miR-539靶向GPD1L对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型凋亡和自噬的影响

目的研究miR-539对雨蛙素(Cerulein)诱导的急性胰腺炎(AP)细胞模型凋亡和自噬的影响及分子机制。方法用15 nmol/L Cerulein处理胰腺腺泡A42J细胞4、8、12、24 h,建立AP模型。淀粉酶试剂盒检测细胞上清中淀粉酶(AMY)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-539和甘油3-磷酸脱氢酶1样蛋白(GPD1L)mRNA的水平,Western印迹检测GPD1L、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、膜型LC3(LC3Ⅰ)、胞浆型LC3(LC3Ⅱ)、Beclin1和p62的表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-539与GPD1L间的调控关系。结果与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-539含量显著升高(P<0.05),GPD1L mRNA和GPD1L蛋白含量显著降低(P<0.05),与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-539含量和细胞凋亡率Bax、LC3-ⅡCerulein均显著升高,Bcl-2、p62含量显著降低(P<0.05);与Cerulein+anti-miR-con组相比,Cerulein+anti-miR-539组结果相反(P<0.05)。与miR-con组相比,过表达miR-539的Cerulein处理组细胞中GPD1L mRNA和蛋白含量均显著降低(P<0.05);抑制miR-539组的Cerulein处理组细胞中GPD1LmRNA和蛋白含量均显著升高(P<0.05)。与Cerulein+pcDNA-NC组相比,Cerulein+GPD1L组的AR42J细胞中GPD1L Bcl-2、p62水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1含量均显著降低(P<0.05)。与Cerulein+anti-miR-539+si-con组相比,Cerulein+anti-miR-539+si-GPD1L组AR42J细胞中GPD1L、Bcl-2、p62、细胞凋亡率均显著下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1、Bax显著升高(P<0.05)。结论miR-539通过靶向GPD1L调控Cerulein诱导的胰腺AR42J细胞凋亡和自噬。

重度子痫前期胎盘组织中miR-210及GPD1L的相关性分析

目的分析miR-210及GPD1L在重度子痫前期胎盘组织中的表达及其相关性。方法选取2018年1月-2018年12月在笔者所在医院住院并行剖宫产分娩的40例重度子痫前期孕妇为试验组及40例产前检查正常并行剖宫产分娩的健康孕妇为对照组。采用免疫组织化学法检测两组胎盘组织中HIF-1α蛋白及GPD1L蛋白的表达情况。采用real-time PCR(RT-PCR)法分别检测两组胎盘组织中miR-210、GPD1L mRNA及HIF-1αmRNA的含量。结果 (1)与对照组相比,重度子痫前期组胎盘组织GPD1L蛋白的表达水平明显降低,其阳性表达率为(32.5%,P<0.05);HIF-1α蛋白的表达水平明显升高,其阳性表达率为(65%,P<0.05);重度子痫前期胎盘组织中miR-210的表达水平较高(10.010±3.153,t=6.942,P<0.001),GPD1LmRNA的表达水平较低(0.440±0.264,t=-5.013,P<0.001);HIF-1αmRNA的表达水平较高(7.331±2.407,t=6.397,P<0.001)。(2)在重度子痫前期胎盘组织中,miR-210的表达水平与GPD1L mRNA的表达水平存在明显的负相关(r=-0.911,P<0.001)。结论 miR-210可能通过抑制GPD1L mRNA的表达上调HIF-1α蛋白的含量而参与重度子痫前期的病理生理过程。

GPD1L基因对口腔鳞癌细胞系生物学表型影响的体外研究

目的通过体外研究明确GPD1L(甘油三磷酸脱氢酶-1类基因)基因对口腔鳞癌细胞系增殖、迁移及侵袭等生物学表型的影响。方法构建GPD1L过表达稳定转染细胞系,采用CCK8生长曲线、细胞划痕实验、重建基底膜侵袭实验和蛋白免疫印迹实验,明确GPD1L过表达前后口腔鳞癌细胞系增殖、迁移、侵袭能力及相关蛋白表达的变化趋势。结果口腔鳞癌细胞系WSU-HN6、Cal27和Tca83在GPD1L基因过表达后4~5天,出现明显增殖抑制及细胞周期S期阻滞。细胞划痕实验和重组基底膜侵袭实验发现,GPD1L基因过表达明显抑制口腔鳞癌细胞系Cal27和Tca83的迁移和侵袭能力。Western blotting实验证实GPD1L在口腔鳞癌细胞系中过表达可上调PHD2表达,并下调HIF-1α和Cyclin A2蛋白表达。结论GPD1L过表达可以抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭及细胞周期阻滞,从而影响口腔鳞癌细胞系体外生物学表型。

GPD1L在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的分析甘油磷酸脱氢酶1样抗原(GPD1L)在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义。方法选用包含79例肾透明细胞癌及10例肾脏正常组织的组织芯片,使用免疫组织化学染色法(免疫组化)检测GPD1L蛋白的表达情况,并运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集包含GPD1L mRNA资料的肾透明细胞癌患者相关资料。观察组织芯片中肾脏正常组织与肾透明细胞癌组织GPD1L蛋白的表达部位及表达强度,分析TCGA中肾脏正常组织与肾透明细胞癌组织GPD1L基因的表达水平差异。按基因芯片或TCGA中肾透明细胞癌GPD1L蛋白或mRNA表达情况分为高表达组与低表达组,分析肾透明细胞癌患者GDP1L蛋白或mRNA表达与临床特征及总体生存期(OS)的关系。应用单因素和多因素Cox比例风险回归分析肾透明细胞癌患者OS的影响因素。结果组织芯片中,GPD1L蛋白阳性染色呈棕黄色或褐色,在肾透明癌细胞与肾脏正常组织中主要表达于肾小管上皮的细胞胞质中,GPD1L蛋白在肾透明细胞癌组织表达强度低于其在正常肾脏组织中的表达强度(P<0.001),GPD1L蛋白低表达组中病理分级高和临床分期晚者比例高于高表达组(P均<0.05)。TCGA中,肾透明细胞癌组织GPD1L mRNA表达水平低于肾脏正常组织(P<0.05),GPD1L mRNA低表达组中女性、病理分级高、临床分期晚、有转移、死亡者比例均高于高表达者(P均<0.05), GPD1L mRNA低表达组OS低于高表达组(P<0.001)。Cox比例风险回归分析显示,GPD1L mRNA表达水平、年龄、肿瘤转移为肾透明细胞癌OS的影响因素(P均<0.05)。结论 GPD1L的表达与肾透明细胞癌密切相关,可考虑作为临床诊断及预后的分子标志物。