北京黑猪GREB1L和MIB1基因多态性与肋骨数及胴体性状的关联分析

旨在开展GREB 1L和MIB 1基因多态性与肋骨数和胴体性状(胴体长、胴体直长、胴体斜长及胴体重)关联分析,筛选关键功能位点。本研究选取屠宰日龄为215天的317头健康北京黑猪,并提取耳组织DNA,对GREB 1L和MIB 1基因进行引物设计、并利用聚合酶链式反应(PCR)技术和Sanger测序技术等对SNPs进行基因分型,计算变异位点基因型频率以及等位基因频率分布,并与肋骨数和胴体性状进行关联分析。试验共筛选到6个SNPs,包括GREB 1L基因的3个同义突变、MIB 1基因的2个同义突变和1个内含子区的可变剪切突变。将6个SNPs分别对肋骨数和胴体性状使用Duncan’s多重检验统计分析发现,GREB 1L基因上的3个同义突变6:106574972 G>A、6:106648540 C>T、6:106648558 A>G与性状关联均不显著(P>0.05);MIB 1基因上的1个同义突变6:106936590 C>T与胴体长显著相关(P<0.05);而内含子15~16的6:107016475 A>G可变剪切突变与肋骨数显著相关(P<0.05);第三个同义突变6:107028660 G>A与肋骨数和胴体性状均无显著差异(P>0.05)。结果显示,显著的2个位点可作为北京黑猪肋骨数及胴体长变异的候选基因功能位点。

GREB1L基因突变致后天性单侧肾萎缩一例报道并文献复习

肾发育不良和肾发育不全(RAH)是先天性肾脏与尿路畸形(CAKUT)的主要表现之一,是导致儿童慢性肾脏病的重要原因。遗传因素与发病密切相关,随着全基因检测技术的发展,越来越多与RAH相关的基因突变被报道,GREB1L基因突变已被证实可导致RAH。本研究报道了1例后天性单侧肾萎缩GREB1L基因c.4688A>G杂合突变患儿,并复习相关文献。该患儿基因突变源自母亲,该变异为罕见变异,并且具有不完全外显特性,多种蛋白质危害预测软件预测该突变为有害变异。本文发现了新的GREB1L基因突变位点,可能拓展了与RAH相关的基因突变谱和临床谱。

GREB1基因多态性与老年骨质疏松性骨折的相关性研究

目的探讨北京人群乳腺癌雌激素调控基因1(GREB1)基因多态性与老年骨质疏松性骨折的相关性。方法本研究共纳入226例老年患者,分为骨折组(骨质疏松性骨折,n=100)、对照组(无骨质疏松、无骨折,n=126)。采用双能X线骨密度仪测量髋部和腰椎骨密度值。用Snapshot技术检测患者rs10929757、rs5020877位点多态性。比较两组总体及亚组在GREB1各位点的等位基因频率、基因型频率分布差异。比较GERB1各位点不同基因型患者的骨密度值差异。结果两组总体在GREB1基因rs10929757、rs5020877位点的基因频率和基因型频率分布均无明显差异(P>0.05)。两组男性患者在rs10929757位点的C等位基因频率分别为骨折组36.5%、对照组52.2%,差异有统计学意义(P<0.05);两组男性患者在rs5020877位点的基因频率和基因型频率分布均无明显差异(P>0.05)。两组女性患者在rs10929757位点和rs5020877位点的基因频率和基因型频率分布无明显差异(P>0.05)。在rs10929757位点,总体、男性和女性患者中不同基因型患者骨密度值比较无明显差异(P>0.05)。在rs5020877位点,总体、男性和女性患者中不同基因型患者骨密度值比较无明显差异(P>0.05)。结论 rs10929757位点多态性与老年男性椎体骨质疏松性骨折存在相关性;未发现rs5020877位点多态性与老年椎体骨质疏松性骨折相关。

银鲫Greb1的克隆、表达及功能研究

为研究银鲫(Carassius gibelio)雌激素应答基因(Growth regulation by estrogen in breast cancer cell 1,Greb1)的表达特征和功能,采用RACE方法克隆了银鲫Greb1的全长cDNA(CgGreb1)。CgGreb1的cDNA全长为954 bp,其中包含一个765 bp的开放阅读框,编码255个氨基酸。大多数脊椎动物有多个Greb1的变体,长度为386—1988个氨基酸,其中CgGreb1是最短的一个。序列比对结果表明脊椎动物Greb1蛋白的N端区域极为保守,且CgGreb1位于Greb1蛋白的N端区域,该区域与其他脊椎动物Greb1的同源性超过60%。qRT-PCR结果显示,在成体组织中,CgGreb1主要在垂体、脑、性腺和肝脏中表达,其中在垂体中CgGreb1的表达最高;在注射促黄体生成素释放激素类似物和人绒毛膜促性腺激素后的雌鱼垂体中,CgGreb1的表达逐渐上升随后降低,并在产卵时维持较高的表达;在胚胎发育过程中,CgGreb1从50%外包开始表达,其表达量随胚胎发育而升高,在受精后24h达到峰值,随后表达量下降,在受精后48h不表达。原位杂交结果表明,在原肠期,CgGreb1信号位于胚层的边缘;在体节期,CgGreb1信号逐渐增强并出现在神经系统;在受精后24h,CgGreb1信号在脑和脊髓等中枢神经系统增强;从受精后30h开始,CgGreb1信号减弱;在受精后48h,检测不到CgGreb1信号。在注射CgGreb1 MO的银鲫胚胎中,tshβ、prl和gthα分别标记的3种垂体细胞减少,证明CgGreb1参与早期银鲫垂体细胞的发育。研究结果为进一步揭示银鲫垂体发育和生长调控机制奠定了基础。

