阿斯匹林对高血压患者血小板糖蛋白CD62p，GPⅡb／Ⅲa的影响

目的评价血小板糖蛋白（platelet glycoprotein，GP）GPⅡb／Ⅲa，CD62P在不同类型高血压中的表达情况，探讨长期小剂量口服阿斯匹林对CD62p，GPⅡb／Ⅲa的影响。方法采用流式细胞术（FCM）和单克隆抗体标记法，检测62例原发性高血压患者、23例长期口服小剂量阿斯匹林的健康体检者，27例健康体检者扣15例肾性高血压患者的血小板表面分子CD62P和膜糖蛋白GPⅡb／Ⅲa水平，观察药物对其的作用。结果原发性高血压Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组、肾性高血压组在用药前及健康未服药组CD62P，GPⅡb／Ⅲa的表达比率为（73％±8．5％，84％±4．3％），（76％±9．4％，86％±6．7％），（92％±5．1％，91％±7．0％），（81％±9．3％，89％±10．2％），（67％±7．6％，69％±9．3％）；原发性高血压Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组、肾性高血压组用药后及健康服药组两指标的表达比率分别为（55％±8．5％，64％±6．3％），（56％±7．4％，61％±8．3％），（69％±8．1％，65％±10．0％），（59％±10．1％，66％±8．9％），（54％±7．6％，63±7．2％）。结论高血压与血小板糖蛋白CD62P，GPⅡb／Ⅲa的表达存在一定的联系，阿司匹林可降低血小板CD62p，GPⅡb／Ⅲa表达水平，但这种作用在原发性高血压与继发性高血压中差别不明显。

观察增血汤联合生血散中药方对特发性血小板减少性紫癜患者GPⅡb/Ⅲa及vWF的影响

目的:观察增血汤联合生血散中药方对特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者GPⅡb/Ⅲa及vWF的影响。方法:用增血汤联合生血散中药方治疗26例ITP患者,检测治疗前后血小板GPⅡb/Ⅲa阳性表达率、vWF活性的变化,并与健康人进行对照。结果:治疗前ITP患者的GPⅡb/Ⅲa显著低于对照组,P<0.01;治疗前ITP患者vWF活性显著高于对照组,P<0.01;治疗前后ITP患者的GPⅡb/Ⅲa比较有显著差异,P<0.01;治疗前后ITP患者的vWF活性无显著差异,P>0.05。结论:增血汤联合生血散对特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者GPⅡb/Ⅲa有影响,对vWF活性无明显影响。该中药方治疗ITP患者可能有效。

犀角地黄汤加味对过敏性紫癜(血热妄行型)患者血清GPⅡb/Ⅲa表达影响临床观察

目的观察犀角地黄汤加味对过敏性紫癜(血热妄行型)患者血清血小板膜糖蛋白(glycoproteinⅡb/Ⅲa,GPⅡb/Ⅲa)表达水平的影响及与肾脏保护的相关性。方法选取90例过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)血热妄行型患者,采用随机数字表法分为治疗组45例,对照组45例。对照组予以西医常规治疗,治疗组给予犀角地黄汤加味。两组患者均于治疗前及治疗8周后检测血常规、尿常规,记录尿红细胞计数、尿白蛋白/肌酐水平、血小板(platelet,PLT)计数,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测患者血清GPⅡb/Ⅲa的表达水平。结果治疗后,治疗组总有效率(93.33%)高于对照组(73.33%),P<0.05,差异有统计学意义;两组均能改善紫癜分布、形态及颜色,治疗组优于对照组(P<0.05)。治疗组出现肾损伤3例(6.7%),对照组出现13例(28.9%),P<0.05。治疗后,治疗组尿红细胞计数、尿白蛋白/肌酐水平、PLT计数及患者血清GPⅡb/Ⅲa表达量均较对照组明显降低(P<0.05),经Pearson相关性分析,尿白蛋白/肌酐水平降低与血清GPⅡb/Ⅲa表达水平呈正相关。结论犀角地黄汤加味能有效减轻血热妄行型HSP患者临床症状及肾损伤的比例,降低尿白蛋白/肌酐水平、血小板计数及GPⅡb/Ⅲa表达量,且GPⅡb/Ⅲa表达量与尿白蛋白/肌酐水平呈正相关。

