GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

目的 :研究GM CSF基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的可行性。方法 :通过逆转录病毒载体 ,将小鼠GM CSF基因导入EL 4淋巴瘤细胞中 ,研究EL 4 GM CSF在同系C5 7BL 6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果 :EL 4 GM CSF细胞在小鼠中的成瘤性下降 ,5 0 %小鼠无瘤生存。射线灭活的EL 4 GM CSF瘤苗能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击 ,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗 ,能延长荷瘤宿主的存活时间(33 1± 1 8)与对照组EL 4 Wt(2 3 2± 1 5天 )比差异有显著性 (P <0 0 1)。基因修饰的瘤苗作用明显增强。结论 :GM CSF基因修饰的肿瘤疫苗可诱导较强的抗肿瘤免疫反应 ,导致肿瘤的部分根除 ,本实验为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提出了一定的实验依据。

GM-CSF基因修饰肿瘤细胞疫苗治疗前后黑素瘤患者CD8^+T细胞的变化及其对预后的影响

目的:探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰的肿瘤细胞疫苗(GM-CSF modified tumor cell vaccine,GVAX)治疗前后黑素瘤患者外周血免疫指标的变化及其对预后的影响。方法:收集2007年10月至2012年12月期间于天津医科大学肿瘤医院接受GVAX治疗的56例黑素瘤患者,采用流式细胞技术检测患者治疗前后外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、调节性T细胞(Treg)、自然杀伤细胞(NK)及树突状细胞(DC1和DC2)的比例,分析治疗前后外周血各免疫细胞比例的变化,并探讨其与患者预后的关系。结果:GVAX治疗后患者外周血CD8+T细胞比例较前升高[(37.56±12.76)%vs(34.71±12.30)%,P=0.006],CD4+T细胞比例降低[(53.44±13.36)%vs(56.27±13.15)%,P=0.017],CD4+/CD8+比值降低[1.61(1.37)vs 1.75(0.71),P=0.009]。治疗后CD3+T、NK、Treg、DC1、DC2与治疗前的差异无统计学意义(P>0.05)。晚期患者GVAX治疗前外周血CD8+T细胞比例大于均值组与小于均值组相比,中位生存时间显著延长(29.16 vs 13.34个月,P=0.012)。结论:GVAX治疗黑素瘤可增强CD8+T细胞为主的抗肿瘤免疫应答,晚期患者外周血CD8+T细胞比例可作为预测GVAX疗效的指标,为判断预后起到一定的提示作用。

GM-CSF及B7-1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的研究

目的 :研究GM CSF及B7 1基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的有效性。方法 :我们将小鼠GM CSF及CD80基因通过逆转录病毒载体分别导入EL 4淋巴瘤细胞中 ,进而研究了EL 4/GM CSF及EL 4/B7 1在同系C5 7BL/ 6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果 :转B7 1基因的肿瘤细胞诱发了CD80的高表达。转基因的肿瘤细胞在同源小鼠中的成瘤性下降 ,免疫原性增强。在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗 ,基因修饰的瘤苗作用明显增强 ,而在肿瘤生长的晚期未能显示出明显的治疗作用。射线灭活的EL 4/GM CSF瘤苗能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击 ,而射线灭活的EL 4/B7 1瘤苗作用减弱。将EL 4/GM CSF和EL 4/B7 1瘤苗联合应用具有协同抗肿瘤效果。结论 :GM CSF及B7 1基因修饰的肿瘤疫苗可诱导抗肿瘤免疫反应 ,导致肿瘤的部分根除 。

腺病毒载体介导的人类B7.1基因修饰的肿瘤细胞疫苗

为了证明腺病毒载体可做为将Ｂ７基因导入肿瘤细胞的替代载体，达到提高肿瘤细胞疫苗效应的目的，且不存在逆转录病毒载体的局限性，用同源重组的方法构建了表达人类Ｂ７．１ｃＤＮＡ的重组人类５型腺病毒（ＡｄＢ７．１），并用它感染小鼠乳腺癌细胞系ＥＭＦ６和大鼠神经胶质瘤细胞系Ｃ６，检测Ｂ７．１基因在感染过的肿瘤细胞中的表达；用ＡｄＢ７．１感染过的肿瘤细胞给同基因宿主（ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和Ｗｉｓｔａｒ大鼠）接种，观察它们在体内的致瘤性及对肿瘤的防治作用；用５１Ｃｒ－释放法对用各种肿瘤细胞免疫后３周的动物脾淋巴细胞进行ＣＴＬｓ杀伤活性的测定，来检测其细胞免疫活性。结果的Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明：ＡｄＢ７．１感染过的肿瘤细胞表达了Ｂ７．１基因。接种／侵袭实验和ＣＴＬｓ杀伤活性的测定实验表明，与野生型肿瘤细胞相比，表达Ｂ７．１的肿瘤细胞在动物体内的致瘤性降低（Ｐ＜０．０１），能诱导针对野生型肿瘤的高水平的系统性免疫应答和细胞毒Ｔ细胞活性，对肿瘤也有一定的防治作用。本研究的结论是，腺病毒载体可代替逆转录病毒载体将Ｂ７．１基因导入肿瘤细胞，提高肿瘤细胞疫苗的抗肿瘤作用。它操作简单，感染效率高。

