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HIV-1 CRF01_AE毒株gp41蛋白生物信息学预测 被引量:2
1
作者 邵继平 谢学立 +2 位作者 刘莹 郭燕子 符健 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期234-238,共5页
目的:对HIV-1 gp41蛋白的膜外区和跨膜区进行预测,并分析该蛋白的结构和功能。方法:从NCBI GenBank数据库获取gp41基因及其蛋白编码序列,利用ExPASy ProtParam tool、ProtScale、SignalP 4.0 Server、TMHMM Server v.2.0、SWISSMODEL、P... 目的:对HIV-1 gp41蛋白的膜外区和跨膜区进行预测,并分析该蛋白的结构和功能。方法:从NCBI GenBank数据库获取gp41基因及其蛋白编码序列,利用ExPASy ProtParam tool、ProtScale、SignalP 4.0 Server、TMHMM Server v.2.0、SWISSMODEL、PredictProtein等工具对gp41蛋白的生物学特性进行预测。结果:HIV-1 gp41基因ORF长度为666 bp,编码222个氨基酸,蛋白分子式为C1164H1815N317O325S6,等电点(isoelectric point,pI)=8.60,属于稳定、疏水性蛋白。该蛋白具有跨膜区,信号肽切割位点位于第20和21位氨基酸处。其二级结构由无规则卷曲、β折叠和α螺旋组成,属于全螺旋型蛋白。而且该蛋白具有N-端信号肽,能引导蛋白分泌到胞外。此外gp41蛋白具有4个蛋白质-蛋白质和1个蛋白质-核酸结合位点,这些位点能调控gp41蛋白的多种生物学功能。结论:对gp41蛋白的结构和功能进行了预测,为深入研究其参与疾病发生发展的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 HIV-1 包膜糖蛋白gp41 CRF01_AE毒株 生物信息学预测
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抑制剂ADS-J1和ADS-J2与艾滋病病毒蛋白gp41的结合机理(英文)
2
作者 宋坤忠 孙岳明 《Journal of Southeast University(English Edition)》 EI CAS 2011年第3期280-283,共4页
为分析和解释2个小分子抑制剂ADS-J1和ADS-J2与艾滋病病毒蛋白gp41的抑制机理,通过采用理论计算的方式把抑制剂和gp41蛋白疏水性空穴对接,得到了可能的结合方式,并通过采用分子动力学和MM/PBSA相结合的方法,确定蛋白质和抑制剂的具体结... 为分析和解释2个小分子抑制剂ADS-J1和ADS-J2与艾滋病病毒蛋白gp41的抑制机理,通过采用理论计算的方式把抑制剂和gp41蛋白疏水性空穴对接,得到了可能的结合方式,并通过采用分子动力学和MM/PBSA相结合的方法,确定蛋白质和抑制剂的具体结合方式和结合自由能,并且获得了抑制剂和蛋白的精确结合构型和相互作用力,明确了抑制剂和蛋白质之间的抑制机理.理论研究证实了相关实验的推测,并且为以后设计新型的gp41小分子抑制剂提供了良好的基础. 展开更多
关键词 艾滋病病毒进入细胞抑制剂 结合模式 gp41蛋白 结合自由能
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HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达及抗原性研究 被引量:2
3
作者 袁作为 帅光泽 +2 位作者 张君 胡接力 郑建 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第21期2281-2285,共5页
目的构建HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达载体,诱导表达HIV抗原,为HIV快速诊断和蛋白疫苗研究提供材料基础。方法用PCR方法对HIV-1包膜蛋白gp41和HIV-2包膜蛋白gp36基因序列进行全长、截短扩增,分别或以融合表达方式克隆入原核表达载体pQ... 目的构建HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达载体,诱导表达HIV抗原,为HIV快速诊断和蛋白疫苗研究提供材料基础。方法用PCR方法对HIV-1包膜蛋白gp41和HIV-2包膜蛋白gp36基因序列进行全长、截短扩增,分别或以融合表达方式克隆入原核表达载体pQE30、pET32a(+)及pGST-MOLUC,重组质粒经异丙基硫代半乳糖苷(isopro-pyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,并经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和纯化HIV跨膜糖蛋白抗原,对获得的纯化抗原进行Western blot检测,利用HIV抗原制备ELISA检测试剂盒,并分析HIV临床样本。结果成功构建了HIV包膜蛋白的原核表达载体,利用亲和层析纯化得到了纯度较高的HIV包膜蛋白;Western blot分析结果证实表达纯化的HIV跨膜蛋白gp41(aa.538~718)、gp36(aa.533~764)以及gp41-gp36均能和HIV阳性血清反应;ELISA试剂盒检测临床样本显示,特异性达95%以上,灵敏度达100%。结论获得了有生物学活性的HIV截短包膜蛋白,并可用于HIV快速检测试剂盒的研发。 展开更多
