＤＤＭ的遗传异质性。

胰岛素促进犬在体心肌细胞葡萄糖转运子4基因表达

目的探索胰岛素促进心肌细胞葡萄糖摄取增加的机制。方法采用 Northern法分析心肌 GL U T4m RNA和免疫法分析心肌 GL U T4多肽。结果胰岛素刺激心肌 GL UT4m RNA和 GL UT4多肽表达增加 1～ 1.2倍。同时伴随心肌葡萄糖摄取增多。结论胰岛素能刺激 GL UT4m RNA和 GL U T4多肽表达 ,使 GL UT4数增加 ,进而促进心肌葡萄糖摄取增多 ,胰岛素刺激心肌细胞 GL U T4表达 ,可能是心肌增加葡萄糖摄取的重要分子学机制之一。