CDFI鉴别男性乳腺良恶性肿瘤价值及与CXCL1、Gab2、MVD的相关性探究

本研究选取18例男性乳腺恶性肿瘤患者作为研究组,纳入同期41例男性良性乳腺肿瘤及50例健康体检男性分别作为良性对照组和健康对照组,通过对比分析发现,研究组CDFI参数[搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、血流速度(PSV)]高于良性对照组和健康对照组(P<0.05);PI、RI、PSV联合诊断男性乳腺恶性肿瘤的AUC高达0.854,具有较高应用价值;研究组患者PI、RI、PSV与CXC型趋化因子配体1(CXCL1)、GRB相关蛋白2(Gab2)、微血管密度(MVD)水平间存在正相关关系(P<0.05)。由此可见,CDFI在鉴别男性乳腺良恶性肿瘤方面具有较高应用价值,且与患者CXCL1、Gab2、MVD表达呈正相关。

GAB2在卵巢癌组织中的表达及其与预后的相关性

目的评估卵巢癌组织中Grb相关结合蛋白2(Grb-associated binding protein 2,GAB2)的表达及其与预后的关系。方法收集南通大学附属肿瘤医院2013年1月—2016年1月手术切除的119例卵巢癌组织及癌旁组织,利用免疫组织化学染色法检测组织中GAB2的表达情况,并分析其表达量与临床特征和总生存期(Overall survival,OS)的关系。利用Cox比例风险模型分析影响卵巢癌患者OS的危险因素。构建基于Cox比例风险模型的Nomogram预后模型预测卵巢癌患者3年和5年生存率。结果与癌旁组织相比,GAB2在癌组织中表达增加(P<0.001)。我们还发现GAB2表达量与FIGO分期(P=0.004)、初诊时CA125水平(P=0.005)和铂耐药性复发(P<0.001)有关。Kaplan-Meier生存曲线表明GAB2的高表达与患者OS的下降有关(P<0.001)。单因素分析结果显示,GAB2表达量、FIGO分期、初诊时CA125水平和铂耐药性复发与卵巢癌患者OS相关(P<0.05)。多因素分析显示,GAB2表达水平是影响卵巢癌患者OS的独立因素。Nomogram预后模型对卵巢癌患者3年和5年生存率的预测能力较好(C指数为0.801)。结论GAB2的表达水平能预测卵巢癌患者的预后,有望成为卵巢癌治疗的潜在靶点。

miR-125a-5p通过靶向调控GAB2抑制乳腺癌细胞的迁移能力

miR-125a-5p可负性调节GAB2表达,抑制胶质瘤细胞的侵袭和转移。本研究旨在证明miR-125a-5p抑癌作用的普遍性,即miR-125a-5p是否可通过靶向抑制GAB2抑制乳腺癌细胞的迁移。荧光素酶实验结果显示,miR-125a-5p可特异识别GAB2的3'-UTR,抑制报告酶的表达。荧光定量PCR结果揭示,与正常乳腺上皮细胞MCF-10A比较,miR-125a-5p在乳腺癌细胞MDA231和MCF-7中的表达明显降低;与迁移能力相对较低的MCF-7细胞比较,miR-125a-5p在迁移能力较高的MDA231细胞中的表达量更低。Western印迹结果证明,与空载体(对照)和anti-miR125a-5p转染细胞比较,转染miR-125a-5p明显抑制GAB2蛋白在乳腺癌细胞中的表达。Transwell结果显示,与空载体转染的对照细胞比较,转染miR-125a-5p的乳腺癌细胞穿过基质胶的细胞数明显减少;相反,转染anti-miR125a-5p的细胞穿过基质胶的细胞数却明显增多。上述结果提示,miR-125a-5p在正常的乳腺细胞中高表达,而在乳腺癌细胞中低表达,其表达水平与癌细胞的迁移能力和GAB2表达呈反向关系。本研究结果还提示,miR-125a-5p通过靶向负调控GAB2抑制乳腺癌细胞的迁移能力。总之,本研究证明,miR-125a-5p在肿瘤中发挥抑癌作用。