关键词 HIV-1包膜蛋白gp41 HIV-2包膜蛋白gp36 重组 抗原性
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基于跨膜蛋白gp41为作用靶点的抗HIV-1药物研究进展 被引量:4
4
作者 康银花 顾觉奋 《抗感染药学》 2018年第7期1105-1111,共7页
高效抗逆转录病毒治疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)是当今抗人免疫缺陷病毒(HIV)感染的主要方法,随着HAART的广泛应用,诸如药物交互作用、不良反应和耐药毒株等问题也相继出现,因此人们致力于其他抗HIV药物的研究。g... 高效抗逆转录病毒治疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)是当今抗人免疫缺陷病毒(HIV)感染的主要方法,随着HAART的广泛应用,诸如药物交互作用、不良反应和耐药毒株等问题也相继出现,因此人们致力于其他抗HIV药物的研究。gp41是HIV-1病毒表面的一种包膜糖蛋白,介导了病毒膜和宿主细胞膜间的融合,在HIV-1的侵染过程中起了关键作用。基于gp41为相关靶点的HIV-1融合抑制剂是近年来抗HIV-1药物研究的热点。概述gp41的结构及融膜机制,并对gp41为作用靶点的抗HIV-1药物的研究文献,及其研究进展做了分析。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 艾滋病 跨膜蛋白gp41 融合抑制剂
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HIV-1跨膜蛋白gp41与N-取代吡咯衍生物的结合模式研究(英文) 被引量:3
5
作者 丛肖静 谭建军 +2 位作者 刘明 陈慰祖 王存新 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第8期904-915,共12页
采用分子对接,分子动力学(MD)模拟和分子力学/泊松-波尔兹曼溶剂可有面积方法与分子力学/广义伯恩溶剂可及面积方法(MM-PBSA/MM-GBSA),预测两种N-取代吡咯衍生物与HIV-1跨膜蛋白gp41疏水口袋的结合模式与作用机理.分子对接采用多种受体... 采用分子对接,分子动力学(MD)模拟和分子力学/泊松-波尔兹曼溶剂可有面积方法与分子力学/广义伯恩溶剂可及面积方法(MM-PBSA/MM-GBSA),预测两种N-取代吡咯衍生物与HIV-1跨膜蛋白gp41疏水口袋的结合模式与作用机理.分子对接采用多种受体构象,并从结果中选取几种可能的结合模式进行MD模拟,然后通过MM-PBSA计算结合能的方法识别最优的结合模式.MM-PBSA计算结果表明,范德华相互作用是结合的主要驱动力,而极性相互作用决定了配体在结合过程中的取向.进一步的结合能分解显示,配体的羧基与gp41残基Arg579的静电相互作用对结合有重要贡献.上述工作为进一步优化N-取代吡咯衍生物类的HIV-1融合抑制剂建立了良好的理论基础。 展开更多
关键词 HIV-1融合抑制剂 跨膜蛋白gp41 分子对接 分子动力学模拟 MM-PBSA/MM-GBSA
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HIV-1包膜蛋白gp41优势抗原的构建及可溶性表达 被引量:1
6
作者 杜刚 江蒙蒙 +2 位作者 尹林 王宏萍 周晓明 《生物技术通讯》 CAS 2011年第6期764-768,共5页
目的:筛选1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株中包膜蛋白gp41的优势抗原片段,构建具有区域流行代表性的HIV-1 gp41重组抗原,为改进现有HIV-1初筛试剂盒中使用的同类抗原奠定基础。方法:利用免疫斑点杂交和生物信息学方法,从收集自重庆... 目的:筛选1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株中包膜蛋白gp41的优势抗原片段,构建具有区域流行代表性的HIV-1 gp41重组抗原,为改进现有HIV-1初筛试剂盒中使用的同类抗原奠定基础。方法:利用免疫斑点杂交和生物信息学方法,从收集自重庆、广州、上海的区域代表性150份HIV-1感染者血清标本中筛选gp41抗原性强的候选样本,利用RT-PCR及巢式PCR方法扩增包含重要抗原表位决定蔟的gp41基因片段,与原核表达载体pQE30连接,转化大肠杆菌M15构建gp41重组抗原表达菌株,表达后经亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western印迹鉴定。