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盐藻GPDH基因的载体构建及在烟草中的表达
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作者 张华 乔代蓉 +3 位作者 白林含 张庆莲 邓雪柯 曹毅 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期436-439,共4页
作者用冻融法,将构建有盐藻3 磷酸甘油脱氢酶基因的植物高效表达载体DsGPDH导入感受态的根癌农杆菌EHA105中.叶盘法转化烟草,在含卡那霉素的MS培养基上进行选择性培养,生根率达到80%.用PCR的方法对再生苗进行了初步筛选,阳性率约为50%.... 作者用冻融法,将构建有盐藻3 磷酸甘油脱氢酶基因的植物高效表达载体DsGPDH导入感受态的根癌农杆菌EHA105中.叶盘法转化烟草,在含卡那霉素的MS培养基上进行选择性培养,生根率达到80%.用PCR的方法对再生苗进行了初步筛选,阳性率约为50%.对PCR阳性苗,进行RT PCR分析,证实整合到烟草基因组中的GPDH基因表达产生了mRNA. 展开更多
关键词 盐藻 gpdh基因 叶盘转化法 转基因烟草
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酿酒酵母GPDH1基因表达载体pPIC3.5K-ScGPD的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达
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作者 杨会强 乔代蓉 +4 位作者 马梵辛 李茜 徐辉 唐嵩 曹毅 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期648-651,共4页
将酿酒酵母3 磷酸甘油脱氢酶基因GPDH1的编码序列构建到表达载体pPIC3.5K中,利用电转化法将构建好的表达载体转入巴斯德毕赤酵母中,利用含有G418的YPD平板筛选到两个阳性转化子,通过分子生物学及外源蛋白表达实验证明,酿酒酵母3 磷酸甘... 将酿酒酵母3 磷酸甘油脱氢酶基因GPDH1的编码序列构建到表达载体pPIC3.5K中,利用电转化法将构建好的表达载体转入巴斯德毕赤酵母中,利用含有G418的YPD平板筛选到两个阳性转化子,通过分子生物学及外源蛋白表达实验证明,酿酒酵母3 磷酸甘油脱氢酶基因GPDH1已经整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,并且得到了预期的表达. 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 gpdh1 表达载体 3-磷酸甘油脱氢酶
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甘蓝型油菜GPDH基因克隆及其生物信息学分析 被引量:5
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作者 刘少锋 汪慧慧 +1 位作者 邬克彬 熊兴华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期109-116,共8页
为了进一步研究甘蓝型油菜GPDH基因,通过从拟南芥GPDH基因与甘蓝型油菜的共线性分析发现:拟南芥GPDH基因(At2g41540)在甘蓝型油菜A基因组和C基因组中有4个拷贝,分别为:GSBRNA2T00132785001、GSBRNA2T00024258001、GSBRNA2T00058395001、... 为了进一步研究甘蓝型油菜GPDH基因,通过从拟南芥GPDH基因与甘蓝型油菜的共线性分析发现:拟南芥GPDH基因(At2g41540)在甘蓝型油菜A基因组和C基因组中有4个拷贝,分别为:GSBRNA2T00132785001、GSBRNA2T00024258001、GSBRNA2T00058395001、GSBRNA2T00019118001。从Gen Bank分别下载了它们的DNA序列和c DNA序列,c DNA序列依次命名为GPDH1、GPDH2、GPDH3、GPDH4。根据序列信息设计了4对不同的引物,从甘蓝型油菜湘油15号c DNA全长序列中扩增出了4条片段,分别命名为Bn GPDH1、Bn GPDH2、Bn GPDH3、Bn GPDH4。利用生物信息学软件和在线系统进行核苷酸序列分析和蛋白进化分析。结果显示:4条片段大小依次为1 395,1 395,1 389,1 536 bp。其中,Bn GPDH4翻译成氨基酸时序列中间出现终止密码子,不能合成有效蛋白。3个Bn GPDH蛋白的氨基酸数目为464,464和462个,理论分子量为51.584 4~51.829 7 k Da,二级结构α螺旋和无规则卷曲所占比例在42%左右,其次是延伸链所占比例约为15%。三者的跨膜结构总体来说是相同的。3个蛋白都由保守结构Gps A、NADB_Rossmann superfamily和NAD_Gly3P_dh_C superfamily组成,属于GPDH超基因家族。同源建模分析表明3个蛋白均能适用甘油3磷酸脱氢酶(Glycerol-3-phosphate dehydrogenase,GPDH)模型。对其进行亚细胞定位预测在细胞质膜的概率为79.0%。从序列分析、核苷酸聚类、理化性质预测、二级、三级结构预测、亚细胞定位预测、氨基酸聚类分析得出结论,它们具有GPDH基因家族的特征,为甘蓝型油菜GPDH基因家族中的成员。 展开更多
关键词 gpdh 甘蓝型油菜 生物信息学分析
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甘蓝型油菜GPDH基因克隆、表达分析及植物过表达载体构建 被引量:4
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作者 张超 付三雄 +4 位作者 周小婴 唐容 黄莎 杨克相 戚存扣 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1399-1407,共9页
