GRHL2与MLH1的表达与非小细胞肺癌临床特征的相关性研究

目的探究粒状头样2(grainyhead like 2,GRHL2)表达、Mutl homolog 1(MLH1)甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床特征的相关性。方法回顾整理2016年1月至2021年4月在天津市滨海新区大港中医医院就诊,经手术并治疗确诊的NSCLC患者486例;整理所有患者临床资料,分析所有患者GRHL2、MLH1的表达情况、肿瘤分类、临床分期、预后等情况。结果486例NSCLC患者,在年龄>40、肿瘤大小>3cm、临床分期为Ⅱ~Ⅲ期、淋巴结发生转移、组织类型为鳞癌的患者较多,且差异较为明显(P均<0.01)。GRHL2在癌组织中379例呈现高表达,107例低表达,而在癌旁组织中187例呈现高表达,299例呈现低表达,GRHL2在癌组织中呈现高表达趋势,在癌旁组织中,呈低表达趋势;GRHL2在癌组织与癌旁组织的表达具有明显差异(P<0.01)。在NSCLC中MLH1基因甲基化占比为46.84%,其中部分甲基化为34.29%;完全甲基化为12.55%。在癌旁组织中甲基化占比为24.61%,其中部分甲基化为5.52%;完全甲基化为19.09%。NSCLC中MLH1基因甲基化程度明显高于癌旁组织(P<0.01)。Spearman分析显示,GRHL2的表达与肿瘤大小,临床分期,淋巴结转移均存在显著相关(P<0.01),与组织类型明显相关(P<0.05),但与年龄,性别无明显相关性(P>0.05)。MLH1甲基化、GRHL2高表达与NSCLC患者生存时间成反比(P<0.01)。结论MLH1甲基化、GRHL2差异表达与NSCLC患者肿瘤大小,临床分期,淋巴结转移情况密切相关,同时与患者预后具有明显相关性,在NSCLC的治疗过程中具有重要的参考价值。

哈尔滨地区老年性耳聋与GRHL2基因SNP位点的相关性

目的研究哈尔滨地区汉族人群老年性耳聋与GRHL2基因SNP位点的相关性,探讨GRHL2基因与老年性耳聋的遗传易感性的可能关系方法选择哈尔滨市区或郊县50岁以上449位中老年人作为研究对象,听力下降至少25分贝以上的224例为病例(老年性耳聋)组,听力下降小于25分贝的225例作为正常组。采用Sequenom Mass ARRAY特定SNP基因分析检测的方法,计数rs10955255,rs2127034,rs1981361多态位点的各组基因型频数和等位基因频数,应用卡方检验进行统计分析判断各组间差异。结果 rs10955255与rs2127034多态位点病例组与对照组比较,基因型及等位基因分布差别均无统计学意义(P>0.05);rs1981361多态位点病例组与对照组比较,基因型及等位基因分布差别具有统计学意义(P<0.05)。结论哈尔滨地区汉族老年性耳聋与GRHL2基因rs1981361SNP位点具有相关性,GRHL2基因可能是研究老年性耳聋遗传易感性的一个有意义的基因,本结果为进一步进行大规模多中心的相关方面研究提供了基础。

GRHL2基因多态性与噪声性听力损失易感性的关系

目的：探讨粒状头样2（grainyhead-like 2,GRHL2）基因多态性与噪声性听力损失（noise-induced hearing loss,NIHL）易感性的关系。方法：使用病例对照研究方法,对某钢铁厂3 790名噪声暴露作业人员进行流行病学调查和听力学测试,通过相关标准和匹配条件,共确定286例病例作为病例组和286例作为对照组。根据《工作场所物理因素测量噪声》（GBZ/T189.8-2007）检测噪声暴露强度,抽取病例组和对照组人群空腹外周静脉血2 m L,用于基因组DNA抽提,通过中高通量SNP分型检测技术检测GRHL2基因的5个单核苷酸位点的多态性（single nucleotide polymorphisms,SNP）。分别采用t检验和卡方检验比较病例组和对照组之间计量资料和计数资料的差异,采用多元Logistic回归分析GRHL2基因的5个SNP与NIHL的关系,利用Haploview软件和Phase软件进行基因单体型的构建和分析。结果：5个位点基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。在共显性模型下,调整累积噪声暴露量（cumulative noise exposure,CNE）、身高、吸烟、饮酒和血压状况后,与携带rs3735715位点GG基因型个体相比,GA基因型发生NIHL的危险性降低,OR=0.644（95%CI：0.442-0.939,P=0.022）;通过对CNE进行分层分析发现,在CNE≥98 d B（A）组,rs3735715位点与NIHL的患病风险仍有关,与携带GG型人群相比,OR值为0.509（95%CI：0.281-0.923,P=0.030）。单体型分析显示,四位点构成的单体型在病例组与对照组之间分布差异无统计学意义。结论：GRHL2基因单核苷酸多态性可能与NIHL易感性有关。