结果:兔源HRP标记的gp41多抗能识别标本中gp41抗原性差异,得到候选样本,扩增包含gp41主要抗原表位片段;构建了包含gp41抗原表达簇的重组原核表达质粒,表达、纯化后经His标签抗体Western印迹鉴定为阳性。结论:高纯度的重组优势gp41抗原的构建和鉴定,为进一步改进现有HIV初筛诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 1型人免疫缺陷病毒 包膜蛋白gp41 抗原表位 斑点杂交 亲和层析
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HIV-1 gp41蛋白的主要特性及B/T细胞表位预测 被引量:1
7
作者 邵继平 符健 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第3期270-274,281,共6页
目的采用生物信息学方法分析HIV-1 gp41跨膜糖蛋白的基因序列及其编码蛋白的结构特征,并预测可能的B/T细胞表位,为艾滋病疫苗及多肽药物开发提供理论依据。方法从NCBI GenBank数据库获取gp41基因及其编码蛋白序列,综合运用ExPASy ProtPa... 目的采用生物信息学方法分析HIV-1 gp41跨膜糖蛋白的基因序列及其编码蛋白的结构特征,并预测可能的B/T细胞表位,为艾滋病疫苗及多肽药物开发提供理论依据。方法从NCBI GenBank数据库获取gp41基因及其编码蛋白序列,综合运用ExPASy ProtParam tool、SOPMA、TMpred、Motifscan、ABCpred、Bepipred、CTLPred和IEDB等在线软件分别预测其低级结构、跨膜区、翻译后修饰位点、B/T细胞表位。结果 HIV-1 gp41基因ORF长度为666 bp,编码222个氨基酸。该gp41蛋白共3 627个原子,相对分子质量为25.642 5×10~3,分子式为C_(1164)H_(1815)N_(317)O_(325)S_6。理论等电点为8.60,是稳定的疏水性蛋白。gp41蛋白具有无规则卷曲55个,占24.77%;13个翻译后修饰位点,存在N-糖基化、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化、N-酰胺化、蛋白激酶C磷酸化等修饰。gp41蛋白N-末端存在跨膜螺旋区,分别位于第2-20,80-97和171-192位氨基酸处,这3个螺旋区的总评分为4 614。预测gp41蛋白含有23个B细胞抗原表位,优势表位依次是87-102、93-108、113-128、78-93、151-166等;含有NKTYKEIWD、VERYLRDQR和EPDRPERIE 3个优势CTL细胞表位,分别位于第103-111、70-78、213-221位氨基酸处。结论预测gp41蛋白的B/T细胞表位进行预测,可为艾滋病疫苗及多肽药物的开发提供了理论依据。 展开更多
关键词 HIV-1 包膜糖蛋白gp41 CRF07_BC毒株 B/T表位预测 生物信息学
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HIV gp41基因分段低温诱导表达 被引量:1
8
作者 袁玉华 毕昌昊 +3 位作者 李菊 王学谦 耿运琪 陈启民 《中国病毒学》 CAS CSCD 2004年第2期179-181,共3页
Clone N3 and C from Human immunodeficiency virus(HIV) gp41 gene were expressed using the pET expression system. When induced by IPTG at 37℃, both two clones did not express in E.coli BL21(DE)3. Howerver, when induced... Clone N3 and C from Human immunodeficiency virus(HIV) gp41 gene were expressed using the pET expression system. When induced by IPTG at 37℃, both two clones did not express in E.coli BL21(DE)3. Howerver, when induced at 16℃, the two clones were both overexpressed, and the amount of the product was about 20% of the total bacteria protein. In Western blotting test, the protein product could react with HIV-positive serum. After IPTG induction, E. coli cells had much higher death rate at 37℃ than at 16℃; [3H]uridine release assay also showed that after IPTG induction, E. coli had a higher release at 37℃. The results suggested that overexpression of the two proteins was due to their decreased toxicity at lower temperature. 