系统性红斑狼疮血小板减少患者巨核祖细胞分化障碍

目的 明确系统性红斑狼疮 (SLE)血小板减少患者骨髓巨核祖细胞增殖分化情况 ,以及患者血清对巨核祖细胞增殖分化的影响。方法 分离 7例SLE血小板减少患者 (SLE血小板减少组 )、11例胸外科开胸手术切除肋骨患者 (正常对照组 )和 4例SLE血小板正常但病情活动患者 (SLE血小板正常组 )的骨髓单个核细胞 ,体外巨核祖细胞 (CFU MK)无血清半固体培养 ;并分别加入SLE血小板减少和SLE血小板正常患者的血清 ,观察血清对CFU MK集落形成的影响。结果 SLE血小板减少组CFU MK集落数为 (2 7.33± 9.30 )个 /片 ,明显低于正常对照组的 (6 1.2 2± 2 9.71)个 /片和SLE血小板正常组的 (6 0 .0 0± 2 9.71)个 /片 (P值均 <0 .0 5 ) ;加入SLE血小板减少患者血清后 ,SLE血小板减少组 (n =7)和正常对照组 (n =7)CFU MK集落数分别减少为(14 .2 9± 6 .73)和 (2 9.4 4± 2 3.35 )个 /片 (P <0 .0 5 )。加入SLE血小板正常患者血清后 ,正常对照组 (n =7)CFU MK增加到 (115 .6 0± 72 .99)个 /片 ,与未加血清者的差异无显著性 (P <0 .0 5 ) ;而SLE血小板减少组 (n =7)无显著增加 (P >0 .0 5 )。结论 SLE血小板减少患者骨髓巨核祖细胞分化障碍 。

生孢梭菌CFU计数培养基的研制

目的:研制一种适宜生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)菌落形成单位(Colony Forming Units,CFU)计数的微生物培养基(简称培养基),使其CFU计数能够接近最大活菌数。方法:将生孢梭菌接种于硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂),置35℃培养24-48h;将生孢梭菌的新鲜培养物置无菌离心管中,500r·min^(-1)离心5min。取上层菌液,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至与标准比浊管相同浓度,并作10倍系列稀释至1×10^(-6)备用。将上述菌液分别浇注混匀于琼脂浓度为0.5%,0.6%和0.7%的3个生孢梭菌CFU计数研究培养基(简称3个生孢梭菌CFU计数研究培养基),置厌氧条件下35℃培养。优选18h进行CFU/mL计数并观察菌落形态,优选琼脂浓度为0.5%的上述培养基作为生孢梭菌CFU计数培养基并与其他5个培养基进行生孢梭菌CFU计数的比较试验。将上述菌液采用浇注法和L棒涂抹法接种于上述6个不同的培养基,置不同培养条件及培养时间进行生孢梭菌的CFU计数。结果:生孢梭菌CFU计数培养基,浇注法接种,在厌氧条件下35℃培养18h,CFU计数最多,且菌落形态良好,可能最接近最大活菌数。结论:新研制的生孢梭菌CFU计数培养基是目前最适于生孢梭菌CFU计数的培养基。

对生孢梭菌CFU计数培养基的验证试验

目的:对新研制的生孢梭菌 CFU 计数培养基的 CFU 计数效果的可重复性进行验证。方法:将生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)复苏、增菌培养,培养物与标准比浊管比浊至相同浊度,然后10倍系列稀释至1×10^(-6),作为工作菌液。将工作菌液采用浇注法接种生孢梭菌 CFU 计数培养基,分别置厌氧条件及有氧条件35℃培养;将工作菌液采用涂抹法接种于营养琼脂培养基和厌氧菌琼脂培养基,置厌氧条件35℃培养,用未接种的培养基做空白对照。分别于18,24,48,72 h 进行 CFU·mL^(-1)计数、观察菌落形态。用同一工作菌液重复上述实验5次,分别计算不同培养基 CFU·mL^(-1)的平均值。将以上试验重复2次。结果:生孢梭菌 CFU 计数培养基的 CFU 计数结果明显优于营养琼脂培养基和厌氧琼脂培养基(P<0.01);厌氧条件培养明显优于有氧条件培养(P<0.01)。生孢梭菌以浇注法接种于 CFU 计数培养基,置厌氧条件35℃培养18 h,CFU·mL^(-1)计数最多,可能最接近最大活菌数,且菌落形态良好。结论:新研制的生孢梭菌 CFU 计数培养基可以认为是目前最适于生孢梭菌 CFU 计数的培养基,可以推荐作为生孢梭菌 CFU 计数培养基使用。