微小RNA-4652-3p通过下调GRHL2表达抑制肾癌细胞的增殖和迁移

目的观察微小RNA(miRNA)-4652-3p在肾癌组织中的表达及其对肾癌细胞增殖和迁移的影响。方法通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肾癌组织和癌旁组织、肾癌细胞系和正常肾小管上皮细胞系中miR-4652-3p的表达。选择miR-4652-3p表达量最低的肾癌细胞系分别转染miR-4652-3p模拟物(实验组)和无义序列(对照组)。采用MTT法检测细胞的增殖,采用细胞划痕实验评估细胞迁移的能力。miRWalk 2.0数据库预测miR-4652-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-4652-3p的靶基因。qRT-PCR检测靶基因的表达。Western blot检测靶基因蛋白和PI3K/Akt信号通路蛋白的表达。结果miR-4652-3p在肾癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.01),在肾癌细胞系中的表达低于正常肾小管上皮细胞,在786-O细胞系中的表达最低(P<0.01)。上调786-O细胞miR-4652-3p的表达可明显抑制细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.05)。miRWalk 2.0数据库显示miR-4652-3p的靶基因可能是粒状头样2(GRHL2),双荧光素酶报告基因实验证实miR-4652-3p与GRHL2配对结合(P<0.01)。相比对照组,实验组786-O细胞中GRHL2基因表达显著降低(P<0.01),PI3K/Akt信号通路活化被抑制。结论miR-4652-3p在肾癌组织中低表达,miR-4652-3p通过靶向干扰GRHL2基因表达,抑制PI3K/Akt信号通路的活化,从而抑制肾癌786-O细胞增殖和迁移能力。

GRHL2沉默对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨GRHL2沉默对肺癌A549细胞的增殖、凋亡的影响。方法利用RNA干扰技术,构建GRHL2沉默慢病毒表达载体,将肺癌A549细胞分为3个组,实验组:GRHL2沉默慢病毒感染的A549细胞系;阴性对照组:空载慢病毒感染的A549细胞系;空白对照组:不给予任何处理的A549细胞系。采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的强度,通过实时定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测肺癌A549细胞中GRHL2 mRNA和蛋白质表达水平。采用细胞计数试剂盒检测GRHL2沉默对A549细胞增殖的影响。采用Annexin V-APC/PI细胞凋亡检测试剂盒及流式细胞术分析GRHL2沉默对A549细胞凋亡的影响。结果实验组中GRHL2 mRNA及蛋白质表达水平均较空白对照组及阴性对照组显著降低(F=48.13、42.57,P值均<0.05),A549细胞的增殖能力明显下降(F=65.64,P<0.05),凋亡显著增强(F=56.76,P<0.05)。结论靶向沉默GRHL2能显著抑制肺癌A549细胞的增殖并促进其凋亡,GRHL2有望成为临床肺癌靶向治疗的新靶点。

沉默GRHL2基因表达对结直肠癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究粒状头样2(grainyhead like 2,GRHL2)基因在结直肠癌组织和细胞中的表达情况,以及沉默GRHL2基因表达对结直肠癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法检测人结直肠癌和癌旁组织以及结直肠癌HT29、SW480、SW1116、SW620、HCT116、Caco2和LoVo细胞中GRHL2 mRNA的表达水平。采用慢病毒感染的方法将携带有GRHL2-shR NA的重组慢病毒转入HT29和HCT116细胞;随后,分别采用CCK-8法和细胞克隆形成实验检测细胞的增殖能力,FCM法检测细胞周期的变化,蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白cyclin A、cyclin D1、p21和p27的表达水平。建立结直肠癌HT29和HCT116细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默GRHL2基因表达对结直肠癌细胞皮下移植瘤生长的影响。结果:GRHL2 mRNA在结直肠癌组织中的表达水平显著升高,其mRNA的平均表达水平是癌旁正常组织的2.8倍(P <0.001),结直肠癌HT29、SW480、HCT116、Caco2和LoVo细胞中GRHL2 mRNA的表达水平均较高。转入GRHL2-shRNA后,HT29和HCT116细胞中GRHL2 mRNA和蛋白的表达水平明显下调(P值均<0.001)。沉默GRHL2基因能明显抑制结直肠癌HT29和HCT116细胞的增殖能力(P值均<0.05),导致细胞阻滞在G1期(P值均<0.01);细胞周期相关蛋白cyclin A和cyclin D1的表达水平明显下调(P <0.05和P <0.01),p21和p27的表达水平则明显增加(P <0.01和P <0.05)。体内实验结果提示,沉默GRHL2基因表达能够显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。结论:GRHL2基因可以通过调控细胞周期相关蛋白的表达而促进结肠癌细胞的增殖。