重楼皂苷在miR-125a-5p靶向调控GAB2诱导乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用及机制研究

目的探讨重楼皂苷(RPS)在miR-125a-5p靶向调控Grb2相关结合蛋白2(GAB2)诱导乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用及机制。方法取人乳腺癌细胞系MCF-7和人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A,采用qRT-PCR、Western blot法分别检测并比较两者miR-125a-5p、GAB2表达水平。再将MCF-7细胞按随机数字表法分成6组:RPS 0μg/mL组、RPS 80μg/mL组、RPS 80μg/mL+阴性抗体组、RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p组、RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p+阴性干扰组和RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p+si-GAB2组,每组设3个复孔;培养48 h后检测并比较miR-125a-5p、GAB2、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平以及细胞增殖率、细胞凋亡率。将GAB2与空白质粒和过表达miR-125a-5p质粒共转染到MCF-7细胞中,采用荧光素酶Promega检测法检测miR-125a-5p与GAB2的靶向作用。结果与MCF-10A细胞比较,MCF-7细胞中miR-125a-5p表达水平较低(P<0.05),GAB2表达水平较高(P<0.05)。与RPS 0μg/mL组比较,RPS 80μg/mL组和RPS 80μg/mL+阴性抗体组miR-125a-5p、Bax表达水平和细胞凋亡率均明显升高(均P<0.05),细胞增殖率和Bcl-2表达水平均明显降低(均P<0.05);RPS 80μg/mL组和RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p+阴性干扰组GAB2表达水平均明显降低(均P<0.05)。与RPS 80μg/mL组、RPS 80μg/mL+阴性抗体组比较,RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p组miR-125a-5p表达水平均明显降低(均P<0.05);RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p组和RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p+阴性干扰组细胞增殖率和Bcl-2表达水平均明显升高(均P<0.05),细胞凋亡率和Bax表达水平均明显降低(均P<0.05)。与RPS 80μg/mL组、RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p+阴性干扰组比较,RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p+si-GAB2组GAB2表达水平均明显降低(均P<0.05)。与RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p组、RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p+阴性干扰组比较,RPS 80μg/mL+anti-miR-125a-5p+si-GAB2组细胞增殖率和Bcl-2表达水平均明显降低(均P<0.05),细胞凋亡率和Bax表达水平均明显升高(均P<0.05)。GAB2与miR-125a-5p的结合位点为CAGGGA,GAB2的突变位点为AGUCCC;miR-125a-5p与GAB2野生型结合能明显降低荧光活性比(P<0.05),但与GAB2突变型结合不影响荧光活性比(P>0.05)。结论RPS能够介导miR-125a-5p/GAB2轴发挥抗肿瘤活性,具体机制可能与miR-125a-5p发挥抑癌效应来负向调控GAB2蛋白表达,进而影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡能力有关。

GAB1通过PI3K通路对甲状腺癌细胞增殖和淋巴管生成的影响

目的探究GAB1通过PI3K通路对甲状腺癌细胞增殖和淋巴管生成的影响。方法将人甲状腺癌细胞系SW579分为对照组、siGAB1组和GAB1组,通过质粒转染沉默和过表达GAB1。检测各组细胞增殖、迁移和侵袭的能力。检测淋巴管生成标志物CD34和LYVE-1以及PI3K/AKT通路水平。结果转染后,siGAB1组的GAB1 mRNA和蛋白分别从3.25±0.24和2.42±0.22降低至0.54±0.05和0.92±0.10(P<0.05),GAB1组的GAB1 mRNA和蛋白升高至10.65±0.92和4.35±0.40(P<0.05)。siGAB1组的细胞增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.05),GAB1组的上述指标显著高于对照组(P<0.05)。siGAB1组的CD34、LYVE-1、PI3K和AKT水平显著低于对照组(P<0.05),GAB1组的上述指标显著高于对照组(P<0.05)。结论GAB1可通过促进PI3K通路促进甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和淋巴管生成。