GM-CSF基因修饰的肿瘤疫苗

肿瘤细胞瘤苗是最早的瘤苗形式,至今仍是人们研究的热点。近些年随着基因转染技术的发展,人们在增强用于疫苗的肿瘤细胞免疫原性方面做出了不懈的努力,其中采用了转基因的方式提高肿瘤疫苗的免疫效果。在众多转染细胞因子的瘤苗中,转染粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的肿瘤疫苗效果相对显著。GM-CSF是一种强烈刺激巨噬细胞和树突细胞等抗原呈递细胞的增殖、分化、活化、成熟和趋化的细胞因子。GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞用放射线灭活后体内注射,可增加局部炎性反应,大量多核细胞、巨噬细胞、树突状细胞(DC)浸润,促进了肿瘤抗原的呈递,能够诱导强烈的抗肿瘤免疫反应。GM-CSF转导疫苗为GVAX系列肿瘤疫苗,对GVAX肿瘤疫苗进行了大量的I/Ⅱ期临床研究,其中包括黑色素瘤、前列腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)和肾癌。这些临床试验均证实这种方法是十分安全的,并能有效刺激机体产生抗肿瘤免疫反应。

IL-18基因修饰对肺癌细胞来源exosome诱导杀伤肿瘤细胞作用的影响

目的:研究细胞介素18(IL-18)基因修饰对肺癌细胞来源exosome诱导杀伤肿瘤细胞作用的影响,以探讨高效exosome疫苗的制备。方法:提取IL-18基因修饰的NCI-H460细胞(IL-18/H460)、pcDNA3.1+载体修饰细胞(DNA3.1/H460)及未修饰NCI-H460细胞(NCI-H460)上清液的exosome,透射电镜下观察exo-some形态;用Western blotting方法检测exosome中热休克蛋白70(HSP70)、人白细胞抗原(HLA)及IL-18的表达;用exosome直接刺激活化T细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)法测定T细胞对NCI-H460细胞的杀伤作用;用exosome冲击树突状细胞(DCs),然后活化T细胞,测定对NCI-H460细胞的杀伤作用,计算杀伤率。结果:透射电镜下观察exosome具有典型的形态;3组exosome中均有HSP70及HLA蛋白表达,IL-18/H460组有IL-18蛋白表达。效靶比25∶1、10∶1、5∶1时exosome直接提高活化T细胞的杀伤率,IL-18/H460组为(38.45±5.42)%、(25.17±3.94)%和(11.75±3.22)%,exosome冲击DCs活化T细胞的杀伤率,IL-18/H460组为(89.05±4.06)%、(64.97±6.02)%和(40.16±4.98)%,均高于其余2组。Exosome冲击DCs活化T细胞的杀伤作用强于exosome直接刺激活化的T细胞。结论:IL-18基因修饰能增强NCI-H460细胞来源exosome诱导的杀伤肿瘤细胞作用。

