食源有害微生物DNA快速提取与多重PCR检测初探

目的建立一种食源有害微生物快速检测体系。方法以致泻大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌5种有害菌为检测对象,以30 s快速提取基因组DNA及多重PCR的试验技术进行了研究。结果筛选出特异性引物8对;发现致泻大肠埃希氏菌与单核细胞增生李斯特氏菌能够进行DNA快速提取PCR检测;构建了致泻大肠埃希氏菌与单核细胞增生李斯特氏菌DNA快速提取多重PCR检测体系,筛选出多重PCR成功的引物组合4对:rfbE/Hly、fbE/HlyA1、rfbE/HlyA2和eaeA/HlyA2,并对试验体系进行了优化。结论利用DNA快速提取多重PCR检测某些食源有害微生物是可行的。但是,针对具体情况采取措施优化反应十分必要,针对多重PCR设计相应引物,可能是优化关键。

转基因食品DNA提取技术研究

目的:建立从食品中提取DNA的方法。方法:采用CTAB法、酶裂解法、SDS沉淀法3种方法提取转基因相关食品中的DNA,用核酸蛋白分析仪测定核酸的纯度和浓度、PCR扩增真核生物的18SrDNA基因评价提取核酸的质量。用转基因植物通常含有的CaMV35S启动子作为转基因成分的指示标记。结果:3种方法得到的DNA提取物OD260/OD280比值均接近1.6～1.9,CTAB法获得的DNA量较少,酶提取法所得的DNA提取物的量多,但扩增条带荧光较暗。SDS法能收获较多的DNA,PCR扩增效果好。用SDS法提取的DNA进行35S启动子检测,3份转基因样品均出现强阳性结果,而10份非转基因食品均未产生阳性条带。结论:SDS沉淀法提取DNA,具有经济、简便的特点,所提的DNA量适用于PCR检测。

转基因食品的快速PCR鉴定

用十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵(CTAB)法快速高效地从样品中提取了可供分析的基因组DNA,经PCR扩增,鉴定了含有35S启动子和NOS终止子的转基因样品.该方法的灵敏度可达0.1%,并且具有很好的稳定性.

食品中转基因成分的检测

本研究建立了从多种精加工和深加工食品中提取 DNA的简便、易操作的方法。根据转基因农作物最常使用的外源基因设计引物，采用荧光 PCR－ GeneScan技术，在食品中检测出 35S启动子、 NOS终止子、 nptII标记基因以及目的基因 Cry和 EPSPS等转基因成分，并对 PCR产物进行测序或酶切分析确认，防止假阳性。

磁珠提取技术在副溶血弧菌检测中的应用

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,为解决副溶血弧菌检测步骤复杂且周期长的问题,研究开发了一种磁珠提取与PCR联用技术快速检测食品中的副溶血弧菌。首先通过碱性共沉淀法完成Fe_(3)O_(4)磁珠的制备,随后在室温条件下通过水解正硅酸乙酯完成Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁珠制备。探讨了正硅酸乙酯添加量对Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁珠粒径和磁性的影响。以DNA提取能力为目标,已知浓度DNA为提取对象,分析了Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁珠粒径和提取体系pH值对Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁珠与DNA结合能力的影响。结果表明,Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁珠结合副溶血弧菌DNA的较佳粒径为105.89 nm、Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁珠的SiO_(2)层为25 nm,此条件下Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁珠表面光滑、分散性良好、饱和磁化强度高,在磁场的作用下10 s即可完成副溶血弧菌DNA与杂质的分离,副溶血弧菌DNA的提取率高达80%(提取体系pH值为5.0)。采用优化后的Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁珠进行DNA提取,结合PCR联用技术,对92份市售水产样品(32份对虾、25份牡蛎、35份贻贝)进行副溶血弧菌筛查。结果表明,Fe_(3)O_(4)@SiO_(2)磁珠提取的DNA均可直接用于PCR检测,被测水产样品中有17份样本的副溶血弧菌检测结果为阳性。此技术与国标检测方法(GB 4789.7—2013)相比,检测时间由一周缩短至4 h,提高了副溶血弧菌的检测效率。磁珠提取结合PCR联用技术可检测不同食品中的多种微生物菌种,此研究为食品中的微生物快速检测提供了一种实用新方法。