OLFM4^(GW112/hGC-1)、GRIM19及PIN1基因在12种人肿瘤细胞株中的表达分析

目的检测OLFM4GW112/hGC-1、GRIM19及PIN1基因在12种人肿瘤细胞株中的表达,并探讨与肿瘤细胞凋亡与周期的关系。方法利用RT-PCR半定量的方法检测GW112、GRIM19与PIN1三种基因在人12种肿瘤细胞株中转录水平。结果RT-PCR结果显示:12种人肿瘤细胞株中GW112、GRIM19与PIN1三种基因均有表达,未出现转录缺失。其中胃癌细胞SGC-7901与脑胶质瘤细胞CHG-5中的GW112表达明显强于GRIM19,而在其余十种细胞株中GW112表达却明显低于GRIM19。实验组细胞中,PIN1基因只在SGC-7901株与CHG-5株中表达较弱,其余表达均较强。结论GW112、GRIM19与PIN1在这些肿瘤细胞中的表达状况很可能与它们的周期调控和细胞凋亡有关,对三种基因的表达研究可进一步对分析三种基因的功能提供依据。

腺病毒介导GRIM19对恶性胶质瘤CHG-5细胞增殖及分化的影响

目的观察增强外源性GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)基因表达对恶性胶质瘤CHG-5细胞生物学特性的影响,初步探讨其机制。方法利用已成功构建的Ad-GRIM19腺病毒感染CHG-5细胞,通过形态学、细胞生长曲线、软琼脂克隆形成等观察增强GRIM19基因表达后CHG-5细胞形态、增殖和体外成瘤能力的变化,台盼蓝染色法检测细胞活力,Real-timePCR及Western blot检测STAT3与PCNA基因表达。结果Ad-GRIM19在体外感染CHG-5细胞后,明显改变CHG-5细胞生长形态,细胞增殖及体外成瘤减低,STAT3、PCNA基因表达下调。结论GRIM19过表达可显著抑制CHG-5细胞恶性表型,提示GRIM19基因在调控胶质瘤细胞分化程度及恶性生物学行为方面具有重要作用。

细胞死亡调控基因GRIM19重组腺病毒的构建及在恶性胶质瘤CHG-5细胞中的表达

目的构建细胞死亡调控基因GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤CHG-5细胞的感染效率。方法采用PCR方法分别将GRIM19以及EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5183(pAdeasy)菌内同源重组,筛选阳性克隆,酶切测序鉴定,线性化后转染293T细胞进行包装、扩增、纯化,PCR检测病毒上清,TCID50法测定病毒滴度并感染CHG-5细胞后Western免疫印迹法验证GRIM19蛋白表达。结果连接重组后经酶切和测序法筛选出pAd-GRIM19;转染293T包装细胞,观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,细胞生长状态良好,未见明显细胞毒作用。Ad-GRIM19及Ad-EGFP初纯病毒经氯化铯梯度离心纯化最终获得约5×1010U/ml与8×1010U/ml滴度的重组病毒;将其体外感染胶质瘤CHG-5细胞,均能达到90%左右的感染率,Western免疫印迹法表明Ad-GRIM19感染组GRIM19蛋白表达明显升高。结论成功构建了携带GRIM19基因的重组腺病毒,为体内外进一步研究GRIM19对脑胶质瘤的作用奠定了基础。

人F3-GRIM19基因的克隆与表达

目的:克隆GRIM19基因,并构建F3-GRIM19表达载体. 方法:从正常人胎盘组织中克隆GRIM19的cDNA,并构建了F3-GRIM19表达载体,测序正确后,表达并亲和层析纯化F3-GRIM19融合蛋白．结果:克隆后测序,发现其含有约580 bp的插入片段,基因与GenBank序列完全一致,读码框正确．在大肠杆菌中表达Mr 25 000的F3-GRIM19蛋白,灰度值分析表达量约占菌体总蛋白的25％．经纯化,目的蛋白纯度达90％,复性率为17.3％．结论:成功构建了F3-GRIM19原核表达载体,并成功表达纯化了目的蛋白．