miR-34b-5p通过Gab1调节mTOR通路抑制子宫内膜癌细胞的增殖迁移

目的探讨miR-34b-5p对子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞增殖和迁移的作用及机制。方法qRT-PCR方法检测miR-34b-5p、Gab1在EC及癌旁组织中的表达水平,双荧光素酶基因报告(293T细胞)实验验证miR-34b-5p和Gab1的靶向关系,建立miR-34b-5p慢病毒过表达的人子宫内膜腺癌细胞AN3CA细胞模型,qRT-PCR方法检测EC和癌旁组织中miR-34b-5p的表达水平,CCK-8、划痕实验检测AN3CA细胞增殖、迁移能力,Western blot方法检测Gab1、p-mTOR、p-p70s6k、p-4EBP的表达水平。结果EC组织中的基因表达结果显示,miR-34b-5p呈现低表达,Gab1呈现高表达(P均<0.05);qRT-PCR结果显示,成功构建miR-34b-5p过表达的AN3CA细胞株;双荧光素酶实验结果显示,miR-34b-5p具有靶向Gab1 mRNA的结合能力;CCK-8结果显示miR-34b-5p过表达抑制AN3CA细胞的增殖(P<0.05);划痕实验显示miR-34b-5p过表达降低AN3CA细胞的迁移能力(P<0.05);Western blot结果显示miR-34b-5p的过表达抑制Gab1、p-mTOR、p-p70s6k、p-4EBP蛋白的表达水平(P均<0.05)。结论miR-34b-5p过表达可抑制AN3CA的增殖和迁移,与Gab1介导的p-mTOR通路下调有关。

白花蛇舌草-半枝莲药对组分对结肠腺癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨白花蛇舌草-半枝莲药对组分对结肠腺癌Lovo细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法将白花蛇舌草、半枝莲按质量1∶1进行3次煎煮,获得水提物,后取适量浸膏用石油醚回流脱脂,再以乙酸乙酯进行多次萃取,获得白花蛇舌草-半枝莲药对组分,并计算得率。实验分为对照组(正常培养Lovo细胞)、白花蛇舌草-半枝莲药对组分低剂量组(10 mg/L)、中剂量组(30 mg/L)及高剂量组(50 mg/L)。通过噻唑蓝比色法(MTT)检测各组细胞培养24、48、72 h后的增殖抑制率。各组细胞培养48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Grb2相关结合蛋白1(Gab1)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、苏氨酸激酶(Akt)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果化学萃取后的白花蛇舌草-半枝莲药对中主要含有对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素和芹菜素4种化合物,组分得率为0.61%。与对照组相比,低、中、高剂量组细胞增殖抑制率升高,G1期肿瘤细胞比例增加,细胞凋亡指数增高,侵袭细胞数和划痕闭合率明显减小(均P<0.05),细胞中Gab1、VEGFR-2、PI3K、Akt、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,Bax表达升高(均P<0.05),且存在剂量依赖性。结论白花蛇舌草-半枝莲药对组分可抑制结肠腺癌Lovo细胞的增殖,降低其迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Gab1/VEGFR-2/PI3K/Akt信号通路活化有关。

Gab1在胃癌组织中表达分析及通过PI3K/AKT通路调控转移的机制研究

目的探究Grb2相关结合蛋白1(Gab1)表达在胃癌中的临床意义和通过PI3K/AKT通路调控转移的机制。方法收集2015年3月至2018年3月胃癌组织和癌旁组织标本各70份,通过免疫组织化学染色检测Gab1表达水平,并分析Gab1表达水平与患者一般资料和病理特点的相关性。将胃腺癌细胞AGS分为空白组、对照组、Gab1组和Gab1+LY294002组,Gab1组通过转染pCMV6-entry-Gab1重组质粒过表达Gab1,对照组转染阴性对照质粒。Gab1+LY294002组培养基中加入PI3K/AKT抑制剂LY294002(5μmol/L)。使用qPCR检测Gab1 mRNA相对表达水平,通过Western blot检测Gab1、p-AKT和AKT蛋白水平。分别通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞增殖、迁移、侵袭能力。结果Gab1在癌旁组织中表达水平较低,在胃癌组织中的表达水平较高。存在淋巴转移、存在远端转移、T3+T4浸润深度、Ⅲ~Ⅳ期患者较无淋巴转移、无远端转移、T1+T2浸润深度、Ⅰ~Ⅱ期患者Gab1高表达水平所占比例更高(P<0.05)。Gab1组和Gab1+LY294002组细胞中Gab1 mRNA相对表达水平和蛋白表达水平均明显高于空白组和对照组(P<0.05)。LY294002对Gab1 mRNA和蛋白表达影响不明显。Gab1组细胞活力、迁移和侵袭能力明显高于空白组、对照组和Gab1+LY294002组(P<0.05),并且Gab1组的AKT磷酸化水平明显高于空白组、对照组和Gab1+LY294002组(P<0.05)。结论Gab1在胃癌组织中高表达,并且高表达水平的Gab1与胃癌的恶性表型有关。上调的Gab1表达会通过激活PI3K/AKT通路促进胃癌细胞的细胞迁移和侵袭。

