运动疲劳对大鼠骨骼肌纤维GLUT4mRNA和蛋白表达的影响

探讨运动疲劳引起大鼠骨骼肌纤维GLUT4mRNA和蛋白表达的变化及其可能机制。方法:Wistar大鼠40只,随机选取10只为正常对照组(D组),其余采用多级递增负荷跑台运动建立运动疲劳模型,留其成功的20只为疲劳组(P组);测试力竭运动后2组大鼠血糖、血尿素氮、血乳酸、血清胰岛素含量,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定股四头肌细胞GLUT4mRNA的表达,运用免疫组化法观测该部GLUT4蛋白的表达。结果:力竭运动后即刻,实验组大鼠血糖、血清胰岛素含量均显著低于(P<0.05)D组大鼠,而血乳酸水平却显著高于(P<0.05)D组大鼠,骨骼肌纤维GLUT4mRNA及蛋白的表达均较D组大鼠显著上调(P<0.05)。结论:运动疲劳后大鼠能量基本耗竭、通过非胰岛素途径迫使机体以上调骨骼肌纤维GLUT4mRNA和蛋白表达来应激,以此延搁由能量衰竭所引起的级联反应,从而形成一种适应性保护反应来减缓运动性外周疲劳的发生。

小牛血清去蛋白注射液对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型骨骼肌GLUT4 mRNA表达的影响

目的观察小牛血清去蛋白注射液(DECB)对2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌中葡萄糖转运因子4(GLUT4)的mRNA表达的影响。方法以高脂高糖饮食加链脲佐菌素制作2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型,观察DECB对大鼠葡萄糖耐量(OGTT),运用RT-PCR方法检测大鼠模型骨骼肌中GLUT-4的mRNA表达。结果 DECB可改善OGTT,增加大鼠模型骨骼肌中GLUT4的mRNA表达。结论 DECB具有较好的降血糖、改善胰岛素抵抗、防治糖尿病并发症的作用。

人肝癌及癌旁组织中Smad4、Smad7mRNA和蛋白表达研究

目的 :分析Smad 4、Smad 7mRNA和蛋白在人肝癌组织中的表达并与癌旁组织比较 ,了解Smad 4mRNA和蛋白与肝癌临床病理特征之间的关系。方法 :用原位杂交和免疫组化方法检测 36例肝癌存档病理标本和其中的 2 8例癌旁组织病理标本Smad 4、Smad 7mRNA和相应的蛋白。结果 :Smad 4mRNA和其蛋白在肝癌组织中的表达低于肝癌癌旁组织 ,癌组织表达率分别为 2 8%和 19% ,癌旁组织表达率分别为 86 %和 75 % ,两者之间差别有统计学意义(P <0 .0 1)。Smad 7mRNA和其蛋白表达则相反 ,癌组织表达强 ,表达率分别为 6 6 %和 6 4 % ,癌旁组织表达率分别为14 %和 36 % ,两者之间差别有统计学意义 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。Smad 4mRNA和蛋白与肝癌患者年龄、性别和肿瘤大小无关 ,但与肿瘤细胞类型、是否转移存在相关性。结论 :Smad 4和Smad 7蛋白作为转化生长因子 - β(TGF β)信号转导途径的下游分子 ,在肝癌组织中表达发生了改变 ,参与肝癌的发生、发展。

加味桃核承气汤及其不同提取物对糖尿病大鼠心肌细胞GluT4 mRNA表达的影响

目的:观察加味桃核承气汤全方及其不同提取物对糖尿病心肌糖代谢的影响。方法:将加味桃核承气汤原方通过水提醇沉、正丁醇、乙酸乙脂不同处理方法制备不同提取物,清洁级SD大鼠用STZ注射复制糖尿病模型,随机分为加味桃核承气汤全方、水提醇沉、正丁醇、乙酸乙脂和达美康、模型、空白7个组,分别用上述药物灌胃治疗8周,采用RT-PCR法检测心肌细胞GluT4 mRNA表达。结果:模型组和各治疗组GluT4 mRNA表达水平普遍低于正常组,其中模型组最低,与空白组比较有高度显著性差异,全方组、水提醇沉组、乙酸乙脂组次之,与空白组相比也有显著差异。而正丁醇组和达美康组虽有所下降,但下降幅度不大,与空白组相比差异不显著。结论:加味桃核承气汤及其正丁醇、水提醇沉、乙酸乙脂等不同提取成分均有阻止糖尿病大鼠心肌GluT4 mRNA的表达下降,稳定其表达的作用,以正丁醇提取物效果最好。