【目的】克隆甘蓝型油菜的甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)基因(BnGPDH),分析其表达特性并构建植物过表达载体,为研究该基因在油菜种子三酰甘油(TAG)合成和积累中的作用机制提供理论参考。【方法】以甘蓝型油菜H105为材料,采用同源克隆技术克隆... 【目的】克隆甘蓝型油菜的甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)基因(BnGPDH),分析其表达特性并构建植物过表达载体,为研究该基因在油菜种子三酰甘油(TAG)合成和积累中的作用机制提供理论参考。【方法】以甘蓝型油菜H105为材料,采用同源克隆技术克隆与At3G07690同源的BnGPDH基因,对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BnGPDH基因在甘蓝型油菜不同组织[根、茎、叶、蕾、花及花后(DAF)7、14、21、30和40 d角果皮和种子]及高、低油含量自交系角果皮和种子中的表达情况,并将克隆获得的BnGPDH基因连接至携带napin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上构建植物过表达载体。【结果】克隆获得的BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因编码区(CDS)长度均为1338 bp,编码445个氨基酸,其编码蛋白仅有5个氨基酸差异,均具有NAD_Gly3P_dh_N和NAD_Gly3P_dh_C结构域,定位于细胞质,分别与白菜细胞质型GPDH蛋白(XP_009147040.1)和甘蓝细胞质型GPDH蛋白(XP_013585317.1)的氨基酸序列具有较高相似度,对应的相似度为100.00%和99.78%,且二者与双子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较近,与单子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较远。BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同组织中均有表达,且表达模式总体上相似,在21DAF和30DAF种子中的表达量显著高于其他组织部位(P<0.05,下同),表明21DAF和30DAF是油菜种子TAG合成和积累的高峰期,但在角果生长发育不同时期这2个基因的表达略有不同,且在茎、蕾、种子(7DAF、21DAF、30DAF和40DAF)和角果皮(7DAF和40DAF)中,BnGPDHc2-1基因的表达量均显著高于BnGPDHc2-2基因,而在14DAF角果皮中BnGPDHc2-2基因的表达量显著高于BnGPDHc2-1基因。21DAF种子中BnGPDHc2-1基因在3个高油含量自交系中的表达量显著高于3个低油含量自交系,BnGPDHc2-2基因在高油含量自交系IL130和IL594中的表达量显著高于3个低油含量自交系;在30DAF种子中,BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2在3个高油含量自交系中的表达量均显著高于3个低油含量自交系。将BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因分别连接至携带napin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上可成功构建获得植物过表达载体。【结论】BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同发育期角果中行使的功能存在一定分化,在进化过程中可能分别来源于白菜基因组和甘蓝基因组,但均在甘蓝型油菜种子TAG合成和积累发挥重要调控作用。因此,构建的植物过表达载体可用于BnGPDH基因功能分析及油菜种子油含量基因工程改良研究。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 甘油-3-磷酸脱氢酶(gpdh) 表达特性 生物信息学 植物过表达载体
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The role of AtGPDHc2 in regulating cellular redox homeostasis of Arabidopsis under salt stress
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作者 ZHAO Ying LIU Meng +5 位作者 WANG Feng DING Dong ZHAO Chang-jiang HE Lin LI Zuo-tong XU Jing-yu 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期1266-1279,共14页
Plants glycerol-3-phosphate dehydrogenase(GPDH)catalyzes the formation of glycerol-3-phosphate,and plays an essential role in glycerolipid metabolism and stress responses.In the present study,the knock-out mutants of ... Plants glycerol-3-phosphate dehydrogenase(GPDH)catalyzes the formation of glycerol-3-phosphate,and plays an essential role in glycerolipid metabolism and stress responses.In the present study,the knock-out mutants of cytosolic GPDH(AtGPDHc2)and wild-type Arabidopsis plants were treated with 0,50,100,and 150 mmol L–1 NaCl to reveal the effects of AtGPDHc2 deficiency on salinity stress responses.The fluctuation in redox status,reactive oxygen species(ROS)and antioxidant enzymes as well as the transcripts of genes involved in the relevant processes were measured.In the presence of 100 and 150 mmol L–1 NaCl treatments,AtGPDHc2-deficient plants exhibited a pronounced reduction in germination rate,fresh weight,root length,and overall biomass.Furthermore,loss of AtGPDHc2 resulted in a significant perturbation in cellular redox state(NADH/NAD+and AsA/DHA)and consequent elevation of ROS and thiobarbituric acid-reactive substances(TBARS)content.The