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 HIV gp41跨膜蛋白 基因 低温诱导 表达 毒性
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基于中国HIV-1 CRF01_AE重组亚型gp41 NHR结构域亚单位疫苗的研究 被引量:2
9
作者 邵继平 姜世勃 刘叔文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1250-1253,1257,共5页
目的:构建基于中国HIV-1 CRF01_AE重组亚型包膜糖蛋白gp41 NHR结构域N51的亚单位疫苗,并进行免疫原性研究。方法:设计4条引物,运用重叠延伸PCR方法扩增出N51Fd基因,将其插入真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc2,构建重组质粒pFUSE/N51Fd并进行... 目的:构建基于中国HIV-1 CRF01_AE重组亚型包膜糖蛋白gp41 NHR结构域N51的亚单位疫苗,并进行免疫原性研究。方法:设计4条引物,运用重叠延伸PCR方法扩增出N51Fd基因,将其插入真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc2,构建重组质粒pFUSE/N51Fd并进行序列测定。Western blot法检测N51FdFc-AE重组蛋白的表达。用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后,ELISA法检测小鼠的抗体反应。结果:成功构建了pFUSE/N51Fd重组质粒,N51FdFc-AE重组蛋白在真核体系获得了高效表达,Western blot结果显示在相对分子质量(Mr)35 000处有目的蛋白条带。小鼠抗血清能特异性识别源于gp41 NHR的抗原,效价高达1∶102 400,平均效价为1∶51 200。结论:改造后的亚单位疫苗能有效激活机体的免疫响应,可用于HIV候选疫苗的研发。 展开更多
关键词 HIV-1 CRF01_AE病毒株 包膜糖蛋白gp41 NHR结构域 亚单位疫苗
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HIV-1 SF_2株env基因(gp41)的克隆构建及其原核表达 被引量:1
10
作者 董梅 鲁晓青 +1 位作者 陈向伟 王斌 《山西医科大学学报》 CAS 2001年第6期481-483,共3页
目的 克隆并在大肠杆菌中表达HIVgp4 1。 方法 应用PCR技术 ,纯化HIV 1SF2 株外膜蛋白env基因 (gp4 1) ,并重组入原核高效表达载体 pBV2 2 0 ,在大肠杆菌HB10 1中进行表达。 结果 SDS PAGE电泳结果表明 ,在 4 4 0 0 0处有一条蛋白表... 目的 克隆并在大肠杆菌中表达HIVgp4 1。 方法 应用PCR技术 ,纯化HIV 1SF2 株外膜蛋白env基因 (gp4 1) ,并重组入原核高效表达载体 pBV2 2 0 ,在大肠杆菌HB10 1中进行表达。 结果 SDS PAGE电泳结果表明 ,在 4 4 0 0 0处有一条蛋白表达带。Westernblot证明 ,4 4 0 0 0蛋白带可与HIV 1阳性血清发生特异性反应。结论 该重组表达 gp4 1的融合蛋白 ,可为HIV 1gp4 1。 展开更多
关键词 HIV-1SF2株 HIV包膜蛋白gp41 PBV220 原核表达 基因 克隆 大肠杆菌
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抗HIV-1 gp41单克隆抗体的制备及意义
11
作者 邓郁青 张坤娟 +4 位作者 王从印 张征峥 宋小天 张红中 王润田 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第19期48-49,共2页