不同强度的耐力运动对糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4 mRNA表达的影响

目的:探讨不同强度的耐力运动对糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4 mRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠,其中36只大鼠经尾静脉注射链脲霉素,建立糖尿病模型。然后随机分为低强度运动组(EL)、高强度运动组(EH)、低强度运动加胰岛素治疗组(LI)、高强度运动加胰岛素治疗组(HI)、胰岛素治疗非运动组(DI)和非胰岛素治疗非运动组(DM)。6只SD大鼠为非运动正常血糖组(CN)。耐力训练采用活动平板,胰岛素采用皮下注射,共8周。运用RT-PCR法测定骨骼肌GLUT4 mRNA。结果:DM组骨骼肌GLUT4 mRNA表达水平显著低于其它各组(P<0.05)。LI组骨骼肌GLUT4 mRNA表达水平明显增高接近CN组,并且显著高于DI组。DI组GLUT4 mRNA含量与EL、EH、HI各组相当,差异无显著性意义。结论:运动可以促进GLUT4m RNA的表达,而运动强度对GLUT4 mRNA表达量无显著影响;低强度运动加胰岛素所具有最佳的GLUT4 mRNA表达水平是其它单独干预措施所无法替代的。

参麦汤对糖耐量异常大鼠骨骼肌GLUT4mRNA基因表达的影响

目的:探讨参麦汤改善糖耐量异常大鼠骨骼肌GLUT4mRNA基因表达的作用。方法:造模大鼠随机分为正常组、模型组、参麦汤组、参麦汤加运动组、运动组。用RT-PCR方法检测参麦汤对糖耐量异常大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达的影响。结果:参麦汤组大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达上升最显著(P<0.001),运动组(P<0.01)、参麦加运动组(P<0.05)依次次之。结论:参麦汤可上调大鼠骨骼肌GLUT4mRNA的表达,可能是其改善胰岛素抵抗的机理之一。

运动疲劳对大鼠纹状体神经元GLUT_3 mRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨运动疲劳后大鼠纹状体神经元GLUT_3 mRNA和蛋白表达的适应性变化。方法:Wi-star大鼠40只,任选10只为正常对照组,其余采用多级递增负荷跑台运动建立运动疲劳模型,留其成功的20只为疲劳组;测试两组大鼠血糖、血乳酸、尿素氮及血清胰岛素含量,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定纹状体神经元GLUT_3 mRNA的表达,运用免疫组化法观测该部神经元GLUT_3的蛋白表达情况。结果:力竭后即刻,实验组大鼠血糖、血清胰岛素含量均显著低于对照组大鼠(P<0.05),而血乳酸及尿素氮水平显著高于对照组大鼠(P<0.05),纹状体神经元GLUT_3 mRNA及蛋白的表达均较对照组大鼠显著上调(P<0.05)。结论:运动疲劳后大鼠能量基本耗竭,迫使机体以非胰岛素依赖方式上调纹状体神经元GLUT_3 mRNA和蛋白表达水平来应激,以此延搁由能量衰竭所引起的级联反应,从而形成一种适应性保护反应来减缓运动性疲劳的发生。

老年垂体瘤患者垂体组织NEDD4-1 mRNA PTEN蛋白的表达及其相关性

目的 探讨老年垂体瘤患者垂体组织中神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1 mRNA、第10号染色体丢失的磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白的表达及其相关性.方法 将手术切除的42例垂体瘤新鲜标本中,22例侵袭性垂体瘤组织设为A组,20例非侵袭性垂体瘤组织设为B组,另将23例正常垂体组织设为对照组,比较3组神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1 mRNA、磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白的水平及阳性率,并进行相关性分析.结果 调基因4-1 mRNA、磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白的水平及阳性率,并进行相关性分析.结果A组神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1 mRNA水平及阳性率显著高于B组、对照组(P<0.05),磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白水平及阳性率显著低于B组、对照组(P<0.05).相关分析显示,神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1 mRNA水平与磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白水平呈显著负相关(P<0.05).结论 神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1mRNA、磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白在老年垂体瘤患者组织中均有表达,且二者呈负相关.

