Golph2蛋白质的原核表达及多克隆抗体制备

目的:新近发现Golph2蛋白与肝癌关系密切,制备Golph2重组蛋白质和多克隆抗体,建立Western blot检测技术,为后续研究提供基础。方法:RT-PCR从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列,PCR回复突变制备全长完整基因(1206bp),将其插入至原核表达载体pET-21、转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE鉴定。将纯化蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗血清。建立Western blot鉴定重组蛋白和抗血清特异性,测定临床血清标本中Golph2蛋白水平。结果:从肝癌细胞中钓取的基因,出现2个碱基置换突变和1个碱基缺失突变,经回复突变,获得与NM177937完全一致序列。SDS-PAGE和Western blot证实,重组Golph2蛋白质与预期结果一致。抗血清能够特异地识别52kD重组蛋白质和73kD血清蛋白质。结论:Golph2蛋白质表达和抗血清制备完全成功。

GOLPH2蛋白在皮肤黑色素瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨高尔基磷酸化蛋白2(GOLPH2)在皮肤黑色素瘤中的表达及其临床意义。方法:选取我院2010年6月—2011年6月期间我院收治的皮肤黑色素瘤患者24例作为观察组,同时另选取在我院进行常规体检的正常居民24例作为对照组。使用免疫组化法检测GOLPH2蛋白表达及临床意义。结果:皮肤黑色素瘤组织中GOLPH2蛋白阳性率为79.12%,明显高于正常皮肤16.67%(P<0.05)。GOLPH2蛋白表达与患者的年龄、性别无明显相关(P>0.05),而与肿瘤大小、TNM分期、分化程度及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。GOLPH2蛋白表达D阴性的患者术后生存率明显高于阳性患者(P<0.05)。结论:GOLPH2蛋白的阳性表达与皮肤黑色素瘤的发生、进展有关,检测GOLPH2蛋白有助于判断皮肤黑色素瘤的早期诊断、病情进展及预后。