低能量激光对人胎肝造血细胞的增殖作用

低能量激光对生物体具有刺激作用。经Ar^+激光波长514.5nm照射后的人胎肝造血细胞,可以在体外培养体系中分裂增殖,造血细胞集落明显增多。用激光照射产生集落刺激因子(CSF)的细胞,可以提高CSF的活性,在造血细胞体外培养体系中,使用该CSF,也能明显地提高造血细胞集落的形成率。用激光技术来处理造血细胞,可以成倍地提高细胞产率。这一技术不仅有理论意义而且有实用价值。

肺癌组织培养液和病人血清对自身T细胞集落形成能力的影响

本文观察了10例肺癌病人围术期的肺癌组织、正常肺组织培养液和血清对自身外周血T细胞集落形成能力的影响,并以14例正常人的血清作为对照。结果显示:肺癌人病在去肿瘤负荷前T细胞集落产率为160.73±124.02/10~5,故低于正常人的397.81±133.89/10~5(P<0.001),也低于去肿瘤负荷后的(P<0.001)306.53±79.86/10~5(P<0.001)。术前病人的血清对T细胞集落的抑制率为46.97±21.42%,术后则下降至27.63±23.25%(P<0.01)。加进肺癌组织培养液时,病人的T细胞集落产率为224.83±104.05/10~5,正常肺组织培养液则为323.12±125.27/10~5(P<0.001),肺癌组织培养液和病人血清两者对T细胞集落产率的抑制性呈正相关关系(r=0.817,P<0.005)。本研究结果认为,肺癌组织能产生细胞免疫抑制物质进入血循环,导致病人T细胞集落形成能力明显下降。手术根治性切除肺癌组织,能有效地解除T细胞集落形成能力受抑制的情况。

人正常骨髓CD34^+造血细胞体外扩增形成红系及混合系造血祖细胞的能力

根据阳性选择策略，采用ＣＩＭＳ－１００免疫磁性无菌分离系统富集人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞，然后将其在含Ｅｐｏ＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＳＣＦ（简ＥＧＩＳ）组合造血生长因子的无基质液培体系中扩增４周，定期进行单个核细胞计数、ＢＦＵ－Ｅ及ＣＦＵ－Ｍｉｘ的培养。经ＦＡＣＳ鉴定所富集的ＣＤ３４＋造血细胞纯度平均＞９０％。人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞在该条件下均可持续产生大量单个核细胞，最高可扩增１７７０倍。与ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ相反，ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ扩增量较低，最高仅为２．３６和２．４倍，且仅在第１周出现，随后迅速减少至停止。

Rhodamine123介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响

目的 探讨Rhodamine12 3(Rh12 3)介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响。方法 以C5 7B/ 6小鼠为供鼠 ,BALB/c小鼠为受鼠 ,脾脏淋巴细胞混合培养 ,比较单纯Rh12 3、单纯激光照射、光动力学疗法对小鼠混合淋巴细胞增殖 (MTT法 )及骨髓粒单核巨噬细胞集落形成 (CFU -GM)的影响 (甲基纤维素培养基法 ) ;流式细胞仪检测混合淋巴细胞中CD3+ CD6 9+ 阳性率。结果 Rh12 3组及单纯激光组对细胞增殖无显著影响 ,光动力学组 2 0mW/cm2 以下剂量激光对细胞增殖无明显影响 ,30mW/cm2 以上明显抑制细胞增殖 ;30mW/cm2 以下剂量对CFU -GM集落无明显影响。光动力学疗法后细胞培养 2 4h ,CD3+ CD6 9+ 表达明显下降。结论 光动力学疗法在 30mW/cm2 激光照射时可抑制淋巴细胞增殖 ,降低早期活化T细胞表达 ,但不影响骨髓CFU

低能量激光与集落刺激因子对人脐带血造血细胞的增殖作用

本研究用铜蒸气激光照射人脐带血造血细胞，观察低能量激光与集落刺激因子（ＣＳＦ）对造血细胞的增殖作用。结果显示激光加ＣＳＦ对造血细胞ＧＭＣＦＵｃ有协同增殖作用，与单用激光照射组、ＣＳＦ刺激组及对照组相比，有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。将经激光照射与未照射脐血造血细胞在液体培养基中培养２周，前者活细胞数较前增加５５—１１０倍，后者增加１１—２７倍，再次软琼脂接种培养，仍有集落形成，生长的集落绝对数较液体培养前显著增加，而且激光照射组比未照射组更明显。提示低能量激光照射脐血细胞是体外扩增造血细胞的一种有效方法。