温阳活血中药复方对冠心病阳虚血瘀证大鼠血小板GPⅡb-Ⅲa的影响

目的:研究温阳活血中药复方对冠心病阴虚血瘀证大鼠血小板GPⅡb-Ⅲa的影响。方法:建立冠心病阴虚血瘀证大鼠模型;同时观察温阳活血中药复方对冠心病阴虚血瘀证大鼠血小板GPⅡb-Ⅲa的影响。结果:温阳活血中药复方治疗组与模型组比较,能够显著降低血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)分子数,与对照组比较效果尤佳且有明显的量效关系。结论:温阳活血中药复方能够降低GPⅡb/Ⅲa受体的含量,阻断"外-内"信号转导途径,减少GPⅡb/Ⅲa与Fg的结合量,达到抑制血小板聚集的作用。

重组抗人血小板GPⅡb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)_2在Beagle犬体内药动学

目的研究了重组抗人血小板GPIIb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)2经静脉单次给药后在Beagle犬中的药动学。方法按不同时间点采血,分离血浆,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定犬血浆中嵌合单抗F(ab′)2的浓度,根据非房室统计矩模型进行曲线拟合并计算药动学参数。结果Beagle犬分别静脉单次注射高、中、低(1.2,0.8,0.4mg.kg-1)后,t1/2分别为(7.35±0.65),(8.28±0.68)和(7.03±3.26)h,CLs与Vss随着剂量的减小发生增加的变化,血药浓度-时间曲线下面积AUC0-inf分别为(2453.70±371.59),(1097.64±142.11)和(362.63±169.12)μg.h.L-1,剂量之比为3:2:1,对应的AUC0-inf比值为6.8:3:1,剂量与AUC成正相关性,相关系数R2=0.9714,但是AUC0-inf的增加量大于剂量的增加量。结论在本实验的剂量范围内,剂量与AUC0-inf成正相关性,AUC0-inf的增加量大于剂量的增加量,预示在以上剂量范围内嵌合单抗F(ab′)2在Beagle犬血浆中的浓度变化可能呈非线性药动学规律;动物性别对药动学参数无显著性影响。

地塞米松联合咖啡酸片治疗ITP患者对PAIgG及GPⅡb/Ⅲa抗体的影响

目的探讨地塞米松联合咖啡酸片治疗原发性免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)对患者血小板相关抗体(platelet-associated immunoglobulin,PAIgG)及GPⅡb/Ⅲa抗体水平的影响.方法将2014年8月~2017年3月本院收治的ITP患者80例随机分为2组,观察组与对照组各40例,其中对照组患者服用地塞米松,观察组服用地塞米松及咖啡酸.对比两组治疗效果、PAIgG及GPⅡb/Ⅲa抗体水平的差异.结果两组患者治疗14 d、28 d、12 w后CR、R及NR人数比例间的差异无统计学意义;治疗前,两组出血评分、PAIgG及GPⅡb/Ⅲa抗体水平的组间差异无统计学意义(P>0.05).治疗后,两组出血评分、PAIgG及GPⅡb/Ⅲa抗体水平明显低于治疗前(P<0.05);其中,观察组出血评分[1(0~3.5)vs 2(0~5)]分、PAIgG阳性血小板百分率[(25.52±7.21)vs(36.18±8.79)]%、GPⅡb/Ⅲa抗体水平[(16.77±2.15)vs(21.49±1.58)]明显低于对照组(P均<0.05).结论地塞米松联合咖啡酸片治疗ITP患者与单独服用地塞米松组相比,疗效差异无统计学意义,但药物合用可有效改善患者出血症状,降低PAIg G及GPⅡb/Ⅲa抗体水平.

rAAV2-GPⅡb/GPⅢa载体构建和体外表达、功能实验

为了研究rAAV载体介导的血小板无力症基因治疗的可行性,构建了由CMV启动子调控的rAAV2-Ⅱb、rAAV2-Ⅲa病毒载体,并采用多种方法验证了rAAV2-Ⅱb和rAAV2-Ⅲa病毒载体在真核细胞中的表达能力,其中包括用RT-RCR方法检测BHK-21细胞感染24小时(MOI=1×105v.g/cell)后目的基因在mRNA水平的表达,用流式细胞术的方法检测不同MOI和目的基因表达之间的量效关系,采用Westernblot的方法检测BHK-21细胞感染48小时后(MOI=1×105v.g/cell)目的基因在蛋白水平的表达,用免疫荧光法检测BHK-21细胞感染48小时后(MOI=105v.g/cell)目的基因在细胞表面的表达,以及应用PAC-I结合试验验证所表达的GPⅡb/Ⅲa蛋白功能。结果表明,在MOI=1×105v.g/cell条件下,在BHK-21细胞感染24小时后即可在mRNA水平上检测到目的基因的表达,在48小时可在蛋白水平检测到目的基因的表达;在一定剂量范围内目的基因的表达量随着MOI的增加而增加,但MOI过高反而使表达量下降,目的基因表达产物活化之后能与PAC-I结合,并具有正常的生物学活性。结论:rAAV2载体能有效地介导GPⅡb、GPⅢa基因在真核细胞内表达,所表达的产物都具有正常的生物学活性,此结果为rAAV2载体在血小板无力症基因治疗中的应用打下了基础。

