IL-18-GPI融合蛋白的表达及其免疫增强作用的研究

目的:构建真核表达IL-18-GPI融合基因的表达载体,观察融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达动力学及生物学活性,为进一步研究细胞因子作为免疫增强剂在临床肿瘤治疗中的应用奠定基础。方法:通过RT-PCR的方法从脂多糖刺激的外周血淋巴细胞中钓取IL-18基因,通过共用限制性酶切位点与GPI相连形成pcDNA-IL-18-GPI真核表达质粒。将质粒转染CHO细胞后建立稳定表达融合蛋白的细胞株用于融合蛋白的提取。对提取纯化的蛋白进行生物学特性、蛋白质转移分析和γ-IFN诱导实验。结果:获得714bp的核酸序列并构建重组质粒pcDNA-IL-18-GPI。SDS-PAGE和West-blot显示在CHO细胞中表达的IL-18-GPI融合蛋白分子量约为27.5kD,该蛋白具有明显的蛋白转移和诱生γ-IFN的作用。结论:IL-18-GPI融合蛋白是一种潜在的肿瘤疫苗增强剂,具有良好的应用前景。