GPC3蛋白结构的分析及其表达纯化

目的了解GPC3蛋白结构,构建GPC3蛋白的原核表达纯化系统,高效表达和纯化出GPC3蛋白。方法从GenBank中获取基因序列,通过Protparam、SOPMA、SWISS-MODEL等在线软件对GPC3蛋白(25-554 aa)的结构进行分析。从不同载体和菌株中筛选出相对优势的组合,优化其表达条件,并诱导表达TrxA-GPC3融合蛋白,通过包涵体的溶解和复性、亲和层析、标签切割和分子筛纯化等方法分离纯化出无TrxA标签的GPC3蛋白。结果GPC3蛋白的相对分子质量为60.26 kDa,等电点为5.76,不稳定系数为41.27,脂肪系数为83.66,平均亲水系数为-0.312,是不稳定的亲水性蛋白,其主要为α-螺旋和无规则卷曲结构,引入标签的TrxA-GPC3融合蛋白比GPC3蛋白更稳定。通过对比筛选出表达效率较高的BL21(DE3)-pET32a-GPC3工程菌,其在0.5%的葡萄糖浓度和0.1 mmol/L的IPTG浓度条件下,结合20℃的诱导温度及16 h的诱导时间,可显著提高蛋白表达量,通过亲和层析得到纯度90%以上的TrxA-GPC3融合蛋白,利用凝血酶将TrxA标签切除,最后通过分子筛纯化得到单一的GPC3蛋白。结论利用生物信息学分析了GPC3蛋白的理化性质和结构,并在原核系统中成功表达和纯化了GPC3蛋白,为高特异性抗体的制备或筛选以及结构-功能研究奠定了基础,同时也为其它蛋白的表达纯化提供科学的指导意义。

GPC3蛋白在肝细胞肝癌及肝内胆管细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨GPC3蛋白在肝细胞肝癌、肝内胆管细胞癌及结节性肝硬化组织中的表达差异及临床意义。方法对50例原发性肝细胞肝癌、20例肝内胆管细胞癌及22例结节性肝硬化组织采用免疫组织化学法进行GPC3蛋白表达情况检测,比较分析其在三者中的表达差异。结果 GPC3蛋白特异性表达于肝细胞肝癌,与其在肝内胆管细胞癌及结节样肝硬化组织中的表达相比,差异有统计学意义(均P<0.05)。GPC3蛋白的在肝细胞肝癌中表达与患者的性别、年龄、肝功能分级、是否合并肝硬化、肿瘤直径、肿瘤个数、血管侵犯、TNM分期、HBs Ag阳性等方面的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 GPC3高表达于肝细胞肝癌组织中,可能参与肝癌的发生发展。

肝细胞癌GPC3蛋白表达与预后分析

目的探讨肝细胞癌中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)的表达及其与预后的关联。方法运用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测50例原发性肝细胞癌(HCC)组织及其癌旁组织、25例正常肝组织中GPC3的表达。采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox模型回归分析患者术后影响生存期的因素。结果 50例HCC患者中GPC3表达的阳性率为82.00%,Kaplan-Meier分析和Cox分析结果表明:影响HCC患者预后的独立危险性因素有临床癌症分期、肿瘤细胞转移和GPC3蛋白表达。结论 GPC3蛋白有可能是影响HCC患者预后的一种独立危险因素。

血清中磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3及高尔基体蛋白-73异常表达对肝癌的诊断价值

目的 ：探究肝组织及外周血磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3（phosphatidylinositol proteinglycan 3,GPC3）及高尔基体糖蛋白-73（Golgi protein 73,GP73）高表达对肝癌的诊断价值。方法 ：用ELISA法检测39例肝癌患者及31例肝硬化患者外周血GPC3及GP73浓度,RT-PCR法检测两组患者肝组织中GPC3 m RNA及GP73 m RNA表达水平,比较研究肝癌及肝硬化患者外周血、肝组织中GPC3及GP73的表达差异,分层分析此两种蛋白表达与肝癌不同临床分期、病理分级的相关性。结果：肝癌组外周血GPC3、GP73浓度分别为（16.81±0.56）μg/L、（115.92±7.01）ng/ml,肝硬化组外周血GPC3、GP73浓度分别为（7.41±0.25）μg/L、（64.63±3.07）ng/ml,肝癌组外周血GPC3、GP73浓度均显著高于肝硬化组（P〈0.001）。GPC3值为9.3μg/L时诊断肝癌的灵敏度和特异度分别为89.74%和96.77%,阳性预测值97.20%,阴性预测值88.20%;GP73截断值为77.68 ng/ml时,其诊断肝癌的灵敏度92.31%,特异度83.87%,阳性预测值87.80%,阴性预测值89.70%。肝癌组GPC3 m RNA和GP73 m RNA相对表达量分别为8.91±3.70、68.41±32.86,肝硬化组GPC3 m RNA和GP73 m RNA相对表达量分别为3.04±0.58、2.32±0.25,肝癌组GPC3 m RNA、GP73 m RNA表达均高于肝硬化组（P均〈0.05）。上述结果可知肝癌患者癌组织GPC3、GP73 m RNA表达水平与外周血相应蛋白浓度一致。肝癌患者中外周血GP73、GPC3蛋白浓度及组织m RNA表达水平与年龄、性别、肿瘤大小及肝癌临床分期间无统计学意义;而肝癌患者GPC3表达与病理分级间存在统计学差异,病理分级为3级的肝癌患者GPC3表达水平低于1-2级患者。结论：GP73、GPC3在肝癌患者中表达明显增高,且灵敏度高于AFP,而特异度与其相当,有望成为一种新的、较好早期诊断HCC的血清标志物;另外,GPC3表达对肝癌细胞的分化程度有一定的指示作用。