GM-CSF修饰肿瘤细胞疫苗治疗前后肺癌患者Treg的变化及其临床意义

目的:观察GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗(GM-CSF modified tumor cell vaccine,GVAX)治疗前后肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)比例的变化,探讨其与肺癌临床病理特征的关系及对患者生存的影响。方法:选择2007年3月至2010年7月天津医科大学附属肿瘤医院接受GVAX治疗的85例肺癌患者,其中鳞癌28例、腺癌47例、小细胞癌10例,早期(Ⅰ～ⅢA期)23例、晚期(ⅢB～Ⅳ期)62例。流式细胞术检测患者GVAX治疗前后外周血Treg的比例,分析治疗前后Treg比例变化与肺癌临床病理特征和患者生存期的关系。结果:接受GVAX治疗的85例肺癌患者1、3年的生存率分别为69.3%、48.2%,治疗后外周血Treg比例明显下降[(4.86±2.52)%vs(5.52±2.68)%,P<0.05]。患者血清LDH水平正常组治疗后Treg比例明显下降[(4.50±2.23)%vs(5.59±2.76)%,P<0.05],而LDH增高组治疗后Treg比例上升[(6.04±3.07)%vs(5.31±2.48)%,P<0.05];GVAX治疗超过1个疗程者较治疗1个疗程者治疗后Treg比例下降更明显[(-0.39±2.39)%vs(-2.11±1.62)%,P<0.05]。治疗前后外周血Treg比例的变化与患者预后相关,治疗后Treg比例下降组患者中位总生存期(overall survival,OS)明显长于升高组(21个月vs 10个月,P<0.05),晚期肺癌患者中Treg比例下降者的OS延长更明显(18个月vs 8个月,P<0.05)。结论:肺癌患者GVAX治疗前后外周血Treg比例变化可能成为评价GVAX疗效及判断患者预后的免疫指标,GVAX治疗后患者Treg比例的下降提示其疗效和预后都较好。

基因修饰细胞介导的肿瘤治疗

肿瘤的基因治疗最终是通过基因修饰细胞介导完成的。本文就免疫基因修饰的肿瘤细胞疫苗、自杀基因或抑癌基因修饰的细胞疫苗、基因修饰的树突状细胞疫苗以及基因修饰的淋巴细胞、造血干细胞等各种基因修饰细胞在介导肿瘤治疗中的特点、作用及进展作一综述。

基因修饰的树突状细胞应用于肿瘤免疫治疗的研究进展

树突状细胞(dendritic cells,DC)被认为是目前人体内最重要的、抗原呈递能力最强的抗原呈递细胞(antigen-presentingcell,APC),是体内唯一能活化静息T淋巴细胞的APC,是机体免疫应答的始动者,在抗肿瘤免疫中发挥着极其重要的作用。近些年来,基因修饰DC疫苗的出现,弥补了单纯DC功能的不足,增强了其抗肿瘤作用,本文将对基因修饰DC疫苗的抗肿瘤作用作一简要综述。

基因修饰的DC疫苗在肿瘤治疗中的作用

树突状细胞(dendritic cells,DCs)是唯一能激活初始型T细胞的抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC),也是目前发现的功能最强大的APC,在抗肿瘤免疫中发挥重要的作用。基因修饰的DC疫苗更由于其出众的优势已成为肿瘤免疫治疗的焦点之一。

基因修饰细胞介导的肿瘤治疗

肿瘤的基因治疗 ,最终都是通过基因修饰细胞介导完成的。这些基因修饰细胞可分为①免疫基因修饰的肿瘤细胞疫苗 ;②自杀基因或抑癌基因修饰的细胞疫苗 ;③基因修饰的树突状细胞 (DC)疫苗 ;④基因修饰造血干细胞 ;⑤基因修饰淋巴细胞 ;⑥基因修饰血管内皮细胞及其它。它们在肿瘤的基因治疗中各有特点 ,本文主要介绍这些方面的研究进展。

基因修饰DC在抗肿瘤免疫治疗中的应用

DC是目前已知人体内功能最强的免疫提呈细胞(antigen presenting cell,APC),成熟的DC通过诱导细胞免疫、参与体液免疫以及分泌多种细胞因子等多种途径,在抗原的捕获、加工、提呈和激活T细胞产生抗肿瘤免疫效应中发挥重要作用。恶性肿瘤患者往往存在一定的DC功能缺陷,基因修饰的DC可为机体免疫系统提供多个可供识别的抗原表位,是加强抗肿瘤免疫的重要手段之一。基因修饰的DC疫苗种类较多,如肿瘤相关抗原基因、细胞因子基因、共刺激分子基因、黏附分子基因、免疫调控分子基因、凋亡相关基因、癌基因以及多种基因共同修饰的DC疫苗等,这些经基因修饰后的DC疫苗在抗肿瘤免疫的基础研究方面已经证实了其免疫增强作用,而且部分DC疫苗在临床试验中也取得了一定的抗肿瘤疗效,这些都将为基因修饰的DC在临床中的应用提供重要的理论基础。本文将从DC的生物学特征、DC的抗肿瘤机制以及基因修饰的DC疫苗在抗肿瘤免疫中的基础研究和相关临床试验等几个方面做一综述。