早期使用GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂对STEMI介入治疗的再灌注心律失常的影响

目的:通过对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)病人早期使用GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂,观察急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)时对再灌注心律失常的影响。方法:选择急性ST段抬高心肌梗死行急诊PCI病人90例,根据GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂给药时机不同,将病人分为观察组和对照组,各45例。观察组入院后立即通过静脉给予负荷量替罗非班注射液,对照组在术中由导管经冠脉途径给予负荷量替罗非班注射液。比较2组PCI术前及术后TIMI血流、术后90 min ST段回落百分比及再灌注心律失常的发生。结果:观察组替罗非班至球囊扩张时间为(55.70±16.81)min,明显少于对照组的(3.70±0.72)min(t=22.73,P<0.01)。观察组使用替罗非班总量为(11.82±2.68)mg,对照组为(10.75±2.74)mg,2组差异无统计学意义(t=1.87,P>0.05)。2组病人冠状动脉病变支数和靶血管位置差异均无统计学意义(P>0.05)。PCI术前冠脉造影显示,观察组梗死相关血管TIMI血流较对照组明显改善(P<0.01),对照组TIMI血流2、3级病人共6例,观察组TIMI血流2、3级病人15例,差异有统计学意义(P<0.05);PCI术后,观察组梗死相关血管TIMI血流3级病人43例,对照组35例,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,观察组90 min内ST段回落明显,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组总的RA发生率明显低于对照组(P<0.01),其中观察组严重心律失常发生率低于对照组(P<0.05)。结论:STEMI病人早期使用GPⅡb/Ⅲa受体拮抗能显著改善PCI术中的再灌注心律失常,明显改善心肌再灌注。

抗GPⅡb/Ⅲa和抗CD9单克隆抗体对人血小板Ca对流的影响

采用Ca^(2+)敏感光蛋白Aequorin法测定结合位点在GPⅡb/Ⅲa的单克隆抗体(Mc-Ab)Apt_4及在CD9抗原的McAb XW-1和SJ-9A_4对人血小板胞浆Ca^(2+)的影响,发现Ap-t_4和XW-1可引起载有Aequorin的血小板Ca^(2+)内流,SJ-9A_4可引起载有Aequorin的血小板Ca^(2+)内流和释放。钙通道阻滞剂异搏定可完全抑制Apt_4引起的血小板Ca^(2+)内流和聚集,部分抑制XW-1和SJ-9A_4引起的血小板胞浆Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]i)升高和聚集。ADP抑制剂CP/CPK和钙调蛋宜抑制剂EBB部分抑制3种McAb的作用,环氧酶抑制剂ASA只有轻度抑制作用。实验结果提示3种McAb引起的血小板[Ca^(2+)]i升高和活化的途径不同。

复方七芍降压片对自发性高血压大鼠GPⅡb/Ⅲa的影响

目的 :探讨复方七芍降压片降压及防治血栓性并发症的作用机制。方法 :以 10只 14周龄WKY大鼠为阴性对照 ,32只 14周龄自发性高血压大鼠 (SHR)随机分为 4组 ,分别采用尾动脉法测血压 ,采用酶联免疫吸附法测量血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)的含量。结果 :复方七芍降压片能够降低SHR血压及GPⅡb/Ⅲa。结论 :复方七芍降压片能有效地降低SHR血压和改善血液高凝状态 。

GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂-替罗非班在急性冠脉综合征中的应用与进展

血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂可以有效抑制血小板聚集。作为目前较新的抗血小板药物,GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂在作用机制、用法等方面都不同于传统的阿司匹林和氯吡格雷等药物。本文针对唯一在中国上市的GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂-替罗非班(欣维宁)略作综述。

血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂的进展与临床评价

目的:本文介绍血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂的进展与评价。方法:采用国内、外文献综述方法。结果及结论:作为抗血小板药中的一支奇葩,血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂进展十分迅速,对膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体选择性高,在治疗血栓、急性心肌梗死、急性冠脉综合征、非ST段抬高心肌梗死者方面展现了良好的治疗前景。

