下调GPM6B基因抑制平滑肌表达特异性标记蛋白

目的研究糖蛋白M6B(Glycoprotein M6B,GPM6B)基因对间充质细胞C3H10T1/2向平滑肌细胞分化的影响。方法将慢病毒感染后的sh-GPM6B细胞作为处理组,慢病毒感染后的sh-Scramble细胞作为对照组进行后续实验。用sh-GPM6B质粒和工具质粒在293T细胞系包装慢病毒。用病毒液感染C3H10T1/2小鼠间充质细胞系制备sh-GPM6B稳转细胞系。荧光显微镜观察病毒转染效率,Western法检测GPM6B基因的干涉效率。慢病毒shRNA干涉抑制GPM6B基因表达后,通过TGF-β1诱导对照组和sh-GPM6B细胞向平滑肌分化。Western blot法检测平滑肌特异标记蛋白SM-MHC和α-SMA表达水平。q-PCR法检测SM-MHC和α-SMA的mRNA转录水平。结果慢病毒感染后sh-GPM6B干涉细胞GPM6B基因蛋白表达降低至对照组(40~70)%水平。Sh-GPM6B处理组细胞与sh-Scramble对照组细胞相比,SM-MHC蛋白表达水平显著下调(P <0. 05); SM-MHC和α-SMA mRNA转录水平明显降低(P <0. 01)。结论下调GPM6B基因可抑制TGF-β1诱导的间充质细胞向平滑肌细胞分化。