粒状头样2在肺纤维化上皮间质转化中的作用研究

目的:探讨粒状头样2(grainyheas-like2,GRHL2)在肺纤维化上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用研究。方法:45只大鼠随机分为正常对照组,模型组及丙戊酸钠组,每组15只,模型组及丙戊酸钠组沿着气管注射博来霉素构建大鼠肺纤维化模型,正常对照组采用同样方法给予等量生理盐水。丙戊酸钠组大鼠腹腔注射200 mg·kg^(-1)·d^(-1)丙戊酸钠,正常对照组及模型组腹腔注射等量生理盐水,连续给药28 d。HE染色检测肺组织病理情况,Masson染色检测肺组织纤维化情况,碱水解法检测羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组化及Western Blot检测GRHL2表达,Western Blot检测EMT相关蛋白E-cadherin,α-平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA),Vimentin,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织肺泡结构被破坏,大量胶原纤维沉积,胶原染色面积比、Ashcroft评分及HYP含量升高(P<0.01),GRHL2阳性率及蛋白表达量降低(P<0.01),E-cadherin表达量下调(P<0.01),α-SMA,Vimentin,β-catenin,淋巴样增强结合因子(LEF)及基质金属蛋白酶7(MMP7)表达量上调(P<0.01)。与模型组比较,丙戊酸钠组大鼠肺泡组织结构较为完整,胶原纤维沉积程度较轻,胶原染色面积比、Ashcroft评分及HYP含量降低(P<0.01),GRHL2阳性率及蛋白表达量提高(P<0.01),E-cadherin表达量上调(P<0.01),α-SMA,Vimentin,β-catenin,LEF1及MMP7表达量下调(P<0.01)。结论:大鼠肺纤维化过程GRHL2表达量下调,进而激活Wnt/β-catenin信号通路,促进EMT生成,加重大鼠肺纤维化程度,丙戊酸钠能扭转此过程。

转录因子粒状头样2在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系

目的:探讨转录因子粒状头样2(GRHL2)在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系,为乳腺的临床治疗寻找新的靶点。方法:选取2010年1月至2017年1月在新乡市中心医院普外二科诊疗并经病理确认的初发乳腺癌患者88例的癌组织及相应的癌旁组织。免疫组织化学染色法检测GRHL2在乳腺癌组织及相应的癌旁组织中的表达,并分析GRHL2的表达水平与患者临床病理特征的关系;通过分析TCGA乳腺癌临床数据,探究GRHL2的表达与乳腺癌患者预后的关系。结果:乳腺癌组织中GRHL2的表达率(75.00%)明显高于癌旁组织(36.36%)(P<0.01)。TCGA数据库中114例正常乳腺组织以及1097例原发性乳腺癌组织中GRHL2的表达结果显示,原发性乳腺癌组织中GRHL2的表达高于正常乳腺组织,差异有统计学意义(P<0.01)。GRHL2的表达与乳腺癌TNM分期、组织学分级、HER2表达、淋巴结转移状态等相关(均P<0.05);通过分析TCGA数据库中1979例低表达GRHL2乳腺癌患者与1972例高表达GRHL2乳腺癌患者无复发生存期(RFS)结果显示,高表达GRHL2的乳腺癌患者RFS患者显著缩短(HR=1.24,95%CI:1.11~1.38,P<0.01);GRHL2表达差异对TNBC乳腺癌患者的RFS无明显影响(HR=1.30,95%CI:0.89~1.88,P=0.170);GRHL2的表达差异对ER^+乳腺癌患者的RFS无明显影响(HR=1.17,95%CI:0.76~1.78,P=0.470);但是高表达GRHL2的HER2+乳腺癌患者其RFS显著低于低表达GRHL2的HER2乳腺癌患者(HR=1.72,95%CI:1.11~2.68,P=0.015)。结论:GRHL2在乳腺癌组织中表达升高,并与HER2表达、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移密切相关,在乳腺癌发生发展过程中发挥重要作用,提示不良预后。

粒状头样2在结直肠癌组织中的表达及意义

目的：探讨结直肠癌组织中粒状头样2（ GRHL2）的表达情况及其与结直肠癌临床病理特征的关系。方法收集75例结直肠癌患者肿瘤组织及癌旁黏膜组织。采用免疫组化检测GRHL2的表达，采用实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）和Western blot检测75例结直肠癌组织及其癌旁黏膜组织中的GRHL2基因和蛋白的表达水平。结果免疫组化结果显示，GRHL2蛋白主要表达于结直肠癌细胞核中，在结直肠癌组织中的阳性率（61．3％）高于癌旁黏膜组织（44．0％，P＜0．01）。 qRT-PCR结果显示，结直肠癌组织中GRHL2 mRNA的相对表达水平为（2．64±0．35），高于癌旁黏膜组织（1．19±0．23，P ＜0．001）；Ⅲ～Ⅳ期患者肿瘤组织中GRHL2 mRNA的表达水平（2．84±0．36）高于Ⅰ～Ⅱ期患者（2．31±0．32，P＜0．05）。 Western blot检测结果显示，GRHL2蛋白在结直肠癌组织中的表达水平高于癌旁黏膜组织（ P＜0．05）。 GRHL2的表达与结直肠癌患者的肿瘤大小、TNM分期和Ki-67指数均有关（均P＜0．05）。结论 GRHL2在结直肠癌组织中呈高表达，GRHL2的表达与结肠癌的临床病理特征有关。