Ⅱ型登革病毒对人骨髓巨核祖细胞集落生长的影响

采用人骨髓巨核祖细胞体外半固体培养技术,观察14例次Ⅱ型登革病毒(D_2V)对巨核祖细胞集落(CFU-MK)生长的影响,与对照组进行比较,显示D_2感染组CFU-MK产率明显减少,经统计学处理差别有非常显著意义,从而证实在体外D_2V能抑制巨核祖细胞增殖。这提示登革出血热病人的出血和血小板减少与巨核细胞受该病毒抑制有关。

无血清培养体系原代培养脐带间充质干细胞

背景: 以含血清培养基培养的脐带间充质干细胞,存在着进一步应用的障碍。目的: 建立无血清培养体系原代培养脐带间充质干细胞。方法: 取脐带华通氏胶(Wharton’sJelly),采用机械法将组织胶切碎,1-3mm3大小,分别培养到含胎牛血清完全培养液中以及无血清培养液中。培养第11,14,17天收获细胞并进行相关检测。在符合2006年制定的干细胞最低评估标准的基础上,以集落形成单元指标评估何种培养体系能获得较多高质量的原代细胞。结果与结论: 无血清培养体系相对于经典的含血清的培养体系而言,细胞生长速度更快。另外,培养第11天,集落形成实验表明无血清培养体系下能获得更多的集落。因此,无血清培养体系可以保持间充质干细胞的特性,为替代含血清培养体系进行脐带间充质干细胞原代培养提供了可能。

成人骨髓基质细胞的体外培养

本研究从成人的髋骨抽取骨髓液 ,离心后将骨髓基质细胞悬液接种培养 ,待细胞贴壁融合后 ,进行传代扩增培养 .并采用流式细胞术进行细胞周期分析 .结果表明原代培养和传代培养的细胞均为贴壁、形态不一的骨髓基质细胞 ,且此体外培养的骨髓基质细胞具有很强的增殖能力 .本研究成功地建立了一套完整、简单、可行的体外分离、长期培养扩增人骨髓基质细胞 (HumanBoneMarrowStromalCellshBMSCs )的系统 ,证明成人骨髓基质细胞能够在体外长期增殖 ,为人的骨髓基质细胞的理论研究和临床应用奠定了基础 .

Ⅱ型登革病毒对人骨髓造血细胞抑制机制的初步探讨

用Ⅱ型登革病毒(D_2 V)与人骨髓细胞混合培养48小时后,测定上清液中干扰素的浓度,发现D_2 V感染组的干扰素浓度明显高于空白对照组(P<0.001)。在骨髓CFU-GM培养中,加入D_2 V及抗γ-干扰素后,CFU-GM集落产率明显高于只加D_2 V而不加抗γ-干扰素组(P<O.001).在去除骨髓T细胞后作CFU-MK培养,结果显示D_2 V感染组与空白对照组的CFU-MK集落产率无显著差异(P>0.05)。实验研究结果提示D_2 V对人骨髓的抑制与免疫及体液因素有关。

低能量激光对造血细胞的增殖作用

激光能刺激造血细胞增殖,促使粒-巨噬细胞集落形成单位(GM—CFUc)增多。从人脐带血中分离制备的有核细胞,加入集落刺激因子(CSF)后,形成的GM—CFUc为18.6±12.6/10~4;如果加入的CSF是经激光照射后的细胞制成的,其GM—CFUc为40.5±20.2/10~4;若先用激光照射脐带血的有核细胞,在培养时加入的是未经激光处理细胞制成的CSF,也有增殖效应,GM—CFUc为36.5±18.5/10~4;如果脐带血有核细胞和制备CSF的细胞都用低能激光照射,就可以见到GM—CFUc明显地增多,其值为57.4±41.2/10~4是未经激光处理者的三倍。表明激光照射脐带血有核细胞及制备CSF的细胞均可使GM—CFUc增殖。

用小鼠骨髓内皮细胞条件培养液代替造血刺激因子培养CFU-GM和HPP-CFC

利用大于 10kD组分的小鼠骨髓内皮细胞条件培养液 (mBMEC CM)作刺激物体外琼脂培养CFU GM ,与rmGM CSF合用培养HPP CFC获得成功。就培养CFU GM和HPP CFC而言 ,用细胞因子作刺激物与并用大于 10kD组分的mBMEC CM作刺激物相比较 ,以后者的CFU GM及HPP

小儿ALL细胞极限稀释液体微培养及微小残留病的检测

首次用ＣＦＵ－ＡＬＬ极限稀释液体微培养法，对１６例初诊，１４例ＣＲ期ＡＬＬ骨髓进行培养，并用８例正常，１１例再生骨髓作为ＣＦＵ－ＡＬＬ阴性对照。结果显示：初诊Ｂ系ＡＬＬ骨髓以重叠型集落伴ＣＤ（１０＋）细胞＞２０％为特点；初诊Ｔ－ＡＬＬ集落也属重叠型（ＣＤ（２＋）、ＣＤ（３＋）、ＣＤ（７＋））．而正常和再生骨髓虽形成集落，但为平展型或伴重叠型集落（ＣＤ（１０＋）＜２０％、以ＣＤ（１５＋）、ＣＤ（３３＋）细胞为主）。本文１４例ＣＲ期ＡＬＬ中，７例有重叠型集落（ＣＤ（１０＋）细胞＞２０％）；临床随访１年半，５例骨髓相继复发，１例诊断为睾丸白血病。