目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体(mAb),用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵(SAS)... 目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体(mAb),用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵(SAS)纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测gp41蛋白的最佳配伍单抗,分别包被ELISA板及作为酶标mAb,建立双mAb夹心ELISA法。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了12株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选出2株mAb:7D4和9G2-HRP建立了双mAb夹心ELISA法,检测HIV-1 gp41抗原的灵敏度是1μg/L。结论获得12株效价高的抗HIV-1 gp41的mAb,建立了特异性强、灵敏度较高的检测HIV-1 gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒-1 HIV包膜蛋白gp41 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
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HIV-1 GP41第二优势表位簇在大肠杆菌中的高效表达 被引量:2
12
作者 李文利 钱冬萌 王斌 《青岛大学医学院学报》 CAS 2003年第1期7-9,12,共4页
①目的 构建HIV 1SF2株跨膜蛋白GP4 1第二优势表位簇基因的原核高效表达克隆 ,探讨提高原核表达的途径。②方法 根据密码子的兼并性 ,利用PCR 定点突变技术扩增、改造目的基因片段 ,将其与原核表达载体 pGEX4T 2经EcoRⅠ和SalⅠ双酶... ①目的 构建HIV 1SF2株跨膜蛋白GP4 1第二优势表位簇基因的原核高效表达克隆 ,探讨提高原核表达的途径。②方法 根据密码子的兼并性 ,利用PCR 定点突变技术扩增、改造目的基因片段 ,将其与原核表达载体 pGEX4T 2经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切、连接 ,重组质粒pGEX4T 2 /SE转化表达宿主菌DH5α,经IPTG诱导表达出目的融合蛋白 ,经SDS PAGE与Western Blot鉴定。③结果 获得了高效表达HIV 1GP4 1第二优势表位谷胱甘肽S 转移酶融合蛋白的重组菌 ;Western Blot鉴定表明 ,重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。④结论在原核表达体系中可以高效表达HIV 1GP4 展开更多
关键词 HIV包膜蛋白gp41 基因表达 免疫优势表位 病毒融合蛋白质类
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HIV-1流行株去糖基化修饰gp41突变体的构建及其表达和纯化
13
作者 邵继平 符健 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期579-583,共5页
目的:构建HIV-1ⅢB标准株、中国大陆地区主要流行株CRF-BC和海南省流行株CRF-AE野生型和突变型gp41表达载体,获得gp41重组蛋白。方法:利用基因定点突变的方法,将HIV-1ⅢB、CRF-BC和CRF-AE流行株野生型gp41基因中特定的N611Q糖基化位点... 目的:构建HIV-1ⅢB标准株、中国大陆地区主要流行株CRF-BC和海南省流行株CRF-AE野生型和突变型gp41表达载体,获得gp41重组蛋白。方法:利用基因定点突变的方法,将HIV-1ⅢB、CRF-BC和CRF-AE流行株野生型gp41基因中特定的N611Q糖基化位点天冬酰胺Asn突变为谷氨酰胺Gln,使该位点去糖基化。利用基因工程技术构建野生型pc DNA3. 1-gp41和突变型pc DNA3. 1-Mgp41表达载体。取测序正确的重组质粒转染293 T细胞,重组蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后采用免疫杂交方法进行分析。结果:测序结果显示野生型gp41的N611糖基化位点均由天冬酰胺(Asn)的编码基因(AAU)突变为谷氨酰胺(Gln)的编码基因(GAA),成功构建了野生型和突变型gp41表达载体。琼脂糖凝胶电泳分析显示野生型和突变型HIV-1 gp41基因大小约为700 bp,Western blot免疫杂交结果显示在26 k D处出现目的条带,与预期一致。结论:成功构建了HIV-1流行株去糖基化修饰gp41突变体,为研究去糖基化修饰gp41蛋白与疾病发生发展的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 HIV-1 病毒 包膜糖蛋白gp41 去糖基化突变体 表达和纯化
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美国科学家成功近距离观察艾滋病毒表面蛋白质
14
