凝血酶GPIb-Ⅸ-Ⅴ受体信号转导通路研究进展

凝血酶与血小板上凝血酶受体结合,是血小板激活信号转导的重要环节〔1,2〕。凝血酶受体包括：蛋白酶激活受体1（protease-activated receptor 1,PAR1）、PAR4〔3〕和血小板糖蛋白IbⅨ-Ⅴ（GPIb-Ⅸ-Ⅴ）复合体。GPIb-Ⅸ-Ⅴ复合体是表达在血小板膜表面的膜受体,凝血酶高亲和力结合位点位于GPIbα上,凝血酶与GPIbα结合可促进血小板对低浓度凝血酶的反应〔4〕。

凝血酶GPIb-Ⅸ-Ⅴ受体作用机制及相关药物研究进展

凝血酶是凝血瀑布中的重要位点,在止血与凝血中扮演着重要角色。凝血酶与血小板膜受体GPIb-Ⅸ-Ⅴ结合可以介导血小板活化,促进血栓生成。本文通过查阅相关文献,对凝血酶和GPIb-Ⅸ-Ⅴ受体的结构、作用机制进行相关介绍,并将近年来针对凝血酶和GPIb-Ⅸ-Ⅴ受体为治疗靶点的新型抗血栓制剂进行综述,期望对血栓治疗提供新思路。

血小板膜受体糖蛋白Ib-IX-V复合物在瞬时转染的HEK293T细胞中的异常表达

血小板膜受体糖蛋白(glycoprotein,GP)Ib-IX-V复合物在血小板活化过程中起到关键作用,因此其结构及功能一直是研究的热点和难点。由于血小板缺乏细胞核,研究者通常需将野生型或突变型的GPIb-IX-V基因转染至其他哺乳动物细胞系中(如CHO、HEK 293T等)以研究其结构与功能,因此GPIb-IX-V复合物在这些细胞系中是否能如实的反映其在血小板中的情况,是决定这些细胞系是否适合GPIb-IX-V复合物研究的关键。本研究通过检测GPIb-IX-V复合物在不同细胞系中的表达情况,明确细胞系差异是否可能干扰复合物的表达,进而找出研究GPIb-IX-V复合物的最适细胞系。在不同种属、不同组织来源的常用细胞系(如CHO、HEK 293T、HeLa等)中单独或共转染GPIb-IX-V复合物的亚基,并用流式细胞术检测GPIb-IX-V复合物在膜表面的表达量。结果发现:CHO细胞在瞬时转染与稳定转染后GPV在细胞膜表面表达依赖于其与GPIb-IX复合物的相互作用,与血小板中的情况一致。相反,在HEK 293T细胞系中,尽管GPIb-IX复合物的表达情况与CHO细胞及血小板中一致,但是GPV在细胞膜表面的表达不再依赖于GPIb-IX复合物;进一步在HeLa、MES13及HUVEC细胞系中的研究发现,GPV可以在HeLa及MES13细胞膜上独立表达,但是在HUVEC细胞表面不表达,提示GPIb-IX-V复合物各亚基之间的依赖性(进而表现为膜表面的表达量)在不同的细胞系中有所不同。结论:本研究为今后对于GPIb-IX-V复合物的研究具有一定的指导意义,尤其是在细胞系的选择上。HEK 293T细胞系极可能对研究结果造成偏倚,因而并非研究GPIb-IX-V复合物尤其是GPV亚基的最佳选择。

血小板凝血酶受体

凝血酶是最重要的血小板活化剂之一。凝血酶活化血小板时涉及两种细胞膜成份 :G蛋白偶联的七个跨膜区受体 (STDR)和GPⅠb Ⅸ Ⅴ复合物 ,通过两种不同的途径活化血小板。GPⅠb为血小板高亲和力凝血酶受体 ,而七个穿膜区受体为中亲和力凝血酶受体。凝血酶和GPⅠb Ⅸ Ⅴ复合物的结合与七个跨膜区蛋白酶受体PAR1、PAR3、PAR4活化之间关系的进一步研究是很有临床意义的。

血小板糖蛋白Ⅰbα上血管性血友病因子结合域的研究进展

血小板糖蛋白 (GP)Ⅰb Ⅸ Ⅴ复合物与其配体、血管性血友病因子 (vWf)的结合是止血和血栓形成的始动环节。GPⅠb Ⅸ Ⅴ复合物的vWf结合域存在于GPⅠb的α亚单位的N端。至少有三个区域对vWf的结合有着重要的影响 :富含亮氨酸重复序列、阴离子化的酪氨酸硫酸化序列和由Cys2 0 9和Cys2 4 8形成的二硫键环。了解vWf结合域对血小板代用品和抗血栓药的研究有着重要的意义 ,本文综述了此方面的研究进展。

通阳中药葱白提取物抑制低压低氧诱导促凝血反应的机制研究

目的研究通阳中药葱白提取物(AYMOE)对低压低氧诱导的血小板激活和促凝状态的影响。方法将42只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(暴露于常压常氧环境)、低压低氧组(Hyp组,暴露于低压低氧环境)、Hyp+AYMOE-100组(暴露于低压低氧环境并口服AYMOE 100 mg/kg)、Hyp+AYMOE-200组(暴露于低压低氧环境并口服AYMOE 200 mg/kg)、Hyp+AYMOE-300组(暴露于低压低氧环境并口服AYMOE 300 mg/kg)、Hyp+anti-CD42c组(暴露于低压低氧环境并尾静脉注射antiCD42c 5 mg/kg)、Hyp+AYMOE-200+rh Lyn组[暴露于低压低氧环境并口服AYMOE 200 mg/kg联合尾静脉注射重组人酪氨酸蛋白激酶Lyn(rh Lyn) 4.8 mg/kg],每组6只。低压低氧暴露7 d后,ELISA检测各组大鼠血清血栓素A2(TXA2)以及血小板激活因子(PAF)含量,检测大鼠血小板的凝集率,HE染色观察大鼠肺组织病理变化,Western blot检测GPIb-Ⅸ-Ⅴ、Lyn、磷酸化的Lyn(p-Lyn)的表达。结果与对照组比较,暴露于低压低氧的各组大鼠血清TXA2、PAF水平及血小板凝集率升高,GPIb-Ⅸ-Ⅴ、Lyn、p-Lyn蛋白表达上调(P <0.05)。与Hyp组相比,Hyp+AYMOE-100组、Hyp+AYMOE-200组、Hyp+AYMOE-300组的血小板凝集率、血清TXA2、PAF的水平降低,差异均有统计学意义(P <0.05),其中以Hyp+AYMOE-200组抑制效果最明显(P <0.05)。与对照组比较,Hyp组大鼠因低氧而发生血管堵塞,肺静脉血管腔空间狭小;与Hyp组相比,Hyp+AYMOE-200组大鼠肺静脉血管栓塞明显缓解。与Hyp组相比,Hyp+anti-CD42c组和Hyp+AYMOE-200组GPIb-Ⅸ-Ⅴ、Lyn、p-Lyn蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P <0.05)。与Hyp+AYMOE-200组比较,Hyp+AYMOE-200+rh Lyn组血小板凝集率、血清TXA2和PAF水平均较高,Lyn和p-Lyn蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 AYMOE可通过抑制GPIb-Ⅸ-Ⅴ和Lyn减少低压低氧诱导的血小板激活并改善促凝状态。