沉默Gab1抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖的可能机制

目的探讨沉默Grb2相关结合蛋白1(Grb2-associated binding proteins 1,Gab1)提高放射线照射效果对人胆管癌TFK-1细胞增殖的抑制作用及可能机制。方法对数生长期人胆管癌TFK-1细胞随机分为放射组(转染小干扰RNA-NC质粒)、观察组(转染小干扰RNA-Gab1质粒)和对照组(转染小干扰RNA-NC质粒)。转染后培养48h,放射组、观察组应用8Gy X线照射24h,对照组不进行X线照射。取X线照射24h的细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,平板细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力,实时荧光定量PCR法检测Gab1mRNA相对表达量,Western Blot法检测Gab1、PI3K、Akt蛋白相对表达量。结果X线照射24h,放射组、观察组细胞活力吸光度值(0.52±0.05、0.41±0.04)、细胞增殖形成的菌落数[(214.32±6.47)、(164.34±6.03)个]、Gab1mRNA相对表达量(4.05±0.36、0.83±0.18)、Gab1蛋白相对表达量(3.05±0.36、2.03±0.18)、PI3K蛋白相对表达量(1.31±0.10、0.83±0.18)、Akt蛋白相对表达量(3.54±0.22、1.15±0.18)均低于对照组[0.65±0.04、(289.54±8.53)个、5.55±0.21、3.85±0.21、1.96±0.09、4.36±0.24](P<0.05),且观察组低于放射组(P<0.05)。结论沉默Gab1可提高放射线照射对人胆管癌TFK-1细胞活力及增殖的抑制作用,其机制可能与下调PI3K/Akt表达有关。

Gab1通过调控MAPK信号通路促进脑膜瘤细胞增殖和侵袭的机制研究

目的探究脑膜瘤组织中Grb2相关结合蛋白1(Gab1)的表达意义及经MAPK信号通路促进脑膜瘤细胞增殖和迁移的机制。方法临床收集62例脑膜瘤患者的瘤组织和瘤旁组织,通过免疫组化染色检测Gab1。分别将人脑膜瘤细胞系SF3061分为对照组、Gab1组和sh-Gab1组。通过质粒转染过表达或沉默Gab1,分别检测转染后各组细胞活力、增殖、迁移和侵袭功能,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白ERK1/2、JNK、P38 MAPK蛋白水平。结果脑膜瘤组织中的Gab1表达水平高于瘤旁正常组织(P<0.05)。脑膜瘤分级越高,组织中Gab1表达水平越高(P<0.05)。Gab1组蛋白和Gab1 mRNA水平显著下调(P<0.05),sh-Gab1组Gab1 mRNA和ERK1/2、JNK、P38MAPK蛋白水平显著上调(P<0.05)。CCK-8检测转染细胞活力、克隆形成数目、迁移和侵袭能力:Gab1组高于对照组(P<0.05),sh-Gab1组低于对照组(P<0.05)。ERK1/2、JNK、P38 MAPK蛋白:Gab1组高于对照组(P<0.05),sh-Gab1组低于对照组(P<0.05)。结论 Gab1在脑膜瘤中过表达,高Gab1水平与更高的脑膜瘤分级有关;Gab1通过调控MAPK通路上调ERK1/2、JNK、P38 MAPK蛋白促进脑膜瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。