阵发性非瓣膜病心房颤动患者血小板P选择素、GPⅡb/Ⅲa表达及纤溶活性的研究

目的 探讨阵发性非瓣膜病心房颤动患者血小板P选择素 ,GPⅡb/Ⅲa表达及纤溶活性的变化。方法 测定 41例阵发性非瓣膜病心房颤动患者血小板P选择素 ,GPⅡb/Ⅲa表达及全套纤溶指标 ,并与 2 7例正常人对比。结果 阵发性非瓣膜病房颤患者血小板P选择素表达明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,差异有显著意义 ,且GPⅡb/Ⅲa表达亦有增高趋势 ,t -PA活性 ,血浆PIg明显下降 ,而PAL -1活性增高。

血小板膜表面GPⅡb/Ⅲa、CD62p、CD63诊断妊高征的临床价值

目的 :检测妊娠高血压综合征患者血小板活化膜表面糖蛋白GPⅡb/Ⅲa、CD6 2p和CD6 3的表达 ,探讨其在妊高征诊断中的临床价值。方法 :采用流式细胞术检测不同程度妊高征患者及正常孕妇血小板表面GPⅡb/Ⅲa、CD6 2p及CD6 3的表达 ,并比较重度妊高征患者治疗前后各项指标的变化。结果 :轻、中、重度妊高征患者血小板表面GPⅡb/Ⅲa、CD6 2p和CD6 3的表达率分别为 (14 .5± 6 .3) %、(11.8± 4 .9) %、(10 .2± 3.9) % ;(2 0 .7± 9.1) %、(15 .6± 5 .8) %、(13.7± 4 .8) % ;(5 0 .4± 2 0 .9) %、(35 .2± 13.6 ) %、(31.7± 10 .3) % ,均显著高于正常孕妇组。重度妊高征患者显著高于轻中度患者 ,治疗后GPⅡb/Ⅲa、CD6 2p和CD6 3的表达率均显著低于治疗前。结论 :妊高征患者血小板明显活化 ,随病情加重血小板活化增强。

噬菌体表面展示技术筛选抗血小板GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体

目的 用噬菌体表面展示技术 ,直接从抗血小板表面蛋白全套单链抗体噬菌体展示文库中筛选能与糖蛋白 (GP)Ⅱb/Ⅲa复合物高亲合力结合的单链抗体克隆 ,为开发有自主知识产权的抗栓药物奠定基础。方法 从活化血小板免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA ,反转录成cDNA后 ,用抗体可变区混合引物扩增全套轻、重链可变区基因 ,经重叠延伸反应 ,装配成单链抗体 (ScFv)基因 ,将其克隆到噬菌体载体pHEN1中 ,构建单链抗体噬菌体抗体库。对抗体库进行亲合筛选后 ,ELISA法鉴定抗GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体。结果 经过 4轮“吸附———竞争性洗脱———扩增”的富集过程 ,phage -ELISA得到一个ELISA活性较高的能与GPⅡb/Ⅲa结合的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。结论 成功构建了全套抗血小板表面蛋白单链抗体噬菌体展示文库 。

血小板GPⅡb/Ⅲa拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对GPIIb/IIIa活化的影响

目的探讨GPⅡb/Ⅲa拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对ADP诱导的血小板GPⅡb/Ⅲa活化的影响。方法 GP II b/11I a特异性抗体PAC-1标记活化GP II b/11I a,流式细胞仪检测静息及ADP(5μmol/L)诱导的血小板PAC-1表达率。结果静息状态下的血小板PAC-1表达率为(0.80±0.85)%;在ADP(5μmol/L)激动下,PAC-1表达率为(77.27±9.47)%;RGDS以浓度依赖性的方式抑制PAC-1表达率,IC50值为206μmol/L;Nifedipine能以浓度依赖性的方式抑制PAC-1表达率,IC50值为178μmol/L;RGDS联合Nifedipine对PAC-1表达的联合抑制率为(60.15±16.35)%,二者的交互效应差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GPIIb/IIIa受体拮抗剂RGDS和Ca2+拮抗剂Nifedipine均抑制ADP诱导的血小板GPIIb/IIIa活化,其抑制作用呈浓度依赖性,随拮抗剂浓度增加抑制作用增强;两者对血小板GPIIb/IIIa活化的抑制存在协同作用。

GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂的研究进展

目的综述近年来GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂的研究进展,以期为相关的研究者发现及人工合成GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂提供一些思路。方法查阅近年来国内外相关文献,进行分析总结。结果与结论 GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂作为一类新型的抗血小板聚集剂,具有非常广阔的应用前景。

