拟南芥GOX1基因的克隆和表达分析

乙醇酸氧化酶1(glycolate oxidase 1,GOX1)是拟南芥光呼吸过程中的关键酶之一,可将乙醇酸氧化为乙醛酸和过氧化氢。文章以野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)Columbia(Col-0)为研究材料,通过反转录(reverse transcription,RT)和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术获得GOX1基因1104 bp的CDS序列,运用生物信息学技术初步分析其基因功能,并构建带有His标签的PET28a(+)-GOX1原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态BL21中,采用SDS-PAGE电泳检测诱导表达后的蛋白产物。GOX1基因编码367个氨基酸,相对分子质量为40341.48,理论等电点为9.16,属于亲水性蛋白,定位于过氧化物酶体。SDS-PAGE在40 kDa处检测到目的条带,与理论值预测一致。通过对GOX1基因的表达分析,为进一步探究蛋白功能和调控机制奠定了基础。

GOX-CP4EPSP转化甘蓝型油菜的抗草甘膦研究

利用Genome walking方法在孟山都抗农达油菜(Brassica napus L.)中克隆了GOX-CP4EPSP双顺反子结构。利用农杆菌介导的遗传转化方法将PCAMBIA-GOX-CP4EPSP植物双元表达载体转化甘蓝型油菜Pol CMS恢复系"7-5"获得转基因植株。在田间对转基因植株喷施400倍的农达(41%草甘膦异丙胺盐),所有的转基因家系都能存活,而非转基因Pol CMS恢复系"7-5"全部死亡。在转基因植株叶片中能够检测到GOX和CP4EPSP基因的表达。对转基因T1代3个家系在60 mg/L草甘膦培养基上的发芽试验以及GUS染色分析表明抗草甘膦的单株能表达与GOX-CP4EPSP共转化的GUS蛋白质,而对草甘膦敏感的单株和野生型对照植株都不能表达GUS蛋白质。鉴于GOX-CP4EPSP双顺反子在转基因油菜中的有效性和稳定性,可以作为双子叶植物遗传转化的筛选标记。

MnO2-GOx碳糊电极对葡萄糖的电位响应

研制一种新型二氧化锰-酶修饰碳糊电极．应用直接电位法分别研究了磷酸盐底液的pH值、不同种类的粘合剂、二氧化锰修饰含量以及温度等各因素对该修饰电极测定H2O2和葡萄糖电位响应的影响．在优化实验条件（35℃，磷酸缓冲底液pH=7）下，葡萄糖检测的线性范围为2．0×10^-5～5．2×10^-3 mol·L^-1，灵敏度：36．12～34．62mV／pGlueose，检测限：3．3×10^-6 mol·L^-1．该电极具有良好的选择性、灵敏度、稳定性和重复性，大多数常见阴阳离子、甘露醇、丙三醇和脲不干扰测定．

Nafion/GOX/CS-g-C_3N_4/GCE的制备及其在葡萄糖生物传感器中的应用

首先以三聚氰胺为原料制备出g-C_3N_4纳米材料;再将壳聚糖(CS)与g-C_3N_4混合并滴涂在玻碳电极表面,制得CS-g-C_3N_4/GCE电极;最后将葡萄糖氧化酶(GOX)滴涂并用Nafion膜将其固定在CS-g-C_3N_4/GCE电极表面,制得Nafion/GOX/CS-g-C_3N_4/GCE葡萄糖生物传感器,实现了葡萄糖氧化酶的直接电化学。采用透射电子显微镜(TEM)、X-射线衍射仪(XRD)、循环伏安法(CV)及差分脉冲伏安法(DPV)等手段对所制备的电极进行了表征和测试。结果表明:所制得的Nafion/GOX/CS-g-C_3N_4/GCE葡萄糖生物传感器的响应范围为0.1~8.0mmol·L-1,检出限为46.7μmol·L-1,Michaelis-Menten常数为0.42mmol·L-1。该生物传感器可以排除尿酸(UA)、抗坏血酸(AA)、多巴胺(DA)等的干扰,表现出优异的抗干扰性和选择性。此外,该生物传感器还表现出较好的重复性和稳定性,可应用于实际样品检测。

氧化葡萄糖酸杆菌胞内脱氢酶Gox0525的酶学性质研究

将氧化葡萄糖酸杆菌胞内脱氢酶推测基因Gox0525克隆至表达载体pET-28a(+)中,并在大肠杆菌中得到可溶性表达的蛋白,纯化后经HPLC以及SDS-PAGE检测,表明其活性形式为四聚体。重组蛋白Gox0525属于短链脱氢酶家族,选择该家族的催化底物谱测试,结果表明Gox0525具有还原二酮的能力,且专一性利用辅酶NADPH,存pH 9.0、30℃条件下活性较高,适合保存在pH 7.0、4℃条件下。酶反应的发生对金属离子无依赖性,添加Ca^(2+)对酶活力有促进作用,而Fe^(3+)有抑制作用。