γ-干扰素基因修饰A549细胞瘤苗研究

本文研究了将人IFN-γ基因重组入pLXSN 载体,用pA317包装后转入人肺腺癌细胞株A549中,经G418筛选获得稳定表达IFN-γ的转基因的A549-IFN-γ细胞株。经测定,该转基因的细胞表面MHC-Ⅰ、Ⅱ分子表达显著提高。接种动物表明致瘤性下降,制成瘤苗可诱导产生较强的细胞毒T淋巴细胞的抑瘤能力;经放射线照射的瘤苗,在添加肿瘤特异抗原和细胞因子后,在动物肿瘤模型上显示出良好的抑瘤效果。提示,经IFN-γ基因转导的人肺腺癌A549细胞株可产生较强的抗肿瘤效果,这为该瘤苗的临床应用提供了实验依据。

MIF基因修饰的瘤苗免疫小鼠后T细胞数量和功能的分析

目的 :研究 T细胞在巨噬细胞游走抑制因子 (MIF)基因修饰的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应中的作用。 方法 :将重组MIF腺病毒转染小鼠 FBL 3红白血病细胞制成的瘤苗接种于小鼠体内 ,观察脾脏和淋巴结中 T细胞数量和功能的改变。 结果 :经 MIF基因修饰的瘤苗免疫后 ,小鼠脾细胞和腹股沟引流淋巴结细胞数量明显增多 ,脾细胞 CTL活性显著增强 ,引流淋巴结中 CD3+ 、CD2 8+ 、CD4+ 和 CD8+ T细胞百分率均较对照组增加。MIF基因修饰的瘤苗免疫对小鼠受野生型 FBL 3肿瘤细胞再攻击具有明显的保护作用。结论 :MIF基因修饰的瘤苗能诱导 T细胞介导的抗肿瘤免疫反应 。

小鼠GM-CSF的基因克隆和锚定修饰

将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定修饰的细胞因子直接转移到肿瘤细胞膜上,是研究治疗性肿瘤疫苗的一种有潜力的新策略。克隆了小鼠GM-CSF基因,并通过将从衰变加速因子(DAF)来源的GPI修饰性信号序列与mGM-CSF嵌合,获得了GPI修饰的mGM-CSF分子,构建并鉴定了GPI锚定修饰的真核表达载体pCI/GPI-mGM-CSF,为进一步研究表面工程治疗性肿瘤疫苗奠定了基础。

突变k-ras基因修饰的树突状细胞疫苗的抗肿瘤作用

目的探讨腺病毒介导的突变kras基因修饰的树突状细胞疫苗在体内的抗肿瘤作用。方法将突变kras基因修饰的DC经腹腔注射免疫小鼠(5×105/只),1次/周,共2次,随后将肿瘤细胞接种于皮下,观察DC能否诱发机体的免疫保护。结果突变kras基因修饰的DC疫苗组Lewis肺癌(3LL)移植瘤生长明显延缓,肿瘤体积显著低于空载体组、DC组和对照组(P<0.05),而抑瘤率显著高于空载体组、DC组和对照组(P<0.05)。突变kras基因修饰的DC疫苗组Lewis肺癌(3LL)移植瘤肺转移率(2/10,20%)显著低于空载体组(6/10,60%)、DC组(6/10,60%)和对照组(8/10,80%,P<0.05);肺部转移灶数目亦显著少于空载体组、DC组和对照组(P<0.05)。结论突变kras基因修饰的DC疫苗能有效诱导机体产生特异的抗肿瘤免疫反应,抑制Lewis肺癌生长和远处转移。

以树突状细胞为基础的肿瘤基因治疗的研究进展

树突状细胞（DC）是目前发现的功能最强大、唯一能够直接激活初始T细胞的抗原提呈细胞（APC），是连接固有免疫和适应性免疫应答的桥梁。因此，DC已经成为免疫治疗一个有吸引力的操作靶点。近年来，基因修饰DC疫苗的出现增强了其抗肿瘤作用，因而对基因修饰的DC为基础疫苗的抗肿瘤作用的研究很有意义。

树突状细胞的靶向抗肿瘤治疗进展

树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前已知体内最强的抗原提呈细胞(APC),其在肿瘤免疫中具有重要的作用。DC的靶向抗肿瘤治疗成为当今肿瘤免疫治疗的研究热点。本文就DC的抗肿瘤机制、DC基因修饰策略及DC疫苗的临床治疗进展进行综述。