氟比洛芬酯用于全髋置换术术后镇痛及对TXA2、GPⅡb/Ⅲa表达的影响

目的：通过应用氟比洛芬酯,观察其对全髋置换患者的术后镇痛效果及对TXA2、GPⅡb/Ⅲa表达的影响。方法：选择择期进行全髋关节置换手术的患者40例,随机分为氟比洛芬酯组（A组）和地佐辛组（B组）,每组各20例。两组患者全麻诱导相同,患者入室开放静脉通道,监测血压（BP）、ECG、心率（HR）、脉搏血氧饱和度（SPO2）,分别于手术结束前30min缓慢静注氟比洛芬酯注射液（A组）50mg和地佐辛注射液（B组）5mg。术毕即刻连接PCA泵.分别于四个时间点麻醉诱导前（T1）、手术结束时（T2）、手术结束后12h（T3）24h（T4）采集外周血3m L,应用酶联免疫吸附测定（ELISA）双抗体夹心法进行测定,选取血清。测定各时间点GPⅡb/Ⅲa、和TXA2的含量,并采用疼痛视觉模拟评分（VAS）和镇静评分（Ramsay）对两种药物术后镇痛效果进行对比。采有10cm的视觉模拟量表（VAS）进行疼痛评价,0为无痛,1~3为轻度疼痛,4~6为中度疼痛,7~10为重度疼痛,10为强烈疼痛。结果：两组患者疼痛评分均无统计学意义。A组（氟比洛芬酯组）与B组（地佐辛组）TXA2、GPⅡb/Ⅲa的表达在T3和T4时刻B组的表达显著高于A组。结论：（1）氟比洛芬酯可以有效缓解全髋置换术患者术后疼痛。（2）氟比洛芬酯可以抑制血小板活化、黏附和聚集,减少深静脉血栓的形成。

从scFv噬菌体抗体库中筛选抗GPⅡb／Ⅲa单链抗体

目的从scFv噬菌体库中获取人源化特异性Anti—GPⅡb／Ⅲa单克隆scFv抗体。方法对Tomlinson I＋JscFv文库进行3次淘洗，富集特异性的抗GPⅡb／Ⅲa抗体。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和双脱氧终止法基因测序及同源性对比，检测出人源化的抗GPⅡb／Ⅲa单克隆抗体。结果在3次淘洗后，得到了抗GPⅡb／Ⅲa单克隆噬菌体抗体，阳性克隆的获取率在95．6％以上；ELISA和基因测序筛选出25种不同的全长抗GPⅡb／Ⅲa噬菌体抗体，这些基因序列与人免疫球蛋白可变区基因同源性达到89％以上；分泌性抗体ELISA检测提示这些抗体顺利表达了蛋白并特异性结合GPⅡb／Ⅲa，其中15种scFv对GPIIb／ma有更强的阳性反应。结论人源化的特异性抗-GPⅡb／Ⅲa scFv能通过噬菌体展示技术快速有效地获得。

子痫前期孕妇孕中期GPⅡb/Ⅲa受体的表达及其对母婴结局的影响

目的探讨子痫前期(PE)孕中期孕妇血清GPⅡb/Ⅲa受体的表达水平变化及对母婴预后的影响。方法选取2016年9月至2018年9月于本院住院分娩的PE患者70例为PE组,对照组为50例正常妊娠妇女。PE组以GPⅡb/Ⅲa受体表达水平中位数为界,分为高GPⅡb/Ⅲa组和低GPⅡb/Ⅲa组各35例。采用流式细胞仪检测血清GPⅡb/Ⅲa受体表达水平。记录和比较各组孕妇的分娩方式、母婴结局。结果PE组GPⅡb/Ⅲa表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与低GPⅡb/Ⅲa组、高GPⅡb/Ⅲa组相比,对照组自然分娩率高,剖宫产率低,差异均有统计学意义(P<0.05);与低GPⅡb/Ⅲa组、高GPⅡb/Ⅲa组相比,对照组子痫、凝血异常、心功能不全、肾功能损害等不良妊娠发生率均较低,差异均有统计学意义(P<0.05);低GPⅡb/Ⅲa组、高GPⅡb/Ⅲa组的小早产儿(<34周)、小于胎龄儿发生率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GPⅡb/Ⅲa受体表达水平与母婴不良结局发生率间有关,对PE患者母婴结局的预测具有重要参考价值。