《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2006年第7期16-16,共1页
美国科学家对覆盖在艾滋病毒表面的钉子形蛋白质进行了近距离的三维观察,发现它的“顶头”由3个gp120蛋白组成,“钉身”由3个gp41蛋白组成。
关键词 美国科学家 病毒表面 蛋白 近距离 艾滋 gp41蛋白 gp120 三维观 组成
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重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体纯化条件的优化 被引量:2
15
作者 孙静 傅晶晶 +4 位作者 霍烛 陈佩 胡云章 刘勇 郝彦玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期395-398,共4页
目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果... 目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果以50mmol/LTris buffer、2mol/L,pH11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的蛋白复性得率大于40%。经纯化后,目的蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性。结论优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据。 展开更多
关键词 HIV-1 跨膜蛋白gp41 包涵体 纯化
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HIV-1型gp41抗原蛋白在大肠杆菌无细胞体系中的表达和免疫反应性检测 被引量:2
16
作者 来力 杨修亮 +3 位作者 盛嘉元 黄磊 蔡谨 徐志南 《药物生物技术》 CAS 2016年第1期7-11,共5页
HIV-1型gp41抗原蛋白在HIV初筛诊断中有重要应用。该研究合成了gp41全长基因序列,将其与p IVEX2.4c酶切连接构建表达载体,在大肠杆菌无细胞体系中实现了目标蛋白的全长可溶表达。考察了添加不同浓度非离子型去污剂Brij78对蛋白可溶性的... HIV-1型gp41抗原蛋白在HIV初筛诊断中有重要应用。该研究合成了gp41全长基因序列,将其与p IVEX2.4c酶切连接构建表达载体,在大肠杆菌无细胞体系中实现了目标蛋白的全长可溶表达。考察了添加不同浓度非离子型去污剂Brij78对蛋白可溶性的影响,在0.2%Brij78条件下,可溶性gp41重组蛋白的表达水平达到650μg/m L。Ni2+亲和层析纯化目标蛋白,纯度达到95.6%;超滤浓缩后,蛋白浓度为0.9 mg/m L,总回收率为70.8%。免疫反应性检测结果显示该gp41重组抗原制备的乳胶HIV抗体诊断试纸能与不同滴度的HIV-1型阳性标本反应,在检测线位置出现红色条带,而与HIV-1型阴性标本无反应。该研究制备了具有完整氨基酸序列的HIV-1型gp41重组抗原,为进一步提高HIV抗体诊断试剂的质量打下了基础。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 跨膜蛋白gp41 无细胞体系 去污剂 亲和层析 乳胶免疫层析 试纸 免疫反应性
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HIV-1 p24和gp41融合基因表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化 被引量:2
17
作者 蒋卫民 卢洪洲 +4 位作者 潘孝彰 康来仪 尹春煜 胡越凯 翁心华 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期170-173,共4页
目的用基因重组技术将HIV-1 p24基因以及gp41基因具有抗原线性中和表位的部分重组连接,构建重组质粒,并在大肠埃希菌中高效表达融合蛋白。方法设计带有酶切位点的引物,分别PCR扩增p24和gp41两个基因,将它们分别连接到pMD18-T载体中,测... 目的用基因重组技术将HIV-1 p24基因以及gp41基因具有抗原线性中和表位的部分重组连接,构建重组质粒,并在大肠埃希菌中高效表达融合蛋白。方法设计带有酶切位点的引物,分别PCR扩增p24和gp41两个基因,将它们分别连接到pMD18-T载体中,测序验证后,挑选出含有目的基因的正确克隆。将p24片段酶切后连接到gp41基因所在的pMD18-T载体中,再将连接后的两个基因酶切,重新连接到pET21a表达载体中。将表达载体转染大肠埃希菌诱导表达,经Western-blot验证表达正确。结果融合蛋白p24-gp41在大肠埃希菌中高效表达。结论融合蛋白p24-gp41可以在pET21a表达载体中高效表达。 展开更多