人类K-562细胞系实验条件的稳定性研究

对人类CML K 5 62细胞系生长状态的测定、集落培养、细胞形态学进行观察及染色体分析。结果表明 :所用的K 5 62细胞系与建系时的报道基本一致 ,证实本室所用的K5 62细胞生长状态和有关实验条件均较稳定。

rhGM-CSF和rhG-CSF对急性白血病骨髓CFU-F形成的影响

应用人骨髓CFU F体外培养技术 ,观察rhGM CSF和rhG CSF对急性白血病骨髓CFU F生成的影响。结果表明 ,上二者对CFU F的形成均有明显促进作用及协同效应 ,且rhGM CSF的作用大于rhG CSF。

用条件培养液代替重组因子培养小鼠高增殖潜能集落形成细胞

利用富含ＩＬ－３的ＷＥＨＩ－３细胞条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ）和富含Ｍ－ＣＳＦ的Ｌ９２９细胞条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ）代替重组因子在体外用单层琼脂法培养小鼠ＨＰＰ－ＣＦＣ获得成功。在合用ＷＥＨＩ３－ＣＭ和Ｌ９２９－ＣＭ的基础上，联合ｒｈＩＬ－１，ｒｈＩＬ－６和ｒｍＧＭ－ＣＳＦ，ＨＰＰ－ＣＦＣ的产率有所提高。用５－ＦＵ处理小鼠２天后，骨髓细胞中ＨＰＰ－ＣＦＣ得以浓集。产生的ＨＰＰ－ＣＦＣ集落直径大于０．５ｍｍ，中央致密，细胞数大于５００００。

严重型再生障碍性贫血患者骨髓造血祖细胞集落形成与免疫抑制治疗疗效的关系

目的：进一步阐明严重型再生障碍性贫血（ＳＡＡ）患者骨髓造血干细胞缺陷的实质；初步分析ＳＡＡ患者骨髓造血祖细胞集落的形成与免疫抑制治疗（ＩＳＴ）疗效的关系。方法：采用造血祖细胞甲基纤维素半固体培养法。结果：研究的３０例初诊ＳＡＡ患者中，９０％的患者ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－ＧＭ的形成明显减少，５６．７％的患者治疗前无任何集落形成，然而，有１０％的患者，其ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ中的１种或２种集落正常或接近正常；ＩＳＴ可使５９．１％的患者出现一系以上的集落形成或集落形成的增加，治疗前后比较，具有显著性差异（ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－ＥＰ＜０．０１，ＣＦＵ－ＧＭＰ＜０．０５），但多数患者集落的形成达不到正常水平，并有２２．７％的患者无集落形成；治疗前有集落形成患者的ＩＳＴ有效率为８０％，而无集落形成者为５０％，但差异不明显（Ｐ＞０．０５）；ＳＡＡ患者骨髓造血祖细胞集落形成的增加往往落后于ＩＳＴ疗效的出现，而骨髓象巨核细胞的出现常伴有造血祖细胞集落形成的明显增加。结论：多数ＳＡＡ存在造血干、祖细胞的缺陷且可能是由免疫损伤机制引起；ＩＳＴ可改善ＳＡＡ患者的体内、外造血；ＩＳＴ前后检测骨髓造血祖细胞集落的形?

牛支原体扩大培养效果测定及生长曲线的观察

为了监测培养过程中牛支原体的生长情况,利用含氯化三苯基四氮唑（TTC）牛支原体培养基,采用倾注培养法对牛支原体扩大培养效果进行了菌落形成单位（CFU）计数,通过颜色变化单位（CCU）法进行浓度检测,并测定了OD630值及p H值的变化,据此绘制生长曲线。结果表明：待测牛支原体培养物在梯度稀释后采用倾注培养可方便计数,且计数菌落显色特征明显;CCU法检测待测菌株在96小时时的生长效价为5.0×108CCU/m L;牛支原体纯培养物在不同时段其OD630值变化范围为0.024~0.213,呈现二段式分布,即快速上升阶段和平稳阶段,平稳阶段后有下降趋势;p H值变化范围为6.8~7.9,随时间累积而下降,且在培养48 h内下降速度较快,48~84 h下降缓慢,84 h后基本无变化。