黔北麻羊GPx3基因克隆、生物信息学分析及在不同性腺组织中的表达分析

为探究GPx3基因在产单、多羔黔北麻羊不同性腺组织中的表达规律及其蛋白质的结构与功能,本实验以黔北麻羊为研究对象,采集单、多羔黔北麻羊的下丘脑、垂体、子宫、输卵管和卵巢提取总RNA,运用qRT-PCR技术,分析GPx3基因mRNA在单、多羔黔北麻羊5个不同性腺组织中的表达水平;PCR法扩增克隆黔北麻羊GPx3基因的CDS区;生物信息学分析并预测黔北麻羊GPx3蛋白的结构与功能。qRT-PCR结果显示:GPx3基因在单、多羔黔北麻羊的5个不同性腺组织中均有表达,且均在卵巢的表达量最高;除下丘脑外,其余各组织在多羔组中的表达量均极限著高于单羔组。T克隆结果表明:黔北麻羊GPx3基因CDS区序列为681 bp,与NCBI上收录的山羊的mRNA序列同源性达99.85%。生物信息学分析发现:黔北麻羊GPx3蛋白可能位于细胞外,且具有信号肽,属于不稳定的亲水性分泌蛋白,其三级结构主要由无规则卷曲和α-螺旋构成;遗传进化树分析得出,黔北麻羊GPx3基因与绵羊的遗传距离最近,与鸡的遗传距离最远。本研究对GPx3基因进行了克隆和生物信息学分析,并揭示了GPx3基因在黔北麻羊不同性腺组织中的表达差异性,为进一步探究GPx3基因对黔北麻羊繁殖性状的调控机制提供基础。

非小细胞肺癌组织中GPX3基因的表达及其临床意义

目的:探讨非小细胞肺癌组织和癌旁正常组织中GPX3(谷胱甘肽过氧化物酶3)基因mRNA和蛋白表达及其临床意义。方法:对60例非小细胞肺癌患者,及癌旁组织采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western-blot技术检测GPX3在其肺癌组织及癌旁组织中的表达,分析其与患者临床病理特征的关系。结果:RT-PCR结果显示GPX3 mRNA在癌旁组织中的表达量高于非小细胞肺癌组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其表达水平与肿瘤病理分期、分化程度和淋巴结转移明显相关(P<0.05)。Westernblot结果显示GPX3蛋白在癌旁组织中表达明显高于非小细胞肺癌组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。GPX3蛋白的表达水平与肿瘤病理分期和淋巴结转移明显相关(P<0.05)。结论 :GPX3基因的表达异常在非小细胞肺癌的发生、发展中起着重要的作用。

泪腺肿瘤组织中GPX3基因mRNA和蛋白的表达及其相关性

目的探讨GPX3基因mRNA和蛋白在泪腺上皮性肿瘤中的表达及其临床意义。方法采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western-blot技术,检测32例泪腺多形性腺瘤、28例泪腺腺样囊性癌及9例正常泪腺组织中的GPX3基因mRNA及蛋白的表达。结果 RT-PCR结果显示,GPX3 mRNA在正常泪腺组织、泪腺多形性腺瘤及泪腺腺样囊性癌中的表达量分别为:0.90±0.01、0.48±0.03、0.21±0.01,三组间差异有统计学意义(P<0.05)。Western-blot结果显示,GPX3蛋白在正常泪腺组织、泪腺多形性腺瘤及泪腺腺样囊性癌中的表达分别为1985.00±121.63、768.01±121.32、0,逐渐降低,三组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GPX3可能参与了泪腺肿瘤的发生、发展,可作为鉴别泪腺良、恶性疾病的一种辅助分子标记物。

GPX3基因甲基化是胰腺癌的潜在诊断标志物

目的 探讨谷胱甘肽过氧化物酶3(glutathione peroxidase 3,GPX3)基因启动子区在胰腺癌中的甲基化情况及其表达调控机制。方法 应用半定量RT-PCR、甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MPCR)和硫化测序(bisulfite sequencing,BSSQ)技术对6株人胰腺癌细胞系(PANC-1、PANC3.11、MIAPaCa-2、SW1990、AsPC-1和CFPAC-1)和153例胰腺癌组织进行分析。结果GPX3在PANC-1、PANC3.11和SW1990细胞中高表达,其启动子区呈现非甲基化状态;在CFPAC-1细胞中低表达,其启动子区呈现部分甲基化状态;在MIAPaCa-2和AsPC-1细胞中缺失表达,其启动子区呈现完全甲基化。应用去甲基化试剂5-aza处理后,PANC-1、PANC3.11和SW1990细胞中表达无变化,CFPAC-1细胞中表达增加,MIAPaCa-2和AsPC-1细胞中恢复表达。结果表明GPX3的表达受启动子区甲基化调控。BSSQ结果进一步验证了其在细胞系中的状态和MSP的扩增效率。GPX3在胰腺癌中的甲基化率为26.1%(40/153),GPX3甲基化与年龄、吸烟和肿瘤分化程度有相关性(P<0.05),与性别、肿瘤大小、TNM分期、饮酒等因素无相关性(P>0.05),GPX3甲基化是胰腺癌诊断的潜在标志物。结论 GPX3在胰腺癌中频繁发生甲基化,其表达受启动子区甲基化调控。

硒对硒蛋白-谷胱甘肽过氧化物酶基因表达及其酶活性的调节

本文根据国内外研究现状详细综述了硒调节细胞型谷胱甘肽过氧化物酶(GPX1)mRNA水平、蛋白水平及酶活3个水平的可能分子机理,初步概述硒对其余GPX基因表达的影响及其作用机制,为深入研究硒调节GPX基因表达的作用机制提供参考。

食管鳞癌组织和血浆中COL14A1基因的甲基化及与临床特征的关系

目的对比分析食管鳞癌组织和癌旁组织，食管鳞癌患者与正常人的血浆，检测COL14A1的甲基化频率，并结合患者的临床病理特征，分析COL14A1基因甲基化与食管鳞癌的临床特征的关系。方法收集42例食管鳞癌组织标本和相对应的癌旁组织标本，同时收集42例食管鳞癌患者和50例正常人的血浆标本；应用甲基化特异性PCR（MSP）结合琼脂糖凝胶电泳检测COLl4A1在组织和血浆中的甲基化情况。结果COL14A1在肿瘤组织中的甲基化频率为45．24％，显著高于癌旁组织11．9％（P〈0．001）。COL14A1在肿瘤患者血浆中的甲基化频率为30．95％，在正常对照组的血浆中未检测到甲基化。组织中的COL14A1甲基化频率在病理分期为N2组明显高于病理分期N0-N1组。血浆中的COL14AI甲基化频率在病理分期T3组明显高于病理分期T1-T2组。结论COL14A1在食管鳞癌组织的甲基化频率高于癌旁组织，在食管鳞癌患者血浆中的甲基化频率显著高于正常人，且临床分期越晚的甲基化频率越高。