关键词 HIV核心蛋白质p24 HIV包膜蛋白gp41 基因表达 重组融合蛋白质类 基因表达载体 gp41基因 p24基因 HIV-1 融合蛋白 WESTERN-BLOT
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HIV-1gp41不同片段表达对E.coli细胞毒性作用分析 被引量:3
18
作者 袁玉华 毕昌昊 +3 位作者 李菊 王学谦 耿运琪 陈启民 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第2期173-176,共4页
HIV-gp41基因在E.coli中难以表达,为研究影响其表达的原因,选择gp41不同区域构建表达质粒,通过在E.coli BL21(DE3)中进行表达测定其对细菌的毒性作用.结果表明,IPTG诱导后除质粒pET-HN2表达菌以外其余质粒表达菌大量死亡,目的基因转录的... HIV-gp41基因在E.coli中难以表达,为研究影响其表达的原因,选择gp41不同区域构建表达质粒,通过在E.coli BL21(DE3)中进行表达测定其对细菌的毒性作用.结果表明,IPTG诱导后除质粒pET-HN2表达菌以外其余质粒表达菌大量死亡,目的基因转录的mRNA量也迅速下降,[3H]尿嘧啶释放实验显示释放增加,说明GP41蛋白的毒性作用主要表现为对表达菌细胞膜的破坏而成为其在E.coli中难以表达的主要原因. 展开更多
关键词 HIV gp41蛋白 细胞毒性 基因表达 大肠杆菌 跨膜蛋白
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我国HIV-1流行株gp41抗原表位筛选与串联表达 被引量:1
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作者 冯福民 李敬云 +3 位作者 鲍作义 刘思扬 李林 庄道民 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期124-127,共4页
目的 探讨HIV 1gp4 1抗原表位串联表达蛋白用于HIV抗体检测的可行性。方法用HIV 1gp4 1蛋白亲和层析柱制备HIV 1感染者血清中的多克隆抗体 ,用噬菌体展示随机十二肽库进行生物淘洗 ,反向吸附非特异性噬菌体。经ELISA鉴定阳性克隆 ,DNA... 目的 探讨HIV 1gp4 1抗原表位串联表达蛋白用于HIV抗体检测的可行性。方法用HIV 1gp4 1蛋白亲和层析柱制备HIV 1感染者血清中的多克隆抗体 ,用噬菌体展示随机十二肽库进行生物淘洗 ,反向吸附非特异性噬菌体。经ELISA鉴定阳性克隆 ,DNA测序 ,确定优势表位。将优势表位与文献报道的另一个优势表位串联 ,克隆入pQE30载体进行蛋白表达。结果 成功筛选到位于HIV 1gp4 1蛋白上的优势抗原表位 (YGPKDAETTAIW ) ,串联表位 (YGPKDAETTAIW GGGS SC SAKFTCTTQI)在pQE30载体中实现可溶性表达。重组蛋白具有良好的抗原性 ,能与不同的HIV 1抗体阳性血清呈特异反应。结论 HIV 1gp4 1抗原表位串联表达设计是可行的 ,串联表位重组蛋白可用于HIV 1抗体检测 ,但检测灵敏性低于常规方法。 展开更多
关键词 抗原表位 串联 筛选 流行株 HIV-1gp41 HIV-1感染者 gp41蛋白 HIV抗体检测 HIV-1抗体 pQE30 重组蛋白 多克隆抗体 亲和层析柱 噬菌体展示 ELISA DNA测序 可溶性表达 表达蛋白 十二肽库 非特异性 阳性克隆 文献报道 蛋白表达
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抗HIV融合抑制剂的定量构效关系 被引量:2
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作者 谭建军 王遥 王存新 《北京工业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期309-313,共5页
利用三维定量构效关系研究抗HIV融合抑制剂和受体(跨膜蛋白gp41)的结构-活性关系.基于具有活性的抑制剂,用易位体比较分子场分析方法(topomer comparative molecular field analysis,Topomer CoMFA)方法建立抑制剂结构与活性之间关系的... 利用三维定量构效关系研究抗HIV融合抑制剂和受体(跨膜蛋白gp41)的结构-活性关系.基于具有活性的抑制剂,用易位体比较分子场分析方法(topomer comparative molecular field analysis,Topomer CoMFA)方法建立抑制剂结构与活性之间关系的数学模型,并利用统计分析,评价与分析模型的预测能力,结果表明该模型具有较好的预测能力.研究结果可为未知化合物的活性预测、苗头化合物的结构改造、新化合物实体的设计提供理论指导. 展开更多
关键词 融合抑制剂 跨膜蛋白gp41 艾滋病病毒 三维定量构效关系 易位体比较分子场分析方法
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