钙蛋白酶2介导雌激素调控乳腺肿瘤细胞GREB1基因表达

目的:探讨钙蛋白酶2(CANP2)对17β-雌二醇(E2)刺激MCF-10A转化细胞增殖能力、GREB1基因表达的影响及其机制。方法:以乳腺癌MCF-10A转化细胞为研究模型,乳腺癌MCF-7细胞为阳性对照,采用E2(50 nmol/L)刺激2种细胞24 h后,平板克隆方法观察细胞的增殖能力;以0.1%的二甲亚砜(DMSO)刺激MCF-10A、MCF-7细胞作为阴性对照组,以CANP抑制剂Calpeptin(Calp)预处理2刺激的MCF-10A转化细胞1 h或shRNA-CANP2转染2刺激的MCF-10A转化细胞沉默基因表达,同时设立E2对照组和转染空载体E2对照组,采用qRT-PCR检测细胞中GREB1基因表达水平,平板克隆方法观察细胞的增殖能力。结果:与阴性对照比较,E2能上调MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞中GREB1基因表达(P<0.01,P<0.05);与E2对照组比较,Calpeptin能抑制E2上调MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞的GREB1基因表达,并促进细胞的增殖(P<0.01);与转染空载体E2对照组相比,shRNA-CANP2基因沉默能使MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞增殖能力减弱(P<0.01),并抑制E2刺激的MCF-10A转化细胞中GREB1表达的上调(P<0.01,P<0.05)。结论:可能通过CANP2 E2诱导恶性转化乳腺上皮细胞GREB1基因的表达和细胞生长。

去势对白来航母鸡垂体和肾上腺的影响

垂体和肾上腺在摘除卵巢的雌性动物性激素合成过程中起到重要作用。为研究去势对白来航母鸡垂体和肾上腺的影响,实验对6只9周龄白来航母鸡进行卵巢摘除手术,饲养至97周龄时,检测去势白来航母鸡与同周龄未去势母鸡的血清性激素水平、冠高和距长,比较分析垂体重、肾上腺重差异,并检测垂体发育相关基因GREB1的表达量。结果显示:去势母鸡雌二醇浓度(P<0.05)、肾上腺重量(P<0.01)以及GREB1相对表达量(P<0.05)低于未去势母鸡;冠高、距长和垂体重量高于未去势母鸡(P<0.05)。可见,摘除母鸡卵巢可抑制肾上腺发育,促进垂体发育。

1例肾脏发育不全或缺如3型胎儿产前超声表型及遗传学分析

目的分析1例GREB1L基因突变所致肾脏发育不全或缺如(RHDA)3型胎儿的产前超声表型和遗传学特征。方法2023年2月6日郑州大学第一附属医院诊治1例因产前超声异常行妊娠期遗传咨询的25岁孕妇,收集引产胎儿皮肤组织及夫妇双方外周静脉血,进行全外显子组测序,应用HGMD、ClinVar、ExAC、1000Genomes和gnomAD等数据库对基因突变位点进行检索;参照《遗传变异分类标准与指南》及美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)指南进行突变致病性评级;应用Uniprot数据库预测该基因编码蛋白质结构。收集夫妇双方及胎儿临床资料,分析胎儿产前超声表型和遗传学特征。结果孕妇经遗传咨询后引产1男胎。产前超声提示胎儿颈背部皱褶厚度增厚,双肾缺如,无膀胱和羊水,胃泡体积小和少量心包积液。胎儿携带GREB1L基因c.5429_5442dupGGCC(p.Ile1815fs)移码突变,父母均未携带该突变,属于新发突变,该突变未见文献报道,HGMD和ClinVar数据库未见收录。该突变导致氨基酸编码异常,引起蛋白质功能改变(PVS1);在ExAC、1000Genomes和gnomAD数据库均未发现(PM2_Supporting);为经双亲验证的新发突变(PS2);初步判定为致病性突变(PVS1+PM2_Supporting+PS2)。结论GREB1L基因c.5429_5442dupGGCC移码突变为新发突变,是导致该家系胎儿RHDA3型的遗传学病因,产前超声主要表现为双肾缺如。