银屑病患者外周血单个核细胞中CTLA4 mRNA及蛋白的表达

目的 了解细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA4、CD15 2 )mRNA及蛋白在银屑病患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达情况。方法 利用金葡菌肠毒素B(SEB)刺激PBMC体外增殖 ,采用原位杂交和ABC免疫组化方法检测寻常型银屑病患者PBMC中CTLA4的表达。结果 银屑病患者PBMC中CTLA4mRNA及蛋白的表达明显弱于正常人 ,其中进行期更弱于静止期。

X射线照射后EL-4细胞p16mRNA和P16蛋白表达的变化

采用RT?PCR(逆转录聚合酶链反应)半定量方法检测p16基因转录水平的变化,采用免疫细胞化学方法检测蛋白表达,观察X射线照射对离体培养的EL?4细胞p16基因转录及蛋白表达的影响,证实p16基因转录表达在辐射诱导EL?4细胞G1期阻滞中的重要作用。结果表明,2.0GyX射线照射后2—48h,EL?4细胞p16mRNA水平增高,照射后72h恢复正常水平。P16蛋白表达于照射后2h开始增高,照射后12hP16蛋白表达非常显著高于对照组(p<0.01)。剂量?效应实验表明,0.5—6.0GyX射线照射后12h,?4细胞p16mRNAEL水平明显提高。2.0、4.0、6.0Gy组P16蛋白表达均非常显著增加(分别p<0.01)。研究证实,电离辐射能够诱导EL?4细胞p16基因转录及蛋白表达增高,其增幅呈现明显的剂量依赖性。提示辐射诱导p16基因转录表达增加在辐射诱导EL?4细胞G1期阻滞中发挥重要作用。

电刺激引起C2C12肌管IL-6蛋白及IL-6、GLUT4基因表达的变化

目的:研究骨骼肌细胞在不同时间的电刺激下产生的GLUT4基因与肌源性IL-6蛋白含量及其基因表达之间的关系。方法:以小鼠骨骼肌肌母细胞(C2C12)为研究对象,分为电刺激组和对照组。分别测定当刺激时间为45 min、60 min、75 min、90 min及120 min时C2C12肌管内糖原含量、GLUT4和IL-6 mRNA表达以及C2C12肌管上清液IL-6含量。结果:(1)电刺激各组GLUT4 mRNA表达均有所增加,其中60 min、75 min和120 min组显著高于对照组(P<0.05);电刺激75 min和120 min组IL-6 mRNA表达显著高于对照组(P<0.05);电刺激各组上清液IL-6含量均显著高于对照组(P<0.05)。(2)随电刺激时间增加,上述各项指标均先增加,后下降,90 min时达低谷。(3)随电刺激时间延长,C2C12肌管糖原含量逐渐减少,其中,刺激120分钟组糖原含量与对照组相比显著减少(P<0.05)。结论:(1)电刺激C2C12肌管对细胞糖代谢产生了一定影响;(2)电刺激C2C12肌管引起的GLUT4 mRNA表达的增加很可能与肌管收缩产生的IL-6有关。

运动干预后肥胖青年女性RBP4与GLUT4mRNA表达的相关性研究

目的:探索运动后肥胖青年女性血清视黄醉结合蛋白4(RBP4)与葡萄转运体(GLUT4)的关系。方法:肥胖青年女性随机分为运动组和对照组,运动组进行12周慢跑锻炼,检测BMI、体脂率、血清RBP4、胰岛素和单核细胞GLUT4mRNA表达水平。结果:运动组肥胖青年女性血清RBP4、BMI、体脂率、胰岛素水平显著降低,单核细胞GLUT4mRNA表达水平显著增加,胰岛素敏感性提高。结论:12周慢跑能够通过降低肥胖青年女性血清RBP4、BMI、体脂率、胰岛素水平,增加单核细胞GLUT4mRNA表达水平,提高胰岛素敏感性;RBP4与单核细胞CLUT4mRNA表达呈负相关。

水通道蛋白4在大鼠脑垂体中的表达

目的:研究水通道蛋白4(AQP4)及其mRNA在脑垂体中的表达,探讨其在脑垂体激素分泌过程中的作用。方法:应用免疫组织化学和原位杂交技术,观察成年Wistar大鼠脑垂体中AQP4及其mRNA的正常分布。结果:AQP4及其mRNA在成年大鼠神经垂体的垂体细胞上表达呈阳性,分布在毛细血管窦周围的垂体细胞表达尤为强烈。腺垂体的所有细胞均有AQP4的表达,胞质中AQP4mRNA表达呈阳性。中间叶所有细胞AQP4及其mRNA的表达呈弱阳性,其中滤泡星形细胞表达较内分泌细胞强烈。结论:AQP4广泛分布于脑垂体的各种组织细胞表面,可能在垂体激素的正常分泌过程中起重要的调节作用。