比特币交易所Mt.Gox承认被盗 损失5亿美元

【搜狐IT消息】3月4日,据科技资讯网站ReadWrite报道,上周申请破产的比特币交易所Mt.Gox日前就公司所处的困境发表了一份最新声明,其内容包括公司财务状况以及对当前危机的应对计划。在这份声明中,Mt.Gox打破了沉默,承认比特币被盗给顾客造成了约5亿美元的损失。与此同时,公司CEO马克?卡普勒斯(Mark Karpeles)态度坚决地希望Mt.Gox能在破产状态下继续运营,目的是"增加对债权人的返款"。

最大比特币交易平台Mt.Gox申请破产保护

【搜狐IT消息】2月28日,据路透社网站报道,如今,在外人来看,从最初的瞬间走红,到当前的轰然倒塌,总部位于日本的全球最大比特币交易平台Mt.Gox可谓大起大落。但是,比特币交易的知情者们却认为,由于Mt.Gox一直饱受监管机构的困扰、再加上前业务合作伙伴的撤离以及频繁遭受网络黑客的攻击,因此该虚拟货币交易平台其实早在近一年之前就开始衰败。由于Mt.

内幕曝光:Mt.Gox到底有多不靠谱

【搜狐IT消息】3月4日,全球最大的比特币交易所Mt.Gox上周比特币被盗4.6亿美元、银行账号被盗2740万美元,一下子陷入了破产的泥潭。而《连线》(Wired)杂志网站日前撰文揭露了Mt.Gox的内幕,指出这场比特币灾难绝非偶然,其根本原因是该公司经营管理方式极度不靠谱。以下为文章主要内容:在外人看来,Mt.Gox似乎是离经叛道的创业典范;

福斯达GOX20000空分装置顺利出氧

10月4日,杭州福斯达深冷股份有限公司分包陕鼓连云港兴鑫钢铁煤气综合利用总承包工程配套GOX20000万空分装置顺利出氧。据了解,该装置于2016年12月1日签订合同,是福斯达深冷与西安陕鼓合作的第一套装置。合同范畴涉及设计、

昆虫葡萄糖氧化酶及其功能

葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOX)广泛分布于动物、植物及微生物体内,特别是真菌中。与真菌的GOX相比,有关昆虫GOX特性和功能的研究很有限,但近期发现其在昆虫与植物相互关系中起着非常重要的作用。通过与真菌GOX比较,文章主要综述GOX的性质、分布以及昆虫中GOX生理功能、作用和演化,并进一步讨论其研究进展。

葡萄糖氧化酶在植食性昆虫与寄主植物互作中的作用

昆虫葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOX)主要由下唇腺产生,含量很高,经由吐丝器排出体外,是唾液中的主要酶类.越来越多的证据表明,昆虫唾液中的GOX在植食性昆虫与寄主植物的相互关系和协同进化中发挥重要的作用,是它们互作的纽带.在二者的互作中,植食性昆虫的GOX可以显著抑制寄主植物的防御反应,也可以诱导寄主植物的直接或间接防御;而不同的寄主植物对同一种昆虫或相同植物对不同种昆虫GOX的影响也存在较大差异,特别是植物中的营养物质,如蛋白质和糖,都会对GOX产生影响,这种影响发生在转录、翻译或翻译后水平.同时,植物中毒素对GOX的影响也不容忽视.主要综述了昆虫GOX的基本特性、与寄主植物防御之间的关系以及食物因子对GOX的影响,以期为深入探讨植食性昆虫与寄主植物的协同进化机理提供有价值的信息.

油菜抗除草剂性状的遗传及利用

以抗草甘膦油菜“Q3”和MICMS保持系“宁B6”、“宁B7”及恢复系“宁R1”、“宁R3”为亲本材料,配制杂交组合,研究抗性遗传。结果表明,油菜对草甘膦的抗性为显性性状,由1对基因控制,抗草甘膦基因在F_2和BC_1群体遵循孟德尔分离规律。因此,应用杂交、回交育种方法将CP_4+gox双价基因转育到油菜推广品种中是可行的。

IGBT器件栅极漏电问题研究

IGBT器件具有输入阻抗高和导通压降低的优点,在大功率电力电子领域具有广泛的应用,但IGBT器件的栅极漏电问题严重影响产品的成品率和可靠性,是产品制造工艺控制的关键。栅极漏电问题主要由栅氧化层质量、多晶硅栅形貌以及栅极与发射极之间的隔离等问题所致,通常造成栅极短路漏电的原因比较容易发现,但栅极轻微漏电的原因比较复杂,需要通过科学的分析,才能找到问题的根源。通过对典型栅极漏电(栅极间呈现二极管特性)问题的调查,总结了解决问题的思路和方法,对IGBT芯片制造者或器件应用者有一定的参考作用。

