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PRRSV JL/07/SW毒株GP5重组蛋白间接ELISA检测方法的建立
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作者 高恩鹏 丁壮 +3 位作者 高原 孟轲音 宣华 王贵平 《吉林工程技术师范学院学报》 2009年第4期72-74,共3页
本研究将以纯化的重组GP5蛋白作为包被抗原,建立了诊断PRRS的间接ELISA方法。实验确定了最佳抗原包被浓度为2.30μ/mL,PRRSV阳性血清稀释度为1∶100。用间接ELISA方法检测猪瘟、猪细小病毒、猪戊肝病毒阳性血清无交叉反应,证明有很好的... 本研究将以纯化的重组GP5蛋白作为包被抗原,建立了诊断PRRS的间接ELISA方法。实验确定了最佳抗原包被浓度为2.30μ/mL,PRRSV阳性血清稀释度为1∶100。用间接ELISA方法检测猪瘟、猪细小病毒、猪戊肝病毒阳性血清无交叉反应,证明有很好的特异性。 展开更多
关键词 重组质粒 重组gp5蛋白 间接ELISA
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串联表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5表位蛋白间接ELISA方法的建立 被引量:4
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作者 陈如敬 吴学敏 +6 位作者 车勇良 王隆柏 刘玉涛 严山 魏宏 庄向生 周伦江 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期43-47,共5页
利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5抗原表位串联表达重组蛋白作为包被抗原,建立检测PPRSV抗体的间接ELISA方法。重组蛋白最佳包被浓度为7.5μg/mL,最佳封闭液为5%脱脂奶粉,37... 利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5抗原表位串联表达重组蛋白作为包被抗原,建立检测PPRSV抗体的间接ELISA方法。重组蛋白最佳包被浓度为7.5μg/mL,最佳封闭液为5%脱脂奶粉,37℃封闭2h;血清最适稀释度为1∶100,37℃作用2h;兔抗猪IgG/辣根酶(HRP)(1∶3000),37℃作用2h;37℃避光显色15min读取D450nm值。结果经统计学分析得出,S/P值≥0.254为阳性,S/P值≤0.212为阴性。所建立的ELISA方法检测其他5种猪常见病原阳性血清,其D450nm值均小于0.212。利用建立的ELISA方法对临床免疫勃林格殷格翰猪繁殖与呼吸综合征活疫苗4周后的猪血清70份进行检测,其D450nm值均大于0.85,表明本研究建立的重组GP5表位蛋白间接ELISA方法可用于临床样品的监测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 重组gp5表位蛋白 间接ELISA
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Indirect ELISA with Recombinant GP5 for Detecting Antibodies to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus 被引量:10
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作者 Yan Chen Hong Tian Jian-Hui He Jin-Yin Wu You-jun Shang Xiang-tao Liu 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2011年第1期61-66,共6页
Porcine reproductive and respiratory syndrome is caused by the PRRS virus (PRRSV),which has six structural proteins (GP2,GP3,GP4,GP5,M and N). GP5 and N protein are important targets for serological detection by enzym... Porcine reproductive and respiratory syndrome is caused by the PRRS virus (PRRSV),which has six structural proteins (GP2,GP3,GP4,GP5,M and N). GP5 and N protein are important targets for serological detection by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and other methods. Toward this goal,we developed an indirect ELISA with recombinant GP5 antigens and this method was validated by comparison to the LSI PRRSV-Ab ELISA kit. The results indicated that the optimal concentration of coated recombinant antigen was 0.2 μg/well for a serum dilution of 1:40. The rate of agreement with the LSI PRRSV-Ab kit was 88.7% (266/300). These results support the potential use of recombinant GP5 as an antigen for indirect ELISA to detect PRRSV antibodies in pigs. 展开更多
关键词 Porcine reproductive and respiratory syndromevirus (PRRSV) gp5 protein Indirect ELISA
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M蛋白的真核表达及免疫原性评价 被引量:2
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作者 娄慧聪 林润山 +4 位作者 李亚波 赵雨娜 焦鹏涛 罗廷荣 刘文军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4809-4823,共15页
为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行及进化情况并开发针对流行谱系的亚单位疫苗,对2001-2021年间分离于我国的PRRSV毒株进行遗传进化分析,选用优势流行谱系代表毒株,... 为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行及进化情况并开发针对流行谱系的亚单位疫苗,对2001-2021年间分离于我国的PRRSV毒株进行遗传进化分析,选用优势流行谱系代表毒株,优化其GP5和M蛋白的基因序列,与干扰素(interferon,IFN)和免疫球蛋白的Fc区串联后,构建真核表达质粒pCDNA3.4-IFNα-GP5-Fc和pCDNA3.4-IFNα-M-Fc,并使用HEK293T真核表达系统表达重组蛋白IFNα-GP5-Fc和IFNα-M-Fc。将2种重组蛋白与ISA206VG佐剂混匀,免疫断奶仔猪,通过酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbentassay,ELISA)及中和试验评价体液免疫水平,酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)评价细胞免疫水平。试验结果表明,NADC30-like谱系为近年我国主要流行的谱系,IFNα-GP5-Fc和IFNα-M-Fc组合免疫仔猪能诱导高水平的抗体和细胞免疫,该研究为制备更为安全有效的新型PRRSV亚单位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) 遗传进化分析 gp5重组蛋白 M重组蛋白 免疫原性评价
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