白血病患者ID4、WT1、GLIPR1基因启动子区异常甲基化及mRNA表达的研究

DNA甲基化(methylation)作为最早发现的修饰途径一直属于生命科学的前沿课题之一,其能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达⑴。研究显示:白血病抑癌基因启动子异常甲基化与白血病的发病机制密切相关,抑癌基因启动子高甲基化抑制相关mRNA的表达水平可能为白血病发病的重要分子机制。

维生素D3诱导U937细胞表达CD14蛋白的方法

目的探讨维生素D3诱导的U937细胞CD14蛋白表达的方法及其对内毒素刺激的反应性。方法用(0.1μMol)VitD3 与U937细胞共同培养24h以诱导其表达CD14基因,使其产生CD14蛋白,并观察U937细胞对不同浓度LPS刺激不同时间后的反应。结果发现VitD3能稳定诱导U937细胞表达CD14 mRNA基因和CD14蛋白,转型的U937/CD14细胞显著增加了对LPS刺激的敏感性,表现为低浓度LPS刺激能诱导其细胞核中NF-kB激活,指导TNF-α的mRNA的转录和表达,进一步合成和释放TNF-α。结论U937细胞是研究CD14在LPS介导MO激活的理想细胞模型,维生素D3能诱导U937细胞CD14基因和蛋白的表达,并增加其对内毒素刺激的反应性。

减少和抑制核HDAC5对骨骼肌细胞GLUT4基因表达的影响

验证收缩骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因的表达在转录水平上是否受转录抑制子Ⅱ型HDAC5蛋白(简写为HDAC5)的调节。研究运用运动模拟信号5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)和HDACs抑制剂SCRIPTAID孵育骨骼肌细胞。用蛋白印迹技术测定HDAC5蛋白表达,定量RT-PCR法检测GLUT4 mRNA表达。与无AICAR的对照组相比,AICAR组骨骼肌细胞内HDAC5减少了29%,并伴随有124% GLUT4 mRNA的增加,但肌细胞内HDAC5的蛋白总量无变化;使用HDACs抑制剂SCRIPTAID刺激骨骼肌细胞能够明显增加核心组蛋白乙酰化水平和上调GLUT4基因的表达。这些结果提示,通过AICAR和SCRIPTAID分别减少或抑制核HDAC5均能上调骨骼肌细胞GLUT4基因的转录,HDAC5可能在转录水平上对肌肉收缩引起的GLUT4基因的表达起着重要的调节作用。

反义IL-5载体构建及其对IL-5 mRNA和蛋白表达的影响

为构建含反义IL-5的重组腺相关病毒（rAAV）-asIL-5，观察rAAV-asIL-5对哮喘大鼠CD4^＋T淋巴细胞IL-5 mRNA和蛋白表达的影响。用基因重组方法构建反义IL-5 rAAV真核表达载体质粒pasIL-5／rAAV，磷酸钙沉淀法将真核表达载体质粒pasIL-5／rAAV、包装质粒pXX2、辅助质粒pXX6共转染入病毒包装细胞293细胞中，

静脉注射脂多糖上调小鼠肺及肝CD14和Toll-like受体4表达

目的观察静脉注射脂多糖(lipopolysacchafide,LPS)致小鼠肺、肝组织及血液中LPS受体CD14、Toll-like receptor 4(TLR4)表达的变化.方法BALB/C小鼠随机分为5组,尾静脉注射LPS(7 mg/kg),分别于注后0、2、6、12和24 h取血及肺、肝组织.采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western Blot法分别检测肺和肝组织中CD14和TLR4 mRNA及蛋白表达,血清CD14(sCD14)蛋白表达.结果CD14和TLR4 mRNA在肺、肝组织中固有表达,LPS可使肺组织CD14和TLR4表达明显上调(P＜0.05),高峰出现在2-6 h(P＜0.05),24 h降至基础水平;而肝组织的变化明显滞后于肺,12 h达高峰(P＜0.05),24 h仍高于基础水平(P＜0.05).蛋白的变化与mRNA基本一致.血清CD14的表达则随时间延长而增加.结论LPS进入体内可诱导肺、肝和血液中内毒素受体CD14和TLR4的表达.不同组织中内毒素受体表达的时间差异表明肺是内毒素血症中较早受损的器官,肺组织损伤可能进一步引发肝损伤.