elevated ROS level triggered substantial increases in ROS-scavenging enzymes activities,and the up-regulated transcripts of the genes(CSD1,sAPX and PER33)encoding the antioxidant enzymes were also observed.In addition,the transcript levels of COX15,AOX1A and GLDH in gpdhc2 mutants decreased in comparison to wild-type plants,which demonstrated that the deficiency of AtGPDHc2 might also has impact on mitochondrial respiration under salt stress.Together,this work provides some new evidences on illustrating the roles of AtGPDHc2 playing in response to salinity stress by regulating cellular redox homeostasis,ROS metabolism and mitochondrial respiration. 展开更多
关键词 ARABIDOPSIS THALIANA glycerol-3-phosphate dehydrogenase(gpdh) redox homeostasis reactive oxygen species(ROS) RESPIRATION
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甘蓝型油菜甘油三磷酸脱氢酶(BnaGPDH)基因的克隆与表达 被引量:2
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作者 刘少锋 刑蔓 +4 位作者 汪慧慧 邬克彬 官春云 肖钢 熊兴华 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1772-1780,共9页
甘油三磷酸脱氢酶(GPDH)是三酰甘油(TAG)合成的关键酶。为了阐明甘蓝型油菜(Brassica napus)GPDH(BnaGPDH)的表达特性,本研究采用反转录PCR(RT-PCR)方法,获得BnaGPDH基因的3条全长编码序列(CDS),分别命名为BnaGPDH1、BnaGPDH2、BnaGPDH3... 甘油三磷酸脱氢酶(GPDH)是三酰甘油(TAG)合成的关键酶。为了阐明甘蓝型油菜(Brassica napus)GPDH(BnaGPDH)的表达特性,本研究采用反转录PCR(RT-PCR)方法,获得BnaGPDH基因的3条全长编码序列(CDS),分别命名为BnaGPDH1、BnaGPDH2、BnaGPDH3,长度分别为1395、1395、1389 bp。生物信息学分析表明,BnaGPDHs具有GPDH基因家族的特征,BnaGPDHs与其他植物GPDHs有高度同源性。时空表达分析表明,BnaGPDHs是组成型表达基因,在花中的表达量最高,叶中的表达量最低。BnaGPDHs在幼嫩种子发育的第5周表达量普遍提高,在果荚发育到第5周表达量明显降低。逆境分析表明,BnaGPDHs响应多种逆境胁迫,可能与植物抗逆机制有关。 展开更多
关键词 gpdh 甘蓝型油菜 基因克隆 表达分析
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香鱼甘油-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达 被引量:2
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作者 郝晓娜 陈炯 +1 位作者 陆新江 史雨红 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期151-156,共6页
GPDH(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)是合成脂肪代谢中间产物甘油-3-磷酸的关键酶。通过设计简并引物从香鱼肝cDNA文库中克隆GPDH基因,该基因cDNA序列全长577个核苷酸,单一大的开放阅读框编码一个由351个氨基酸组成的分子量为37.... GPDH(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)是合成脂肪代谢中间产物甘油-3-磷酸的关键酶。通过设计简并引物从香鱼肝cDNA文库中克隆GPDH基因,该基因cDNA序列全长577个核苷酸,单一大的开放阅读框编码一个由351个氨基酸组成的分子量为37.9kD的蛋白。蛋白序列分析表明,香鱼GPDH(aGPDH)与亚洲胡瓜鱼的GPDH序列同源性最高。系统进化树分析表明,GPDH的物种进化关系与目前接受的物种分类关系基本一致。实时荧光定量PCR结果显示,aGPDH基因在香鱼肝、脾、肾、脑、心和肌肉组织均有表达。香鱼咸淡水适应以后,肝、脾、脑、心和肌肉的aGPDH的mRNA表达水平下调。成功构建重组表达质粒pET-32a-GPDH。SDS-PAGE试验表明,目的蛋白可以在大肠杆菌中大量表达;并制备了抗血清,能与目的蛋白起强的特异性反应,但不与细菌自身蛋白起反应。本研究有助于进一步理解鱼类盐度适应过程中的脂肪代谢调控机制。 展开更多
关键词 gpdh 香鱼 基因克隆 盐度适应 实时荧光定量PCR 原核表达
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GSH对甲醛的解毒作用 被引量:5
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作者 罗纪盛 顾亦军 +1 位作者 张艳萍 佘蓝 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1995年第1期101-107,共7页
本文以人红细胞为材料,探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对解除甲醛的毒作用效果,实验结果表明5mmol/L甲醛处理人红细胞后,磷酸甘油醛脱氢酶(GPDH)发生的变化与GSH含量的变化呈正相关。同时可滴定巯基含量变化则与Na&... 本文以人红细胞为材料,探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对解除甲醛的毒作用效果,实验结果表明5mmol/L甲醛处理人红细胞后,磷酸甘油醛脱氢酶(GPDH)发生的变化与GSH含量的变化呈正相关。同时可滴定巯基含量变化则与Na·K-ATP酶活力变化呈负相关。在受甲醛毒害的红细胞悬液内加入GSH,GPDH活力得到恢复和提高,提示GSH有解除甲醛毒作用的效果。 展开更多