超灵敏检测血清中葡萄糖的中空介孔普鲁士蓝@葡萄糖氧化酶电化学发光传感器

葡萄糖作为主要供能物质在生物体新陈代谢过程中发挥重要作用.目前已报道的葡萄糖分析方法主要是基于生物酶或纳米模拟酶催化葡萄糖联合光、电、色等检测技术构建的,如比色法、分光光度法、电化学法、高效液相色谱法等,然而仪器操作、生物亲和性、灵敏度等不足限制其在实际血糖检测中的应用.采用经典金属有机框架材料中空介孔普鲁士蓝(Hollow mesoporous Prussian Blue, HMPB)负载葡萄糖氧化酶(GOx)制备HMPB@GOx复合纳米材料,结合鲁米诺电化学发光(Electrochemiluminescence, ECL)性能构建一种超灵敏葡萄糖ECL体系.测试结果表明,立方结构的HMPB比表面积大、氧化还原活性高,同时作为酶载体及HO模拟酶级联放大ECL信号,在其他电活性物质如抗坏血酸(AA),多巴胺(DA)和尿酸(UA)共存时仍对葡萄糖具有良好的选择性.基于上述优良性能,该ECL传感体系对葡萄糖的检测范围为3.3×10~167.0μmol/L,检测限低至2.1×10μmol/L,成功检测实际血清中的葡萄糖含量.因此,该HMPB@GOx电化学发光传感体系具有成为糖尿病患者血清中葡萄糖便携检测器件的潜力.

响应面方法在可靠性灵敏度计算中的应用

简要叙述了应用响应面方法获取极限状态函数(该极限状态函数具有二次多项式响应面函数的特点)的过程.提出了利用这种极限状态函数进行可靠性灵敏度分析的方法,举例证明该方法可用于极限状态函数未知的情况,并推导了相关计算公式.用响应面方法获取的极限状态函数天然地包括一、二次项和交叉项的信息,不仅使可靠性灵敏度的计算简单易行,而且使计算精度大大提高.最后以热疲劳裂纹为例,计算了其不发生失稳扩展的可靠度及各个随机变量的可靠性灵敏度.

葡萄糖氧化酶多层膜修饰电极的电化学性能的研究

利用层接层自组装法,制备出有序且稳定的葡萄糖氧化酶的多层膜.应用电化学方法和XRD方法研究了膜修饰电极的电化学传感性能.结果表明:该传感器具有较好的重现性和稳定性,传感器对葡萄糖的响应非常迅速;每次加入葡萄糖后,电极的电流响应会随之出现跳跃性增大,酶电极达到96%,稳态电流响应的时间仅为3 s;灵敏度可以通过合理地调解多层膜的厚度来控制.

戊聚糖酶与氧化酶对面团流变性质影响的研究

研究了戊聚糖酶(Pentopan)、葡萄糖氧化酶(GOX)以及脂肪氧合酶(活性大豆粉,SF)对普通粉和专用粉面团流变性质的影响。由粉质曲线可知,不同品种的面粉,酶对面团吸水量的影响不同,对普通粉影响最大的是GOX;对专用粉影响最大的是Pentopan。由动态流变学试验知,Pentopan降低了面团中的弹性成分,GOX使弹性成分增加;GOX对普通粉的影响较大,SF则对专用粉的影响较大。

戊聚糖酶与氧化酶对面包品质影响的研究

研究了戊聚糖酶(Pentopan)、葡萄糖氧化酶(GOX)以及脂肪氧合酶(活性大豆粉,SF)对普通粉和专用粉面包品质的影响,这些酶均可使面包品质有明显改善。GOX与Pentopan对普通粉面包的改良效果最好;SF与Pentopan则对专用粉的改良效果最好。面包贮存试验显示,戊聚糖酶与氧化酶的协同作用对延缓面包老化的效果最好。

基于谷胱甘肽-壳聚糖自组装的葡萄糖生物传感器

采用壳聚糖-谷胱甘肽复合膜固定葡萄糖氧化酶构建电流型葡萄糖生物传感器。通过循环伏安法对酶膜状态进行表征,实验结果表明,壳聚糖-谷胱甘肽复合膜可以辅助电子传递,提高电极的电流响应。选用正交表L9(34)设计实验方案,分析最佳实验条件。在优化条件下,该传感器对葡萄糖溶液浓度有良好的线性关系,线性范围为1～18 mmol/L,检出限为1.3 mmol/L。实验表明,此传感器具有响应快、稳定性及选择性良好的特点。适用于临床尿样中葡萄糖的测定。