实时荧光定量PCR检测传代培养细胞Grb10的表达

目的建立一种可靠的Grb10印迹基因实时荧光定量PCR方法,检测传代培养鼠尾成纤维样细胞中Grb10表达的差异。方法通过实时荧光PCR,选择合适的"相对标准品"绘制相对标准曲线,检测传代培养细胞中印迹基因Grb10的表达水平。结果相对标准曲线有较好的线性(r=0.999及0.984);实时荧光定量PCR方法检测出随着细胞培养代数的增加印迹基因Grb10表达水平上升。结论双标准曲线的实时荧光定量PCR法用于检测Grb10的表达准确可靠;传代培养可能影响鼠尾成纤维样细胞中印迹基因Grb10的表达水平。

印迹基因生长因子-受体结合蛋白10在人类卵子及种植前胚胎的表达

目的检测Silver-Russell syndrome(SRS)候选印迹基因—生长因子受体结合蛋白10(Grb10)在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,探讨Grb10与胚胎发育以及辅助生殖的关系。方法应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因Grb10在人类卵子及种植前胚胎的表达。结果4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到Grb10基因的表达,2细胞胚胎中未见表达。结论印迹基因Grb10表达于种植前胚胎,与胚胎发育密切相关。

雄激素非依赖性前列腺癌细胞株BCL2和GRB10基因启动子区甲基化研究

目的探讨基因甲基化在雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-independent prostate cancer,AIPC)转化过程中可能的作用。方法采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)联合TA克隆测序检测雄激素依赖性前列腺癌(androgen-dependent prostate cancer,ADPC)细胞株LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株LNCaP-AI(androgen independent)中生长因子受体结合蛋白10(growth factor receptor-bound protein 10,GRB10)和B细胞性淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymphoma/leukaemia-2 gene,BCL2)的甲基化状态。结果 GRB10基因在LNCaP-AI细胞和LNCaP细胞中的甲基化率分别为9.6%、7.4%;BCL2基因在LNCaP-AI细胞和LNCaP细胞中的甲基化率分别为14.7%、25.3%,这两个基因在LNCaP细胞和LNCaP-AI细胞的甲基化率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GRB10和BCL2基因的异常表达与基因甲基化无明显相关,而二者是否参与到前列腺癌激素非依赖性到转化过程以及具体机制有待进一步研究。