关键词 GSH 甲醛 红细胞 毒作用 解毒 生物化学
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Effect of mango seed kernel extract on the adipogenesis in 3T3-L1 adipocytes and in rats fed a high fat diet
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作者 Mai Kobayashi Isao Matsui-Yuasa +4 位作者 Maiko Fukuda-Shimizu Yoshinobu Mandai Masaki Tabuchi Hiroshi Munakata Akiko Kojima-Yuasa 《Health》 2013年第8期9-15,共7页
Mangoes (Mangifera indica L.) are one of the most important tropical foods. The seed is one of the main by-products of mango processing. Therefore, it is important to find an economically viable use for this waste (e.... Mangoes (Mangifera indica L.) are one of the most important tropical foods. The seed is one of the main by-products of mango processing. Therefore, it is important to find an economically viable use for this waste (e.g., as a food additive or supplement with high nutraceutical value). We investigated the anti-obesity effects of mango seed kernel extract with hot water (MSKE-W) in 3T3-L1 adipocytes and in a high fat diet (HFD)-induced obesity rat model. MSKE-W caused a significant decrease in the activity of glycerol 2-phosphate dehydrogenase in 3T3-L1 adipocytes without eliciting cell cytotoxicity and inhibited cellular lipid accumulation through down-regulation of transcription factors such as PPARγ and C/EBPα. In the animal model, rats fed an HFD containing 1% MSKE-W gained less weight than rats fed an HFD alone. The visceral fat mass in rats fed an HFD containing 1% MSKE-W tended to be lower than that in rats fed an HFD alone. Furthermore, histological examination of rat livers from an HFD showed steatohepatitis. However, rats on an HFD containning 1% MSKE-W showed no histopathological changes in liver tissue. Our results indicate that MSKE-W influences anti-obesity effects, both in vitro and in vivo, and suggest that MSKE-W provides a novel preventive potential against obesity. 展开更多
关键词 Mago Seed Kernel Glycerol 2-Phosphate DEHYDROGENASE (gpdh) PEROXISOME Proliferator-Activated Receptor γ (PPARγ) High Fat Diet-Induced Obesity Rat Model 3T3-L1 ADIPOCYTES
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盐藻胞质型3-磷酸甘油脱氢酶基因的克隆及性质鉴定
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作者 蔡元适 甘嘉嘉 +2 位作者 蓝海琳 贺庆华 张庆莲 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期4122-4129,共8页
3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是盐藻(Dunaliella salina)甘油合成途径上的关键酶,本研究首次报道了一条胞质型GPDH基因的克隆(命名为Ds GPDH1),经大肠杆菌表达和融合蛋白的纯化及性质鉴定,也研究了在盐胁迫期间DsGPDH1和DsGPDH2的表达变化。... 3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是盐藻(Dunaliella salina)甘油合成途径上的关键酶,本研究首次报道了一条胞质型GPDH基因的克隆(命名为Ds GPDH1),经大肠杆菌表达和融合蛋白的纯化及性质鉴定,也研究了在盐胁迫期间DsGPDH1和DsGPDH2的表达变化。研究发现DsGPDH1和DsGPDH2相比,少了一段信号肽序列,但包含完整的SerB结构域和GPDH结构域。通过大肠杆菌制备的融合DsGPDH1蛋白高度可溶,但却没有NADH依赖的脱氢酶活性,其SerB结构域是否具有磷酸化酶的活性还没有研究清楚。在高盐胁迫时DsGPDH1和DsGPDH2都表现出诱导性高表达,在低盐胁迫时,DsGPDH1的表达被高度抑制,但DsGPDH2的表达变化却不太明显。GPDH同工酶在盐藻甘油合成中的具体分工仍然不清楚,但本研究迈出了坚实的一步。 展开更多
关键词 盐藻 gpdh 甘油 耐盐
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