Ksp-Gpx1-klk1载体的构建及鉴定

目的构建含有肾组织特异性启动子(Ksp-cadherin)的Gpx1与klk1载体质粒,为下一步构建转基因动物、研究在动物模型体内表达和基因治疗提供基础。方法以KLK1cDNA、GPX1cDNA、Ksp-cadherinBAC为模板,PCR扩增获得人源Gpx1、KLK1、Ksp-cadherincDNA。PCR产物大小与预期结果一致,序列分析完全正确。选择多个相应酶切位点,分步将Ksp-cadherin、Gpx1、KLK1插入至pIRES-EGFP质粒中,构建pKSP-GPX1-IRES-KLK1重组质粒。应用酶切鉴定和序列分析方法验证所构建载体的正确性。结果成功构建了含有Ksp-cadherin的Gpx1与klk1载体质粒。结论该重组载体的构建为下一步构建转基因动物,研究其在哺乳动物肾组织内过表达及在移植肾缺血再灌注损伤的基因治疗中的作用奠定了基础。

谷胱甘肽过氧化物酶1在肝癌组织中的表达相关信号通路及与患者预后关系

目的:通过生物信息学的方法分析谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)在肝癌组织中的表达及意义。方法:采用生物信息分析方法分析TCGA数据库中GPX1基因的表达情况。在STRING数据库中建立GPX1及其相关蛋白互相作用网络,对网络中的蛋白进行功能富集。采用生存分析探讨GPX1高低表达水平与肝癌的预后关系。结果:与正常肝组织比较GPX1基因多种肿瘤中表达水平上调;在肝癌患者中,癌组织中GPX1表达水平显著高于正常肝组织(P<0.05);但不同分期肝癌患者GPX1表达水平无明显差异(P>0.05)。与GPX1相互作用较为紧密的蛋白网络共有节点数52个,相互作用关系605个,区域聚类指数为0.82。GPX及其相关蛋白主要定位于细胞膜和细胞浆,分子功能主要为蛋白结合、细胞凋亡、细胞增殖等,而生物学过程主要富集于代谢调节细胞对刺激的反应等。生存分析显示高低表达组总生存(HR=1.30,P=0.12)和无疾病进展生存(HR=0.89,P=0.44)无明显差异。结论:GPX1在肝癌组织中表达水平增高,可能参与了肝癌的发生过程,但与患者预后无关。

冠心病与谷胱甘肽过氧化物酶1基因Pro200Leu多态性

目的探讨GPX1基因Pro200Leu多态性与冠心病的关系。方法采用病例对照研究方法,收集早发冠心病患者375例,迟发冠心病患者519例,对照334人,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分型技术对GPX1基因Pro200Leu多态性进行检测,采用logistic回归计算Pro200Leu多态性与冠心病风险的比值比(OR值)和95%可信区间(CI)。结果与对照组相比,早发冠心病组携带CT+TT基因型的个体比携带CC基因型更容易患冠心病,多因素调整后,OR=1.96(95%CI=1.17-3.31);迟发冠心病组与对照组相比较,多因素调整后则无统计学意义(OR=1.75,95%CI=0.76-4.02)。结论 GPX1基因Pro200Leu多态性T等位基因可能是早发冠心病的一个危险因素。