人参皂甙对K562细胞表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响

目的 :进一步探讨人参皂甙 (TSPG)诱导K5 6 2细胞分化的作用机制及了解K5 6 2细胞的生物学特点 ,为开发TSPG临床应用提供理论与实验依据。方法 :采用形态学观察和流式细胞术等方法 ,研究TSPG在诱导K5 6 2细胞向较为成熟细胞分化过程中 ,对其表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响。结果 :TSPG可诱导K5 6 2细胞向较成熟的红系、粒系细胞分化 ,作用后细胞表达CD15、HIR2 、EPO -R和GM -CSF -R的阳性细胞率均有所升高。结论 :K5 6 2细胞为分化受阻滞的异常造血祖细胞 ,其生物学特点与正常人多向造血祖细胞 (CFU -Mix)相似 ;TSPG诱导K5 6 2细胞成熟分化的作用机理可能与TSPG促进K5 6 2细胞EPO -R、GM -CSF -R表达升高有关。

一种筛选原核高效表达克隆的方法

外源基因在大肠杆菌中的低表达往往与基因５’端核苷酸序列不利于翻译起始有关。未经修饰的ＧＭ－ＣＳＦ在大肠杆菌中表达量很低，我们选用ＧＭ－ＣＳＦ作为报道基因，在不改变氨基酸序列的前提下，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，构建了两类包含５’端１０个密码子的简并序列库，为便于快速筛选高表达的克隆，构建了四环素抗性（ＴｅｔＲ）选择载体筛选系统，其基本原理是外源基因与ＴｅｔＲ基因串联，高表达的ＧＭ－ＣＳＦ５’端带动ＴｅｔＲ的表达，逐渐提高四环素浓度就可以筛选出适合高表达的ＧＭ－ＣＳＦ５’端序列。最终在四环素浓度高达６０μｇ／ｍｌ的培养基上筛选了数个高表达克隆。这种系统对大肠杆菌中表达量低。