以GPC3为靶点的抗体治疗策略在肝癌治疗中的研究进展

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)家族的成员,其羧基端通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定在细胞膜上。GPC3可与多种细胞表面受体相互作用,参与调节细胞的形态和黏附、增殖分化、侵袭迁移等生物学行为。GPC3在肝癌中的表达明显高于正常肝组织,且与肝癌的恶性程度、临床分期及预后密切相关。因此,GPC3被认为是肝癌靶向治疗的理想靶分子。近年来,基于抗体的肿瘤免疫治疗策略发展迅速,以GPC3为靶点的抗体治疗策略,如全抗体、单域抗体及嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞治疗等取得了突破性的进展。我们总结了GPC3的功能及以GPC3为靶点的抗体治疗策略在肝癌中的研究进展。

以GPC3为靶点的肝细胞癌免疫疗法的研究进展

近年来肿瘤免疫治疗技术的不断成熟和应用,在多种类型肿瘤的治疗中取得了较好的临床效果,肝细胞癌(HCC)的免疫治疗也成为最有前景的治疗方式之一。研究发现,磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)在HCC组织中特异性高表达,其通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞膜表面,参与HCC发生发展过程中各种信号通路的调控,可作为特异性肿瘤相关标志物。以GPC3为靶点的单克隆抗体、双特异性抗体、CAR-T细胞、免疫毒素及相关联合治疗在临床前研究及临床试验中均展现出良好的应用潜力。因此,靶向GPC3的免疫疗法可能成为未来HCC治疗的主要方向之一,全面了解相关研究的现状对HCC治疗的发展至关重要。本文综述了以GPC3为靶点的免疫疗法在HCC中的作用机制的研究进展及目前仍存在的问题,并对未来进行展望。

血清GPC3联合AFP检测在HCC中的临床意义

目的探讨血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)和甲胎蛋白(AFP)在肝细胞癌(HCC)患者中的临床意义。方法采用ELISA法检测血清GPC3和血清AFP,分析72例HCC患者、58例肝良性病变组和40例健康组血清GPC3和AFP水平。结果 HCC患者血清GPC3和AFP水平显著高于肝良性病变组和健康组(P<0.05);肝良性病变组和健康组中表达无统计学意义(P>0.05)。两者表达与肿瘤大小、是否侵袭和病理分级有关(P<0.05);年龄、性别、有无HbsAg感染和包膜与两者表达无关(P>0.05)。单项检测灵敏度、准确度较低;联合检测灵敏度达84.7%,准确度达90.1%;两者在HCC中表达未存在直接关联(P>0.05)。结论联合检测血清GPC3和AFP水平有助于HCC的早期临床诊断。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)在肝癌诊断中的临床意义

近年来,肝癌在临床上呈现高发趋势,很多肝癌患者发现时已处于中晚期,预后效果不佳,死亡率较高。因此预防肝癌的最好办法是定期诊断,做到早诊断、早治疗,要做好肝癌诊治工作。在当前发展环境下做好肝癌诊治工作,要应用新技术进行早期诊治,做好疾病预防工作。通过数据分析可看到,在实际应用中,磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)其表达与肿瘤直径大小有非常强烈的相关性。通过数据分析获取数据分析成效,提高诊断有效性。对肝癌发生、发展、转移、复发等情况进行分析,获取有价值信息,做到早发现、早诊治、早治疗,提高数据有效性,采用磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)法检测肝癌组织的情况,通过磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)表达提高诊治效果,具有较好作用。基于此,本文对磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)在肝癌诊断中的临床意义进行了分析。

GPC3基因对人肝癌细胞SK-Hep-1生物学行为的影响

目的:利用构建好的GPC3真核表达载体,研究其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法转入SK-Hep-1人肝癌细胞,确定GPC3已经成功转入细胞后,观察转染前后肝癌细胞增殖、黏附、运动及体外侵袭能力的改变,并观察四种生长因子FGF2、IGF2、BMP4、TGFβ1对GPC3抑制细胞增殖的影响。结果:GPC3抑制SK-Hep-1的增殖,降低对Matrigel胶的黏附能力,增加SK-Hep-1的迁移及侵袭能力,GPC3抑制FGF2对SK-Hep-1细胞的增殖效应,而对其他三种生长因子IGF2、BMP4、TGFβ1无此作用。结论:GPC3真核表达载体可抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖,但可降低其对Matrigel胶的黏附能力,增加其迁移及侵袭能力,GPC3可能通过抑制FGF2信号途径来抑制肝癌细胞细胞的增殖。