TIAM1、GRIM19在Ⅰ型子宫内膜癌中的临床意义及预后影响

目的:研究TIAM1、GRIM19在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法:免疫组化法检测70例Ⅰ型子宫内膜癌、24例子宫内膜不典型增生、20例子宫内膜增生不伴不典型增生、28例正常子宫内膜组织中TIAM1、GRIM19表达,结合临床病例资料、随访资料及TIAM1、GRIM19蛋白表达水平对Ⅰ型子宫内膜癌患者进行预后分析。结果:TIAM1在正常子宫内膜、子宫内膜增生不伴不典型增生、子宫内膜不典型增生及Ⅰ型子宫内膜癌组织中呈递增表达(P<0.05),子宫内膜癌组织中TIAM1表达水平高于正常组和增生不伴不典型增生组,增生不伴不典型增生组高于正常组,差异有统计学意义(P均<0.05)。子宫内膜癌组织中TIAM1表达水平与分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与年龄、手术病理分期、脉管转移、绝经、合并高血压、合并输卵管堵塞、产次无明显相关(P>0.05);GRIM19在正常子宫内膜、子宫内膜增生不伴不典型增生、子宫内膜不典型增生及Ⅰ型子宫内膜癌组织中呈递减表达(P<0.05),子宫内膜癌组织中GRIM19蛋白高表达水平显著低于正常组和增生不伴不典型增生组,不典型增生组显著低于正常组(P均<0.05)。子宫内膜癌组织中GRIM19表达水平与分化程度、手术病理分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、脉管转移、有无合并高血压显著相关(P<0.05),而与年龄、绝经、有无合并输卵管堵塞和产次无明显相关(P>0.05)。子宫内膜癌组织中TIAM1与GRIM19蛋白表达呈负相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验表明,GRIM19对子宫内膜癌患者生存期有显著影响,GRIM19蛋白高表达者的总生存期和无瘤生存期均明显高于GRIM19蛋白低表达者(Log-rank分别为6.682和6.251,P分别为0.010和0.012);放疗组较未放疗组患者的总生存期和无瘤生存期长,化疗组较未化疗组患者的总生存期和无瘤生存期长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TIAM1与GRIM19蛋白对提示子宫内膜癌的预后有一定的临床意义,术后辅助放化疗在一定程度上可有效降低子宫内膜腺癌的复发率。

基于生物信息学分析STAT3、Grim19在卵巢癌中的表达及临床意义

目的研究STAT3、Grim19在卵巢癌中的表达情况、潜在功能、预后评估及临床意义。方法利用NCBI、UCSC、UniProt数据库检索STAT3、Grim19基本信息。使用PubMed数据库检索与STAT3、Grim19相关文献。利用GEPIA在线工具分析STAT3、Grim19蛋白之间的相关性。下载肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中包含STAT3、Grim19表达水平的卵巢浆液性囊腺癌临床病例资料并作生存分析。利用在线工具LinkedOmics筛选STAT3、Grim19相关基因。利用Omicshare在线软件对相关基因进行GO功能注释富集分析与KEGG通路富集分析。收集广西医科大学附属肿瘤医院2013年1月~2017年12月经手术治疗的115例上皮性卵巢癌标本,采用免疫组化法(IHC)检测STAT3、Grim19表达水平,并分析二者与预后评估的关系。结果STAT3、Grim19表达水平具有组织学特异性,STAT3在多种恶性肿瘤中表达上调,Grim19在多种恶性肿瘤中表达下调,且二者呈负相关。TCGA临床数据显示,STAT3高表达组中位生存时间与低表达组无明显差异(P>0.05),Grim19高表达组中位生存时间长于低表达组(P<0.05)。在检测的6426个基因中,2785个基因与STAT3具有相关性(P<0.05),其中相关系数最大的基因为DNAAF2;4960个基因与Grim19具有相关性(P<0.05),其中相关系数最大的基因为NDUFB7。GO功能注释富集分析结果显示,STAT3主要涉及生物学过程为细胞过程、单一生物过程、代谢过程、刺激反应等;主要涉及分子功能为结合、催化活性、信号转导活性等;主要涉及细胞组成为细胞质、细胞膜、细胞器等。Grim19主要涉及生物学过程为细胞过程、代谢过程、细胞组分组织或合成等;主要涉及分子功能为结合、催化活性、结构分子活性等;主要涉及细胞组分为细胞质和细胞器。KEGG通路富集分析结果显示,STAT3主要参与的细胞过程为分解和代谢,作用机体系统为免疫系统和内分泌系统,涉及细胞信号转导功能,在多种传染性疾病与恶性肿瘤中作用显著;Grim19信号通路在神经退行性疾病、内分泌和恶性肿瘤疾病中作用明显,参与如能量代谢、核苷酸代谢等多种生物学代谢过程(P<0.05)。广西医科大学附属肿瘤医院收集的115例临床病例标本IHC结果示,在上皮性卵巢癌中,STAT3、Grim19的表达水平与患者中位生存时间无明显相关,差异无统计学意义(P>0.05),Cox模型示年龄可能是影响上皮性卵巢癌的独立危险因(P<0.05)。结论Grim19有望成为评价卵巢癌预后的指标之一,可能经由STAT3调控卵巢癌疾病进展;STAT3经多种信号通路介导卵巢癌发生发展和耐药机制,有望成为卵巢癌靶向治疗的靶标。

细胞凋亡调节基因GRIM一19的研究进展

GRIM一19是维甲酸／干扰素联合应用诱导细胞凋亡相关基因中的一员，是由Angell等筛选出来的一个新的死亡相关基因，定位于人染色体19p13．1，是线粒体复合体I的组成成分。它可以特异性地与STAT3结合，通过下调STAT3的转录激活活性，抑制其靶基因的表达和细胞生长；此外还可以和蛋白GW112、NOD2等相互作用。国内外已经在原发性肾细胞癌等泌尿系统肿瘤、结直肠癌、甲状腺癌中对GRIM一19的表达进行了研究，提出GRIM-19可能成为一个新的肿瘤抑制基因，并可能成为评价疗效的有用的生物标记物和基因治疗的一个潜在的靶点。