猪繁殖与呼吸综合征病毒CHsx1401株GP5蛋白基因的生物信息学分析

为了对猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的结构和功能进行探究,本研究对PRRSV当前流行株CHsx1401的GP5蛋白基因进行生物信息学分析。结果显示,CHsx140株GP5蛋白基因全长603 bp,编码200个氨基酸;分子质量为22 152.89 Da,理论等电点为8.276,不稳定性系数为37.54,属于稳定的疏水性蛋白;信号肽预测显示GP5蛋白在第1~31位氨基酸处存在信号肽;亚细胞定位预测GP5蛋白主要分布于内质网;跨膜螺旋结构预测显示GP5蛋白存在2个跨膜螺旋结构域;且其存在30个O-糖基化位点和39个磷酸化位点;抗原性分析显示GP5蛋白柔韧性差,表面可及性区域少,有多个抗原指数较高区域;GP5蛋白二级结构中以α螺旋为主。氨基酸同源性和序列比对结果显示PRRSV CHsx1401株GP5的氨基酸与NADC30株的同源性最高,与HUN4株同源性最低,且CHsx1401株GP5蛋白存在多个氨基酸突变位点;GP5蛋白基因系统进化分析显示CHsx1401株与NADC30株位于同一个分支,遗传距离最近,与QYYZ株遗传距离最远。本研究对PRRSV CHsx1401株GP5蛋白基因进行生物信息学分析,为进一步研究PRRSV GP5蛋白的结构和功能提供参考。

猪繁殖与呼吸综合征病毒部分Nsp2基因及GP5基因的克隆与序列分析

为掌握目前长春及周边地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行动态及遗传变异规律,选取PRRSV CC-13株的部分Nsp2和GP5蛋白基因为研究对象,通过RT-PCR方法扩增获得这些基因片段,对其进行克隆、测序,再用MEGA(4.0)等生物软件分别对其核苷酸及其推导氨基酸序列与从GenBank中选取的10余株代表毒株的相应序列进行比较。这不仅为CC-13分离毒株的遗传变异特性及来源提供了解,同时也为本地区PRRS的防制及进一步研究本地区PRRSV的分子生物学特性提供数据依据。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5、M蛋白基因的克隆及其基因疫苗构建

参照GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型代表株VR2332 GP5和M蛋白基因序列,设计并合成2对引物,用RT-PCR方法分别扩增出PRRSV野毒株GP5和M蛋白基因603,525bp片段,并将其分别克隆到pMD18-T载体。测序正确后,将GP5和M蛋白基因分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1上,成功构建基因疫苗表达载体pEGP5-C1和pEM-C1。小鼠免疫试验证实,这些基因疫苗质粒可以诱导小鼠产生特异性抗体,并在二免后1周开始检测到特异性淋巴细胞增殖反应。