利用靶标非固定化的氧化石墨烯GO-SELEX法筛选手性对映体L-肉碱适配体

采用非固定靶标的GO-SELEX法筛选L-肉碱特异性结合的适配体。利用核酸外切酶法制备单链文库,最终经过13轮筛选获得了高富集度的适配体文库。以共振瑞利散射技术监测适配体筛选过程,获得亲和力最高的适配体文库进行高通量测序。再通过分析比对高重复度序列的自由能值、二级结构预测模型等参数确定了10条候选序列。最后鉴定筛选得到一条特异结合L-肉碱的最佳适配体,命名为CA04。为后续建立检测肉碱手性对映体的新方法奠定基础。

腐霉利核酸适配体的筛选与鉴定

本文通过氧化石墨烯-体外指数富集配体系统进化技术,筛选并获得靶向腐霉利的核酸适配体Pr-A06和Pr-A08,通过二级结构预测,两种核酸适配体形成茎环结构和分子内G-四链体,结构稳定。使用胶体金法初步鉴定Pr-A06和Pr-A08,研究结果表明Pr-A06和Pr-A08解离常数(K d)分别为42.94±8.142 nmol/L、27.01±6.519 nmol/L,亲和力较好,并且特异性良好。Pr-A06浓度在0.1~1μg/mL之间有良好的线性范围,检测限为0.153μg/mL,Pr-A08浓度在0.05~1μg/mL之间有良好的线性范围,检测限为0.115μg/mL。本研究筛选的适配体为腐霉利的快速检测提供了新条件。

氧化石墨烯指数富集法筛选食品中的组胺适配体

组胺(HA)是影响人类健康和食品质量的重要生化物质。对其进行快速、准确检测和鉴定至关重要。本试验利用氧化石墨烯对单链寡核苷酸(ssDNA)的强吸附作用,分离与靶标结合和未结合的ssDNA,对组胺适配体进行11轮的体外指数富集筛选,最终得到15条高亲和力和特异性的适配体。通过后续的适配体二级结构、亲和性和特异性分析,HAA-4和HAA-7被确定为最佳候选适配体,可被作为将来关于组胺的新型检测方法构建的候选适配体。本文首次利用氧化石墨烯指数富集(GO-SELEX)技术筛选出对组胺具有较高亲和特异性的适配体,为后续利用适配体对食品中组胺快速检测奠定了基础。